一、人骨髓基质细胞的长期培养及其对病毒的敏感性（论文文献综述）
张帆帆[1]（2020）在《PEDV、PDCoV与SADS-CoV共感染IPEC-J2细胞的转录组学及基于TLR3、INSIG1介导的信号通路抗病毒研究》文中研究说明病毒性腹泻一直是困扰生猪养殖的重要疾病之一,疾病主要引起一周龄以内的仔猪呕吐、水样腹泻和脱水死亡。猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）是致仔猪死亡的头号杀手,感染率高达60%,死亡率可达100%;猪德尔塔冠状病毒（porcine deltacoronavirus,PDCoV）为仅次PEDV的猪肠道致病原,其感染率高达30%,死亡率高达50%以上。猪急性腹泻综合征冠状病毒（swine acute diarrhea syndrome coronavirus,SADS-CoV）又名猪肠道阿尔法冠状病毒（porcine enteric alphacoronavirus,PEAV）/猪肠道α冠状病毒（Se A-CoV）,是2017年初新发现的一种新型致病性肠道冠状病毒,临床发病时间比PEDV稍晚2-3天,临床症状也相较于PEDV要轻。中国是生猪养殖大国,年出栏生猪达7亿头,然后却未见对于南方地区PEDV、PDCoV、SADS-CoV流行病学和基因的遗传变异的长期观察,且临床上存在大量PEDV和PDCoV混合感染的病例,其致病机制尚未明晰。为此本研究主要针对以下几个方面进行研究:1、南方地区PEDV、PDCoV和SADS-CoV的流行情况调查及S1基因的遗传变异情况从江西、浙江、福建、广东、湖南五省份采集了2012-2019年间3051份粪便、小肠组织及母乳样品,使用本实验建立的RT-PCR方法对样品中PEDV、PDCoV、SADS-CoV进行流行病学调查,结果表明:PEDV阳性率最高,阳性率为57.06%;其次为PDCoV,阳性率为27.14%;SADS-CoV的阳性率最低,仅为0.23%,且仅福建地区的样品中检测出了SADS-CoV阳性样品的存在。在2012-2019年间,PEDV的阳性率一直维持在较高水平,2013年PEDV的阳性率最高,达62.13%,而2019年的PEDV阳性率最低,为45.31%;PDCoV的阳性率在2018年最高,2012年最低;而SADS-CoV仅在2017年福建采集的68份样品有检出,总阳性率为0.23%。在混合感染的样品中,PEDV和PDCoV混合感染样品数最多,最高可占17.33%;而在PDCoV阳性样品中,PEDV和PDCoV混合感染率最高为70.97%,最低为2014年的样品,为30.57%。挑选11株不同年份PEDV阳性样品进行的S1基因进行核苷酸与氨基酸进化树分析,结果表明:所扩增的PEDV S1基因均属于G IIa分支,证明华中地区主要流行G IIa毒株;且具有A518S、G521D、L522H/Y、S524G、V528I、T550S、S563F、G594S、A605E、L612F、F617L、K630T、E633V和I635V的突变为位点。挑选的8株PDCoV氨基酸进化树分析发现:扩增的PDCoV毒株以及所有中国毒株（AN-2004除外）和泰国毒株（TT＿1115）在N52处均具有氨基酸缺失。扩增的SADS-CoV-CH-NDFJ-2018S1基因与Gen Bank中41株参考株的核苷酸同源性均在97.2%-100%之间,氨基酸同源性在98%-100%;其中与SADS-CoV-CH-FJWT-2018（MH615810）毒株的同源性最低,与SADS-CoV＿GDLX/2019（MK651076）同源性最高。2、PEDV、PDCoV与SADS-CoV感染IPEC-J2细胞的生物学特性研究以IPEC-J2细胞为感染模型,使用PEDV、PDCoV、SADS-CoV单一/共感染IPEC-J2细胞,通过数据统计发现,PEDV单一感染IPEC-J2病毒拷贝数比PEDV+PDCoV及PEDV+SADS-CoV共感染中PEDV的拷贝数显着增加,说明共感染抑制/影响PEDV病毒的增殖。在PEDV+PDCoV共感染中PEDV的病毒拷贝数比PEDV+SADS-CoV共感染中PEDV的拷贝数显着降低,说明在共感染中PDCoV比SADS-CoV对PEDV增殖的影响要更为强烈。而PDCoV与PEDV或SADS-CoV共同感染时PDCoV的病毒拷贝数显着高于PDCoV单一感染时拷贝数,类似的现象在SADS-CoV病毒单一及与PEDV或PDCoV共感染中观察到。通过细胞免疫荧光还发现,不同病毒可以感染同一细胞,不存在排斥现象。3、PEDV、PDCoV、SADS-CoV单一感染和共感染转录组学比较研究通过转录组学分析PEDV、PDCoV、SADS-CoV单一感染和共感染IPEC-J2细胞后宿主基因差异性表达情况,进一步揭示PEDV、PDCoV、SADS-CoV单一感染和共感染的病毒致病机制和宿主的抗病毒机制的差异。在与PEDV的共感染与单一感染对比中,PEDV+SADS-CoV共感染在前期比PEDV+PDCoV共感染会引起细胞更加强烈的免疫反应,而PEDV+PDCoV共感染在后期诱导的炎症免疫反应强于PEDV+SADS-CoV;对表达差异基因进行生物信息分析发现,PEDV+SADS-CoV差异基因主要富集在细胞进中的氨基化合物的生物合成进程（amide biosynthetic process）、ATP生物合成进程（ATP biosynthetic process）和ATP代谢进程（ATP metabolic process）均显着升高,而在PEDV+PDCoV差异基因主要富集在固有免疫应答（innate immune response）、固有系统应答（immune system process）和免疫应答（immune response）中。在与PDCoV的共感染与单一感染对比中,PDCoV+SADS-CoV和PDCoV+PEDV共感染均随着感染时长的增加,差异基因数均不断上升;对表达差异基因进行生物信息分析发现,PDCoV+SADS-CoV比PDCoV+PEDV引起的细胞信号通路的变化更为显着,且聚类的通路有所差异。在24h时,PDCoV+SADS-CoV差异基因富集中固有免疫应答（innate immune response）、细胞因子应答（response to cytokine）、肿瘤坏死因子应答（response to tumor necrosis factor）等最显着,而PDCoV+PEDV差异基因富集中免疫系统进程、免疫应答、固有免疫应答等最显着。在与SADS-CoV的共感染与单一感染对比中,SADS-CoV+PDCoV共感染均随着感染时长的增加,差异基因数不断上升,而SADS-CoV+PEDV共感染组在48h时差异基因数有所下降。对表达差异基因进行生物信息分析发现,通过对不同时间点,对比SADS-CoV单一感染组与SADS-CoV和PDCoV共感染组GO富集分析:在6 h和24 h时,均无显着差异性通路富集;在48h时,有281个差异基因显着富集到细胞组分,仅微管细胞骨架（microtubule cytoskeleton）、细胞核（nucleus）、微管形成中心（microtubule organizing center）和中心体（centrosome）通路差异显着。对比SADS-CoV单一感染组与SADS-CoV和PEDV共感染组GO富集分析:在6 h时,有38个富集通路显着差异,其中病毒免疫应答相关通路差异显着,涉及的相关差异基因为RSAD2、MX1、DDX58、MX2、STAT1、OAS1、STAT2、CD40、IRF1、CCL5、ISG20等;在24 h和48 h没有发现显着差异富集通路。我们首次对通过转录组学分析PEDV、PDCoV、SADS-CoV单一感染和共感染IPEC-J2细胞后宿主基因差异性表达情况,研究结果为深入了解单一感染和共感染对宿主免疫应答机制的改变提供基础。4、TLR3通路对PEDV、PDCoV、SADS-CoV的影响TLR3是一种病原的模式识别受体,识别病毒感染产生的双链RNA结构后,通过诱导I型干扰素和促炎性细胞因子的生成,抑制病毒的复制。在进行转录组富集分析发现TLR3通路在单一感染和共感染组均出现显着上调。本实验在病毒感染前后使用poly（I:C）刺激IPEC-J2细胞发现,病毒感染前12h刺激对病毒复制的抑制效果更为显着;而使用BX795抑制TLR3通路的激活,可以促进病毒的复制。为了进一步确定是由于病毒感染激活TLR3引起宿主的免疫应答反应,使用pCAGGS-TLR3过表达质粒和pCDNA3.1-U6-TLR3干扰质粒分别转染IPEC-J2细胞,发现TLR3的过表达抑制了病毒的复制,并且引起了更加强烈的干扰素的产生,反之则降低了TLR3通路的激活促进了病毒的复制。5、PEDV、SADS-CoV和PDCoV结构蛋白与INSIG1相互作用机制在病毒感染宿主细胞的过程中,除了利用病毒自身的蛋白在一定程度上抑制宿主的免疫应答,还能在病毒感染期间调节固醇的合成作为促进脂质筏中病毒复制和病毒出芽的策略。胰岛素诱导基因（Insulin-induced genes,INSIGs）是近年来新发现的调控细胞固醇类物质合成与代谢的主要因子,病毒依靠其细胞宿主为成功复制提供能量和组成元件。为了探究PEDV、PDCoV、SADS-CoV影响胆固醇代谢机制,本实验利用病毒蛋白的过表达重组质粒转染IPEC-J2细胞,研究INSIG1与PEDV、PDCoV、SADS-CoV之间的相互关系。通过实验发现,INSIG1 mRNA水平和蛋白水平在PDCoV感染后期出现显着下调,而PEDV、SADS-CoV则出现显着上调,这促使我们对其感染机制的不同做出更深入研究。在本实验中,INSIG1过表达可以降低腹泻相关病毒的病毒拷贝数;INSIG1敲低可以显着促进病毒的表达。通过共感染的研究发现,与PDCoV的可以在一定程度上促进PEDV和SADS-CoV的增殖。因此,PEDV、PDCoV、SADS-CoV产生的蛋白可能会对INSIG1基因产生抑制作用。过表达三种病毒的结构蛋白和非结构蛋白的研究发现,病毒S蛋白可以显着抑制INSIG1的表达,而其他非结构基因ORF3、NS3、NS6、NS7、NS7a、NS7b可在一定程度上引起INSIG1的上调,存在一定的中和调节作用。这与病毒感染前期,INSIG1出现一定程度的上调有一定关系。为了进一步了解在感染的后期PEDV、SADS-CoV和PDCoV感染的IPEC-J2细胞INSIG1出现显着差异的原因,使用不同浓度的葡糖糖培养基培养三种病毒发现,INSIG1基因的表达水平的变化,依赖于葡糖糖浓度的影响。通过测定胆固醇代谢相关的INSIG1、AMFR、SCAP、SREBF1、INSIG2、DHCR24、LSS、MSMO1、OSBPL8变化水平发现,PDCoV感染组胆固醇合成相关的INSIG1、AMFR、SCAP、SREBF1出现显着下调,氧化固醇结合蛋白样蛋白8（Oxysterol Binding Protein Like Protein,OSBPL8）则显着上调。该研究为PEDV、PDCoV和SADS-CoV的相互作用及病毒和胆固醇代谢建立了新的联系,为将来研究PEDV、PDCoV和SADS-CoV共感染机制提供新的依据。
郭洋[2]（2019）在《人经血干细胞携带溶瘤腺病毒用于结直肠癌的治疗研究》文中进行了进一步梳理结直肠癌（Colorectal cancer,CRC）是一类常见的消化系统恶性肿瘤,严重威胁人类健康。传统的放化疗并不能显着提高患者的生存率,因而探索一种新型有效的结直肠癌治疗手段至关重要,近些年溶瘤病毒的肿瘤治疗应运而生。溶瘤病毒可选择性地在肿瘤细胞中复制并裂解肿瘤细胞,同时激活机体的抗肿瘤免疫反应;然而,直接通过静脉注射溶瘤病毒会引起抗病毒免疫反应而降低其作用效果,因而选择合适的载体将溶瘤病毒运输至肿瘤部位是实现安全、高效、精准治疗的关键。本研究我们利用人经血干细胞（Human menstrual blood-derived stem cells,Men SCs）运输溶瘤腺病毒,探索其作为载体的靶向运输能力和结合溶瘤腺病毒对CRC的治疗效果。MenSCs是近年来新发现的一种成体干细胞,与其他间充质干细胞相比,具有来源丰富、采集方便无创、体外扩增迅速、无伦理道德争议等优势。本研究中,我们首先从女性志愿者经血样本中分离获取经血源干细胞,并对其进行传代培养和相关表面标记的鉴定,进而探索其作为病毒运输载体的可行性和结合溶瘤病毒治疗CRC的有效性。为了优化溶瘤病毒对Men SCs的感染效率,我们构建了一种新型嵌合型的溶瘤腺病毒CRAd5/F11,将11型腺病毒的纤毛嵌入5型腺病毒结构中,这种嵌合型病毒主要通过识别细胞表面受体CD46感染细胞;通过一定滴度的CRAd5/F11感染后,Men SCs的细胞活性及其免疫表型并未受到明显影响,且Men SCs-CRAd5/F11细胞株在体内外迁移实验中均能够靶向肿瘤组织或细胞,证实了Men SCs作为溶瘤病毒靶向运输载体的可行性;我们进一步探索了Men SCs-CRAd5/F11细胞株对结直肠癌的治疗潜能,体外研究中,我们利用CCK8和细胞凋亡等体外实验检测了Men SCs-CRAd5/F11对肿瘤细胞的杀伤作用,最后在体内结直肠癌小鼠模型中通过不同方式对Men SCs-CRAd5/F11进行移植,一定时间后观察到小鼠肿瘤的生长明显受到抑制,由此证实利用Men SCs运载CRAd5/F11治疗结直肠癌的有效性。综上所述,Men SCs是一种充满潜能的细胞载体,其能够将嵌合型溶瘤病毒CRAd5/F11安全有效地运输至肿瘤部位并发挥抗肿瘤作用,利用Men SCs装载溶瘤病毒可实现对结直肠癌的病毒靶向治疗,为临床结直肠癌及其他肿瘤的治疗提供了理论依据。
李莉[3]（2014）在《HP-PRRSV HuN4株对仔猪骨髓感染与损伤机制的研究》文中进行了进一步梳理猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS）是由PRRS病毒（PRRSV）感染引起的一种以感染猪发热、厌食、母猪繁殖障碍、仔猪出现严重的呼吸障碍等症状的急性传染性疾病。最早于1987年在美国发现该病。自2006年以来,高致病性PRRS （HP-PRRS）在我国广泛流行,其主要特征为高热、高发病率以及高死亡率,给我国养猪业带来严重的经济损失。PRRSV属于动脉炎病毒科,动脉炎病毒属,为单正链（+）RNA套式病毒。目前认为该病毒能够引起机体严重的免疫抑制,是引起猪免疫紊乱的重要病原之一。其是宿主相互作用的机制还未清晰,尤其是对PRRS病毒（PRRSV）的感染对仔猪骨髓的损伤机制的研究较少。因此该论文选择宿主骨髓作为研究对象,对于深入探讨PRRSV对宿主中枢免疫器官的影响具有重要的科学意义。本实验室发现高致病性PRRSV （Highly pathogenic, HP-PRRSV） HuN4株感染断奶仔猪后呈现严重的临床症状。本实验目的是进一步探究HP-PRRSV HuN4株对断奶仔猪骨髓损伤的情况,以及骨髓内淋巴细胞亚群和外周血中淋巴细胞亚群的变化。对骨髓的损伤情况通过以下几方面进行评价：骨髓内病毒的感染情况,细胞凋亡情况,以及骨髓细胞感染病毒的类型,凋亡细胞类型以及凋亡与感染的共定位。实验结果发现HP-PRRSV HuN4株能感染仔猪骨髓细胞,在病毒感染后3d仔猪骨髓内病毒载量为1063±08copies/107events,在感染后7d病毒载量呈上升趋势,病毒载量达到107.5±1.1copies/107events,感染后10d病毒载量略有下降,病毒载量达呈106.1±0.4copies/107events。而HP-PRRSV HuN4F112感染组中,仔猪感染后期病毒载量一直存在较低水平,感染后7d病毒载量偏高,仅为103.2±0.4copies/107events。通过流式检测骨髓内凋亡细胞发现：在HP-PRRSV HuN4感染组,仔猪感染3d后骨髓细胞内凋亡细胞开始升高26.9±3.9%,感染后7d和10d凋亡细胞的数量显着增加,其分别为40.1±4.7%,45.7±5.9%,在HP-PRRSV HuN4F112感染组中则发现骨髓内凋亡细胞略微升高。仔猪感染3d后骨髓细胞内凋亡细胞开始升高26.8±5.9%,感染后7d和10d凋亡细胞的数量呈略微升高趋势,其分别为26.9±2.5%,27.7±2.9%,这些都显着高于对照组（p<0.05）。通过TUNEL法检测骨髓内细胞凋亡得到了进一步的验证,HP-PRRSV HuN4, HuN4F112均能引起骨髓内细胞的凋亡。此外,仔猪感染HP-PRRSV后骨髓出现较为严重的损伤,其中包括前体细胞和粒细胞在机体感染病毒后发生显着的细胞凋亡现象,并且在病毒感染后第7d和10d细胞凋亡率呈上升趋势。通过激光共聚焦进行扫描发现,SWC3+SWC8+/-细胞能感染病毒。此外骨髓内有大量的SWC3+SWC8+发生细胞凋亡。在凋亡与感染细胞类型鉴定中实验发现PRRSV感染的靶细胞发生凋亡,感染后期出现大量未感染病毒的骨髓前体细胞和粒细胞发生旁路凋亡,即除了感染的细胞发生凋亡,大量的未感染细胞也发生细胞凋亡。在实验过程中,骨髓内的CD3+细胞比例上调,显着高于对照组,通过流式检测发现HP-PRRSV HuN4株感染仔猪骨髓内CD4-CD8+以及CD4+CD8+细胞比例显着升高（p<0.05）,CD4+CD8以及CD4-CD8细胞比例显着减少（p<0.05）；同时研究发现外周血中的CD3+细胞数降低,出现瞬时减少现象,其进一步检测CD4CD8的细胞比例,发现这些细胞的比例与骨髓内的细胞呈相似趋势：此外,PRRSV HuN4F112感染组仔猪骨髓内T淋巴细胞的比例发生类似的变化。此外,血液中CD4-CD8+细胞比例显着增加（p<0.05）,而CD4+CD8细胞比例仅在感染后7d显着减少（p<0.05）。
马瑞萍[4]（2012）在《乙肝病毒体外自然感染人骨髓间充质干细胞的研究》文中进行了进一步梳理[研究背景]乙型病毒性肝炎,简称乙肝,是一种由乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）引起的世界范围传播的疾病。乙型肝炎主要通过与被感染的人的血液和其它体液的接触传染。HBV感染是引起慢性肝病、肝硬化、肝细胞肝癌的主要原因。据世界卫生组织报道,全世界有20亿人感染过HBV,其中3.6亿以上为慢性感染,每年大约有60万人死于HBV感染的相关性肝病及肝细胞肝癌。注射对抗HBV感染的疫苗是目前有效预防HBV的最佳手段,但是仍然不能阻止HBV的传播。HBV自然感染的宿主范围狭窄,只局限于人类和大猩猩,因此目前HBV的研究缺少合适的动物模型,HBV的研究更多的依赖于细胞模型。HBV DNA转染的肝癌细胞系是体外研究HBV的结构与功能、基因表达与调控,以及药物筛选及耐药机制的有力工具,然而病毒进入肝癌细胞系的方式不是正常的感染而是转染或者整合,因此肝癌细胞系不能用于研究早期病毒-靶细胞的相互作用（例如病毒的吸附,穿入、脱衣壳等）。原代人肝细胞对HBV有着天然的易感性,但是来源有限（新鲜的肝脏组织）,体外培养困难（不能传代、肝细胞特殊形态不能维持）等缺点限制了其做为细胞模型的可能。最近几年,与肝细胞相关的干细胞因为其强大的增殖能力和固有的生物学特性引起了人们的重视,肝细胞起源于骨髓细胞,骨髓细胞被视为肝细胞再生的重要源泉。骨髓间充质干细胞（bone-marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）在特殊的诱导条件下体外能够诱导成具有肝功能的成熟的类肝细胞,动物模型显示移植入体内的诱导前或者诱导后的BMSCs均能恢复受损的肝细胞。但是人BMSCs是否对HBV易感,是否能成为研究HBV的细胞模型目前尚未有报道。本研究用HBV体外自然感染人BMSCs,探讨人BMSCs做为细胞模型研究HBV最初生命过程、HBV生物学特性、HBV与宿主细胞相互作用的早期机制及HBV耐药机制的可能性。本研究分为2个部分：第一部分人骨髓间充质干细胞的分离、培养和纯化[目的]探讨从人骨髓中分离、培养、纯化、扩增BMSCs的方法,建立稳定的人BMSCs,为后续HBV研究提供可靠的细胞模型。[方法]1.密度梯度离心法结合贴壁筛选法及酶消化控制法分离、培养、纯化人BMSCs。2.观察人BMSCs的细胞形态学特点,绘制人BMSCs（P5）的生长曲线,计算细胞对数生长期倍增时间。3.流式细胞术检测人BMSCs（P5）的群体DNA含量分布（细胞周期）,常见的表面标志物。4.评估人BMSCs的传代、冻存和复苏的能力。[结果]1.成功分离培养了人BMSCs。细胞贴壁生长,形态均一,以梭形为主,边界清晰,胞核饱满居中,多成椭圆形,细胞排列具有一定方向性,密度高时成漩涡状或放射状排列。2.人BMSCs生长增殖旺盛,体外能长期培养扩增,生长曲线呈典型的“S”型,细胞对数生长期倍增时间为31h。符合间充质干细胞的特性。3.流式细胞术示人BMSCs细胞周期大部分处于静止期,小部分处于分裂周期,具有强大的增殖潜力；人BMSCs稳定高表达CD90、CD105,不表达CD34、 CD45。符合间充质干细胞的特性。4.人BMSCs可冻存,复苏后细胞形态学及生物学特性稳定,细胞生长增殖旺盛。符合细胞模型的特点。[结论]体外培养的人BMSCs生长稳定,增殖旺盛,能连续传代,可用于进一步的组织工程、细胞模型和分子生物学研究。第二部分乙肝病毒体外自然感染人骨髓间充质干细胞[目的]评估HBV体外自然感染人BMSCs后的复制、合成、表达能力,探讨人BMSCs做为细胞模型用于研究HBV的可能性。[方法]1. HBV DNA阳性（5.4×108copies/mL）的患者血清孵育培养的人BMSCs,感染细胞。2.荧光定量PCR方法检测HBV阳性血清孵育后的人BMSCs是否合成、分泌HBV DNA。3.DNA印迹法（Southern blotting）检测HBV是否在感染后的人BMSCs内有效复制,形成复制中间体：共价闭合环状DNA（covalently closed circular DNA, cccDNA）。4.电化学发光法检测HBV阳性血清孵育后的人BMSCs是否表达、分泌乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、e抗原（HBeAg）。5.间接免疫荧光方法检测HBV阳性血清孵育后的人BMSCs是否合成、表达乙肝病毒核心抗原（HBcAg）。6.阻断实验：将含10%的感染血清的双无培养基加入不同稀释度的抗HBsAg的特异性抗体按前述感染方法孵育人BMSCs检测病毒进入细胞的途径。[结果]1.HBV成功自然感染人BMSCs,感染后细胞形态学稳定,生长增殖旺盛。2.HBV阳性血清孵育后的第2天人BMSCs可以检测到HBV DNA,第6-12天维持在相对高的水平,HBV DNA最高值为9.37×105copies/mL; HBV阳性血清孵育后的第3-15天BMSCs培养上清中可以检测到HBV DNA, HBV DNA的含量分布在3.792×102copies/mL和4.067×105copies/mL之间。3. Southern blotting检测显示人BMSCs在HBV阳性血清孵育后第2天就可检测到HBV cccDNA的微弱信号（2.0kb）,阳性信号随着培养进程的推进而增强。4.HBV阳性血清孵育后的人BMSCs能够持续分泌HBsAg和HBeAg到培养上清中。感染后第2-16天培养上清中能检测到HBsAg,最低值是1.612IU/mL,最高值是118.100IU/mL;感染后第5-13天培养上清中能检测到HBeAg呈阳性表达；HBeAg检测最低值是0.115s/co （absorbance rate/cut-off ratio）,最高值是3.407s/co （≥1s/co为阳性）。5.HBV阳性血清孵育后的第2天开始人BMSCs可以检测到HBcAg。间接免疫荧光染色表现为胞浆内强烈的弥漫性着色,细胞核部分着色,大约7%的细胞核呈阳性表达,且数目随着培养进程的推进而增多,第9天达高峰,大约20%的细胞核呈阳性表达。6.抗HBsAg的抗体能够阻断HBV进入人BMSCs,阻断率与抗HBsAg的抗体的浓度有明显的量效关系。[结论]人BMSCs对HBV自然感染易感,能在病毒侵入后启动有效的病毒复制,形成复制中间产物HBV-cccDNA,表达HBV特异性抗原并合成子代病毒颗粒分泌出细胞。人BMSCs可以作为细胞模型用于研究HBV自然感染,进行HBV感染宿主细胞的早期过程（粘附、穿入、脱衣壳）及机制的研究,进行病毒-靶细胞相互作用机制的研究。
向钊[5]（2011）在《荣昌猪BMMNCs诱导分化及其BPI表达与抗病性的研究》文中进行了进一步梳理疾病给猪生产带来很大的养殖风险并增加防疫治疗成本,而且预防和治疗的大量用药,导致猪肉食品安全受到潜在威胁。从遗传上降低猪的疾病易感性和提高抗病能力,可以很好解决此问题。BPI基因在其他物种已经研究比较多,有希望成为抗病育种的候选基因。荣昌猪作为地方猪品种,具有抗病抗逆性能好的特点。本研究从体外培养诱导分化荣昌猪骨髓单核细胞（Bone Marrow Mononuclear Cells, BMMNCs）来研究荣昌猪中性粒细胞表达杀菌/通透性增强蛋白基因（Bactericidal/Permeability-Increasing Protein, BPI）的规律,为猪抗病育种提供参考。1猪骨髓单核细胞培养优化改进并建立了市售排骨分离猪BMMNCs的新方法,将市售排骨分离获得的猪BMMNCs细胞与无菌手术条件取得的肋骨分离的猪BMMNCs细胞,经过台盼蓝染色测定活细胞率,差异不显着。使用市售排骨进行猪BMMNCs培养,为造血干/祖细胞、间充质干细胞、骨髓多能干细胞移植等研究提供了便利。研究筛选适宜猪BMMNCs的培养条件为：液体培养,使用RPMI-1640培养液,添加15%FBS,培养环境为5%C02,37℃,饱和湿度。虽然采用离体肋骨分离猪BMMNCs,污染机会并没有显着增加,100U/mL双抗即能达到效果。2猪骨髓单核细胞增殖采用细胞计数、MTS/PMS法结合的方法探讨猪骨髓单核细胞的增殖,研究了胰岛素、地塞米松、SCF、G-CSF、GM-CSF等因子对骨髓单核细胞增殖的影响,筛选出促进增殖的最佳浓度SCF为30ng/ml, G-CSF为40ng/ml, GM-CSF为80ng/ml, IL-3为100ng/ml, IL-6为150ng/ml。胰岛素与地塞米松对猪BMMNCs增殖促进作用不显着。3猪骨髓单核细胞分化采用瑞氏染色、苏丹黑B染色、墨汁吞噬试验、热盐水溶核试验等方法研究不同培养条件下猪中性粒细胞的分化。瑞氏染色、苏丹黑B染色能较好反映分化状态,而墨汁吞噬试验、热盐水融核试验对荣昌猪中性粒细胞的分化展示作用不好结果表明LPS、地塞米松具有显着促进中性粒细胞分化作用,胰岛素、IL-3、IL-4促进中性粒细胞分化作用不显着。体外培养的荣昌猪BMMNCs可以进行中性粒细胞分化,但分化到杆状核和分叶核中性粒细胞阶段的很少见。改进染色与杂交用载玻片。常规细胞涂片或细胞爬片,不能在同一张载玻片上同时对多个组进行染色或杂交操作,不同载玻片进行操作必然加大操作误差。本研究将载玻片用疏水的蜡划分成12格,在不同格里涂不同组细胞悬液,可以同时对12组细胞染色或杂交操作,保证条件完全一致,效果优于常规方法。该载玻片专利申请号201120301873.8。4荣昌猪骨髓单核细胞中BPI表达设计2个mRNA原位杂交探针,5’-CGTGGACACCTTGGGTATGA G-3和5’-TGCTGCTGTTCATCTCAATC-3’,在猪早幼中性粒细胞可以检测到杂交信号,说明在早幼中性粒细胞阶段,BPI就开始表达。经过LPS不同时间刺激后,培养BMMNCs中不同阶段的中性粒细胞BPI mRNA原位杂交阳性率上升,说明LPS可以促进BMMNCs中BPI mRNA合成。5不同SNP基因型的荣昌猪骨髓单核细胞中BPI表达与攻毒试验利用PCR-SSCP技术对荣昌猪外显子3进行基因型判定,选择不同外显子猪取BMMNCs进行培养并进行BPI mRNA原位杂交,结果表明不同外显子对骨髓单核细胞中BPI表达影响不显着,但在LPS刺激下,GG基因型的BMMNCs细胞中不同分化阶段的粒细胞中阳性率上升程度高于AA基因型,并且在攻毒试验中,GG和AA基因型均未表现出对致病性大肠杆菌的具有抵抗作用,但GG基因型个体症状较轻,恢复时间短于AA基因型个体。
夏曦[6]（2010）在《间充质干细胞携带选择复制性腺病毒靶向肿瘤治疗的研究》文中研究指明研究背景和目的以腺病毒介导的基因治疗在肿瘤疾病治疗中取得了较大进展。既往,国内外学者通过对病毒结构的改造,如Fiber区,E1A区pRb结合位点,E1B区p53结合位点以及外原性增加特异性启动子等,使其获得了一定的选择感染性,选择复制性或者选择表达性。其目的在于仅杀伤肿瘤细胞,而对正常细胞无毒性作用。尽管如此,选择复制性腺病毒的应用和发展仍存在的一定局限性,主要表现在：（1）其在体内全身分布存在“器官隔绝”效应的“肝嗜性”；（2）宿主对其产生中和抗体而导致其被快速免疫清除。这些障碍导致了腺病毒的应用途径仅停留在局部注射阶段。静脉注射或其它全身给药方式导致绝大部分腺病毒要么被机体免疫系统清除,要么被滞留于肝脏。到达病灶局部的病毒量几乎微乎其微。治愈肿瘤性疾病不仅依赖于原位病灶的清除,更依赖于宿主全身无法通过局部给药方式清除的转移性病灶。间充质干细胞（MSC）的研究已成为近年来一个热点。其在造血干细胞移植,移植物抗宿主免疫排斥反应（GVHD）,组织损伤与修复,炎症反应,心肌梗死,神经细胞再生中发挥了重要作用。更为重要的是,其与肿瘤关系密切。肿瘤病灶由肿瘤实质与间质组成。有学者报道,其可归巢于肿瘤局部,作为肿瘤间质的前体细胞,参与肿瘤的组成。本研究旨在探索和研究间充质干细胞装载选择复制性腺病毒靶向归巢于肿瘤局部并发挥杀伤效应治疗肿瘤性疾病的思路和方式。为肿瘤性疾病病毒介导的基因治疗提供新的方向。方法1间充质干细胞平台的建立以及其携带与释放病毒的能力（1）密度梯度离心法联合贴壁剔除法自健康成人骨髓中分离获得间充质干细胞并行体外传代培养；（2）流式细胞技术及免疫荧光激光共聚焦显微镜鉴定其分子表面标记物表达情况；（3）应用条件培养基诱导细胞分化,阿辛蓝、茜素红及油红染色验证多向分化潜能；（4）流式细胞仪检测病毒转染能力,透射电镜观测细胞内病毒颗粒；（5）结晶紫染色检测病毒释放的时间依赖性与剂量依赖性关系；（6）50%组织培养感染剂量法（TCID50）检测释放病毒的滴度；（7）实时定量PCR检测病毒复制能力；（8）G显带技术分析转染选择复制性腺病毒后的MSCs染色体核型。2体外验证MSC携带选择复制性腺病毒后对肿瘤细胞及正常细胞的杀伤能力（1）相差显微镜观察携带有选择复制性腺病毒的MSC对肿瘤细胞（MDA-MB-231, MDA-MB-435）及正常血管内皮细胞（HUVEC）产生细胞病变反应能力（CPE效应）：（2）原位杂交验证病毒在细胞中复制情况；（3）流式细胞仪检测MSC携带病毒引起的细胞凋亡分析；（4）免疫蛋白印迹技术（Western blot方法）检测靶细胞中Stat3及其下游通路信号分子的变化情况。3体内验证间充质干细胞归巢能力（1）苏木素伊红染色验证裸鼠原位乳腺癌模型；（2）体外验证超顺磁性三氧化二铁颗粒（SPIO）对间充质干细胞标记浓度及效率（3）冰冻切片普鲁士蓝染色验证间充质干细胞体内归巢能力；（4）流式细胞仪检测细胞示踪剂（Cell tracker Red）对间充质干细胞的标记浓度及效率；（5）激光共聚焦显微镜观测携带选择复制性腺病毒后的间充质干细胞的归巢能力。4体内验证间充质干细胞携带选择复制性腺病毒对肿瘤的靶向杀伤效应（1）定期测量各治疗组瘤体长径和短径,计算其瘤体大小；（2）免疫组织化学检测各组肿瘤组织Ki67及Cleaved Caspase3表达情况；（3）免疫蛋白印迹技术（Western blot方法）检测Stat3分子及下游分子的变化情况；（4）随访各治疗组老鼠生存预后情况。结果1.成功分离并培养人骨髓来源间充质干细胞；其阳性表面标记物CD44、CD90及CD105均有高于95%以上的表达,其阴性表面标记物CD34、CD45及CD19表达均低于5%；分离获得的间充质干细胞具有成骨、成脂以及成软骨等多向分化潜能；在高于500MOI滴度下,间充质干细胞具有高于90%以上的病毒转染效率；选择复制性腺病毒可在间充质干细胞中进行有效指数倍数扩增,并在96小时后完全释放。2.经过间充质干细胞复制后释放出来病毒可在肿瘤细胞中复制,对肿瘤细胞产生明显细胞病变效应（CPE效应）,并产生的一定诱导凋亡作用,且其凋亡率显着高于直接用相同初始病毒剂量产生的杀伤作用；这种杀伤作用与间充质干细胞和肿瘤细胞共培养的比例成正相关；与对照组相比,间充质干细胞携带病毒组对肿瘤细胞中Stat3、p-stat3及下游Survivin、Bcl-xl、C-myc分子均有明显下调作用。3.间充质干细胞具有显着归巢于肿瘤组织的能力,24小时后主要分布于肿瘤组织边缘,72小时后主要分布于肿瘤实体内部。携带选择复制性腺病毒Adv-stat3（-）后的间充质干细胞仍具归巢能力,24小时,间充质干细胞主要分布于血流丰富的器官如肝、脾、肺。24小时后,肝、脾、肺组织中的间充质干细胞逐渐减少,而肿瘤组织中间充质干细胞数量明显增多。4.与单独腺病毒组、MSC组及PBS组相比,间充质干细胞携带选择复制性腺病毒Adv-stat3（-）可通过在肿瘤局部抑制Ki67表达,增强Cleaved Caspase3,从而抑制肿瘤生长,诱导肿瘤细胞凋亡,明显提高小鼠生存时间。结论间充质干细胞不仅可携带选择复制性腺病毒靶向肿瘤局部,并作为其复制扩增场所,抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡。
柳夫义[7]（2009）在《骨髓来源Flk-1+CD34-间充质干细胞治疗大鼠脑出血的实验研究》文中研究说明研究背景和目的脑卒中包括脑梗死和脑出血,目前是致死和致残的最主要原因之一。对于神经组织损伤导致的功能障碍目前尚没有有效的治疗方法。近来干细胞的研究的进展给脑卒中的治疗带来曙光,多种来源的干细胞或前体细胞被用来治疗脑卒中的研究,包括胚胎干细胞（ES）诱导分化而来的神经前体细胞、胚胎或者成体脑组织来源的NSCs以及各种来源的间充质干细胞（MSCs）。其中MSCs作为一种成体干细胞,因为不涉及伦理问题,非常具有应用前景。干细胞治疗的目标最初是设想通过干细胞移植来替代修复损伤的神经组织,但大量的实验研究一直没有提供可靠的证据。近来的一些研究则显示外源性细胞可能作为一种营养支持机制,促进内源性神经、血管以及突触连接的再生从而发挥作用;最近的研究则显示减少神经元的死亡、减轻炎症反应、减轻瘢痕形成和促进白质的功能再塑可能是更重要的机制。近年来逐渐出现了一些利用干细胞治疗脑卒中的临床Ⅰ期实验,其中最受关注的是MSCs,本课题组也在进行MSCs的临床前期实验。但MSCs用于临床还面临许多问题:1、具体的治疗机制目前还不明了;2、细胞移植的时间、移植途径、移植细胞的数量尚需实验比较选择和确定;3、MSCs虽然可以自体移植,但临床上常常会遇到一些需要异基因移植的紧急情况;脑卒中患者多数是老年患者,其从其自体骨髓分离MSCs效率低,结合MSCs免疫原性低的特点同种异基因移植似乎更具有优势;实验研究以及临床前的安全性评估均需要使用MSCs进行异种移植,但移植免疫排斥的问题一直没有系统的研究。本课题研究目的一是探索MSCs治疗大鼠脑出血模型中最低的有效剂量,以便为灵长类动物实验及临床实验确定移植细胞数量提供参考依据;二是探索MScs可能的治疗机制;三是探讨MSCs的免疫原性,异种移植中的免疫排斥问题以及多次移植的可行性及有效性。研究内容和方法本课题研究分为两大部分。第一部分:探索MSCs治疗大鼠脑出血模型的有效性和最低有效剂量;分为3个剂量组和一个对照组即A:2×105/15ul/只（即1×106/kg）、B:4×104/15ul/只（即2×105/kg）、C:8×103/15ul/只（即4×104/kg）、D:空白对照;同时探讨其治疗机制;第二部分:以人外周血单个核细胞作为对照,研究MSCs间隔2周两次脑内移植后细胞存活情况、局部免疫排斥、动物行为改善情况,以MSCs作为刺激细胞与大鼠外周淋巴细胞进行混合淋巴细胞培养观察MSCs的免疫原性和免疫调节作用。研究结果1、2×105/15ul/只（即1×106/kg）剂量组可以明显改善大鼠的功能评分;4×104/15ul/只（即2×105/kg）剂量组仅在3天和1周时行为学评为有统计差异,其他观察点未见改善;低剂量组未见行为学改善;2、MSCs移植后并不改变血肿的大小,但可以明显减轻血肿周围的炎症反应（治疗组ED1+和MPO+细胞减少）;RT-PCR测定发现IL1β、IL2和TNF-α含量较对照组明显减少;3、治疗组病灶周围细胞凋亡明显减少,Niss1染色神经元计数较对照组多,Niss1小体消失较对照组少;4、MSCs移植后主要集中在血肿周围,MSCs集中的区域新生血管明显增多;部分移植细胞沿血管壁排列,可疑向内皮分化;5、MSCs异种移植未见诱导明显的特异性免疫排斥反应,第二次移植后细胞存活情况通初次移植没有差异,局部炎症反应也没有明显差异;对照组（人外周单核细胞）第二次移植后局部则发生明显炎症反应;6、两次移植MSCs组动物行为学改善较急性期一次移植效果好;本部分实验同时观察到造模后2周移植MSCs仍然可改善动物行为评分,但疗效较急性期移植差;慢性期移植后细胞存活的数量较急性期多;7、混合淋巴细胞培养提示MSCs本身并不能刺激大鼠外周血淋巴细胞增殖,而且可抑制ConA刺激的大鼠淋巴细胞增殖;结论2×105/15ul/只（即1×106/kg）剂量可以有效改善大鼠行为功能,最低的有效剂量可介于4×104/15ul/只（即2×105/kg）二者之间;MSCs治疗机制包括减轻出血后的炎症反应,减少神经元凋亡,促进血管再生。MSCs异种移植未见明显的免疫排斥,不诱导机体产牛特异件免疫应答,多次移植可以改善功能恢复。
郭志廷[8]（2006）在《经分子修饰的人参皂苷的免疫调节作用及机理研究》文中研究指明人参皂苷是人参主要的有效成分之一,大量研究表明,其具有抗肿瘤、抗病毒、降血糖和提高机体免疫力等作用。现代研究发现,多糖分子结构上的某些羟基被一定数目的硫酸基团取代后,相关生物学活性增强,受此启发,对人参皂苷（包括人参总皂苷和人参皂苷-Rh2）的分子结构进行了硫酸化修饰,并进一步验证了硫酸化修饰前后的人参皂苷对小鼠主要免疫细胞及相关细胞因子的影响。应用MTT法测定人参皂苷及其衍生物对小鼠脾淋巴细胞的毒性和对ConA或LPS诱生小鼠脾T、B淋巴细胞的增殖,乳酸脱氢酶释放法测定NK细胞的杀伤活性,中性红吞噬试验测定腹腔巨噬细胞的吞噬功能,双抗体夹心ELISA法测定人参皂苷及其衍生物对脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ及腹腔巨噬细胞分泌TNF-α含量的影响,硝酸还原酶法测定腹腔巨噬细胞分泌NO的含量。结果表明,人参皂苷及其衍生物均能显着促进ConA或LPS诱生脾T、B淋巴细胞的增殖,提高NK细胞对YAC-1的杀灭作用,增强巨噬细胞吞噬中性红的能力及其代谢功能,促进ConA诱生脾淋巴细胞分泌IFN-γ和LPS诱生腹腔巨噬细胞分泌TNF-α,但衍生物的促进作用更强。不同浓度的人参总皂苷及其衍生物均抑制了ConA诱生脾淋巴细胞分泌IL-2和LPS诱生腹腔巨噬细胞分泌NO,但衍生物的抑制作用明显减弱。同浓度的衍生物与总皂苷相比较,对细胞因子分泌的影响表现出极显着差异。与人参皂苷相比较,衍生物对小鼠脾淋巴细胞的毒性降低,从免疫细胞水平和细胞因子水平上增强其免疫活性,能提高抗肿瘤相关细胞因子的促诱生作用。
孙红颖[9]（2004）在《来源于人树突状细胞和骨髓基质细胞的两个新分子CRL2和CLM的克隆与功能的研究》文中认为一．来源于人树突状细胞的Ⅰ型细胞因子受体CRL2的表达分布和功能的初步研究 树突状细胞（Dendritic Cells，DC）是人体免疫系统最重要的抗原递呈细胞，通过对人DC的cDNA文库进行大规模测序，我们分离到一个新型的Ⅰ类细胞因子受体并命名为CRL2，文章发表于BBRC（2001；281：878-83），同一年，美国DNAX研究所证实了人胸腺基质细胞来源的淋巴生成素（human Thymic Stromal Lymphopoietin，TSLP）是TSLPR的细胞因子，通过同源性的比较发现，CRL2就是TSLPR。CRL2和IL-7受体IL-7R共同组成了受体复合体参与TSLP的信号传导过程。这个研究所在研究TSLP的功能方面做了大量的工作，并且发现了TSLP具有许多重要的功能：TSLP主要作用于造血系细胞，它可以促进DC的成熟并可以抑制其凋亡过程，TSLP处理过的DC可以调节CD4+和CD8+T细胞在炎性过程中的反应。人们发现，小鼠如果大量表达鼠的TSLP就会导致混合型冷球蛋白血症并发肾脏疾病，这种疾病和人的冷球蛋白相关的血管球型肾炎比较类似。所有上述的工作都证明了TSLP在各种的生理及病理过程中都起到重要的作用。 在这项工作中，我们对TSLP的受体分子CRL2和IL-7R的表达分布做了进一步的研究，并对它的生理功能做了初步的探讨。 在2001年我们实验室发表的工作中，主要研究了CRL2在不同肿瘤细胞和人体组织中的分布。CRL2分子由349个氨基酸残基构成，包括22个氨基酸构成的信号肽样结构及20个氨基酸构成的跨膜区，210个氨基酸构成的细胞外段具有Ⅰ型细胞因子家族典型的结构域（PSDWS），细胞内段含有BOX1结构，可以和一些激酶结合。在 浙江大学博士学位论文人的所有的分子中，CRLZ与IL一13受体的界结构最为类似，其同源性为26%.Northernblot分析结果表明，CRLZ严格的表达在脾脏和外周血白细胞上，而其他组织包括胸腺、前列腺、翠丸、卵巢、小肠、大肠、心脏、脑、胎盘、肝脏、骨骼肌、肾脏和胰腺都没有表达。 在这部分工作中，我们主要研究了CRLZ在不同细胞系或不同细胞系在不同刺激条件下的表达。主要研究了外周血单核细胞来源的 MoDC在不同条件刺激的情况下的CRLZ表达。DC在受到LPS的作用时，其表达升高非常明显，另外在活化型抗CD4O抗体的作用下，12小时后就有明显的升高，在24小时后略有下降，但表达t仍旧非常高。外周血诱导的DC随着培养时间的改变，CRLZ逐渐开始表达。 CRLZ在新鲜分离的外周血单核细胞中没有表达，在LPS刺激时，其表达明显，这个结果和我们从前的工作是一致的。我们还检测了THP一1细胞在不同的刺激条件下如TNF一a、CpG ODN、HZOZ和NO作用下的表达情况，结果发现THp一l在受到上述刺激时，表达的CRLZ略有升高，但远没有前面几种细胞变化明显。另外，我们还检测了CRLZ在其他一些造血系细胞中的表达情况，如BMSCs细胞在受到PMA刺激时，可呈现诱导性表达，Jurkat细胞，NK92细胞在合适的条件下，也可出现CRLZ的表达。在肿瘤细胞中，CRLZ的分布是较广泛的，在检测的几种细胞中都有程度不同的表达分布。 作为一个与CRLZ共同组成受体复合体的分子，IL一7R的表达分布与CRLZ的分布的相关性对TSLP的功能发挥是至关重要的。我们同样也研究了IL7R的表达分布情况。令人感兴趣的是IL一7R的表达方式和CRLZ的表达方式相类似，DC在活化型抗CD4O抗体的作用下，IL一7R表达升高明显，变化趋势与CRLZ完全一致。在LPS的刺激下，IL一7R升高明显。在DC的培养阶段，IL一7R的变化趋势与CRLZ一致，都是在第5天有升高的现象。 用与检测CRLZ相同的模板来观察IL一7R在THP一1中的表达时，发现其表达升高不是非常明显。在BMSCs细胞中，IL一7R在受到LPS或PMA的刺激时，表达略有下降。在肿瘤细胞中的表达范围要比CRLZ小，仅仅在HeLa、A172和CaoV中有表达。 作为同一个受体复合体的两个分子，CRLZ和IL一7R的结构也是最为相似的，它们的同源性为39%。二者表达的一致性在另外一点也说明他们是协同发挥作用的。 浙江大学博士学位论文LPS是一个强有力的炎性因子，它可能导致致命的炎性反应的发生。LPS引起的信号传导途径可以导致细胞发生一系列的反应，使基因的表达发生改变，调节免疫功能。包括产生一些趋化因子及产生热休克蛋白等。DC是最重要的抗原递呈细胞，LPS刺激导致两种细胞因子受体的表达大大升高，可能使DC对TSLP的敏感性加强，从而引发进一步的生物学效应。 同时，我们也研究了TSLP的表达分布情况，仅仅在胎肺和胎肺来源的W卜38细胞中检测到了TSLP表达，根据已知文献的报道IL一7R同时也是比一7的受体，在我们的试验条件下，仅仅在骨髓基质细胞和SMMC7721细胞中检测到其表达。 转染了TSLP表达载体的细胞能够表达分子量约为25kDa的蛋白质，这可能与TSLP分子上有糖基化位点有关。表达的TSLP蛋白能够分泌到细胞外，所以，我们选用了?
胡小毅[10]（2004）在《间断压力对体外培养成人骨髓基质细胞的作用研究》文中研究指明目的：骨组织工程目前尚未能广泛地应用于临床，主要原因是各项研究内容实验依据尚不充分，大多停留在动物实验阶段。本实验借鉴前人的研究成果，取成人的骨髓液分离纯化得骨髓基质细胞进行体外培养，并对细胞施加间断气体压力，观察细胞在加压后的增殖及分化情况，以获得更多种子细胞，为骨组织工程学研究内容提供更多实验室依据，从而促进骨组织工程应用于临床。 材料与方法：取无骨髓疾病患者骨髓经分离纯化后得骨髓基质细胞，将细胞分为细胞检测组和原代压力实验和传代压力实验组。（1）细胞检测组：细胞接种于6孔板，用含有诱导因子的培养液培养。通过倒置显微镜和HE染色观察细胞大体形态；通过扫描电镜和透射电镜观察细胞超微结构；通过碱性磷酸酶染色、钙结节染色对细胞定性。另设对照组不加诱导因子，其余条件与实验组相同。（2）原代压力实验组：将细胞接种于96孔板内，在原代培养72Hour时将培养板以封口膜封闭后置于压力装置内，每天施加压力8小时，压力大小为0.098Mpa，按照加压15分钟→放压15分钟→加压15分钟的顺序，连续9天。另设对照组不加压力，其余培养条件与实验组相同。分别在加压的第3、6、9天进行细胞计数和ALP含量检测。（3）传代压力实验组：原代接种细胞经过常规培养和多次传代，细胞生长停滞或明显减慢时检测ALP（-），按照原代压力实验组压力条件进行加压，检测ALP。另设对照组，除不加压力外，其余条件同实验组。 结果：（1）骨髓基质细胞在体外培养可以自然转化或经诱导转化为成骨细胞，经过诱导的细胞比自然分化的细胞较早出现分化。（2）施加间断压力的骨髓基质细胞和对照组相比其增殖、分化速度快，经统计学分析该差别有统计学意义。随着加压时间延长，两组增殖、分化速度无明显差别。（3）衰老退化的骨髓基质细胞在间断压力作用下没有增殖和分化的明显改变。结论:（l）骨髓基质细胞是一种具有.多向分化潜能的干细胞，在体外培养可以分化为成骨细胞。（2）合理的体外培养和适当的生物外力可以促进离体培养的成人骨髓基质细胞的增殖和分化。（3）间断压力对衰老退化的骨髓基质细胞增殖和分化没有明显作用。
二、人骨髓基质细胞的长期培养及其对病毒的敏感性（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人骨髓基质细胞的长期培养及其对病毒的敏感性（论文提纲范文）
（1）PEDV、PDCoV与SADS-CoV共感染IPEC-J2细胞的转录组学及基于TLR3、INSIG1介导的信号通路抗病毒研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 猪流行性腹泻病毒、猪德尔塔冠状病毒和猪急性腹泻综合征冠状病毒研究进展 |
| 1.1.1 猪流行性腹泻病毒(PEDV) |
| 1.1.2 猪德尔塔冠状病毒(PDCoV) |
| 1.1.3 猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV) |
| 1.2 猪腹泻病毒的诊断与防治 |
| 1.2.1 猪腹泻病毒的诊断 |
| 1.2.2 猪腹泻病毒的防治 |
| 1.3 共感染病原的相互作用与致病机制 |
| 1.3.1 PEDV、PDCoV、SAD-CoV共感染研究现状 |
| 1.3.2 病毒共感染的致病机制 |
| 1.3.3 冠状病毒的抗天然免疫研究进展 |
| 1.4 IPEC-J2细胞系 |
| 1.5 本研究目的及意义 |
| 第二章 江西及周边地区PEDV、PDCoV、SADS-CoV三种主要猪肠道致病性病毒的流行病学调查及基于S1基因遗传进化分析 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 病料与主要仪器和试剂 |
| 2.1.2 引物设计 |
| 2.1.3 病毒核酸的提取 |
| 2.1.4 PEDV、PDCoV、SADS-CoV三种病毒的检测及S1 基因的扩增及测序 |
| 2.1.5 PEDV、PDCoV、SADS-CoV S1 基因的序列测定及分析 |
| 2.1.6 PEDV、PDCoV、SADS-CoV S1 基因序列进化树构建和同源性分析 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 PEDV、PDCoV、SAD-CoV三种腹泻病毒电泳结果 |
| 2.2.2 PEDV、PDCoV、SADS-CoV单一感染和混合感染情况 |
| 2.2.3 PEDV、PDCoV、SADS-CoV S1 基因的扩增、克隆、测序结果 |
| 2.2.4 PEDVS1基因的进化树分析 |
| 2.2.5 PDCoV S1 基因进化树分析 |
| 2.2.6 SADS-CoV S1 基因的进化树分析 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 PEDV、PDCoV、SADS-CoV流行情况及共感染情况 |
| 2.3.2 PEDV、PDCoV、SADS-CoV S1 基因的遗传变异分析 |
| 第三章 PEDV、PDCoV与 SADS-CoV感染IPEC-J2 细胞的生物学特性研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 病毒、细胞、载体与样品 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.1.4 试剂和溶液的配制 |
| 3.1.5 引物设计与合成 |
| 3.1.6 SADS-CoV S1 蛋白单克隆抗体的制备 |
| 3.1.7 细胞的复苏与培养 |
| 3.1.8 病毒的增殖与TCID50的测定 |
| 3.1.9 PEDV、PDCoV和 SADS-CoV单一/共感染IPEC-J2 细胞的生长曲线 |
| 3.1.10 PEDV、PDCoV和 SADS-CoV单一/共感染IPEC-J2 细胞的免疫荧光 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 SADS-CoV S1 蛋白单克隆抗体的制备 |
| 3.2.2 PEDV、PDCoV 和 SADS-CoV 单一/共感染 IPEC-J2 细胞的一步生长曲线 |
| 3.2.3 PEDV、PDCoV和 SADS-CoV单一/共感染IPEC-J2 细胞的免疫荧光 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 PEDV、PDCoV和 SADS-CoV共感染IPEC-J2 细胞转录组分析 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 病毒与细胞 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 引物的设计与合成 |
| 4.1.5 PEDV、PDCoV和 SADS-CoV单一感染和混合感染实验及样品制备 |
| 4.1.6 细胞总RNA的提取、纯度和完整性分析 |
| 4.1.7 文库的构建与测序 |
| 4.1.8 转录组测序数据的处理与分析 |
| 4.1.9 荧光定量RT-PCR验证差异表达基因 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 细胞总RNA纯度和完整性分析 |
| 4.2.2 转录组测序数据的处理与分析 |
| 4.2.3 荧光定量RT-PCR验证差异表达基因 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 细胞的免疫应答 |
| 4.3.2 细胞周期相关因子 |
| 4.3.3 胆固醇代谢 |
| 4.4 小结 |
| 第五章 poly(I:C)抑制猪腹泻冠状病毒感染的机制 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 细胞与病毒 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.1.4 引物设计与合成 |
| 5.1.5 shRNA的设计与合成 |
| 5.1.6 干扰重组载体的构建 |
| 5.1.7 过表达重组载体的构建 |
| 5.1.8 poly(I:C)对病毒复制的影响 |
| 5.1.9 TLR3通路抑制剂对病毒复制的影响 |
| 5.1.10 TLR3 的激活和抑制对PEDV、PDCoV、SADS-CoV的影响 |
| 5.1.11 统计学分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 pCAGGS-TLR3和pcDNA3.1-U6-TLR重组载体的构建 |
| 5.2.2 pcDNA3.1-U6-TLR3和pCAGGS-TLR3 抑制和过表达效果验证 |
| 5.2.3 Poly(I:C)对PEDV、PDCoV、SADS-CoV的抑制 |
| 5.2.4 Ploy(I:C)处理对TLR3 通路信号分子的表达情况 |
| 5.2.5 不同药物浓度Resveratrol、BX795 对细胞活度的测定 |
| 5.2.6 TLR3 的激活和抑制对PEDV、PDCoV、SADS-CoV的影响 |
| 5.2.7 pcDNA3.1-U6-TLR3和p CAGGS-TLR3 对病毒的影响 |
| 5.3 讨论 |
| 第六章 PEDV、SADS-CoV和 PDCoV结构蛋白与INSIG1 相互作用机制 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.1.1 病毒、细胞与质粒 |
| 6.1.2 主要试剂 |
| 6.1.3 主要仪器 |
| 6.1.4 引物设计与合成 |
| 6.1.5 INSIG1 过表达和sh RNA的设计与合成 |
| 6.1.6 干扰重组载体的构建 |
| 6.1.7 过表达重组载体的构建 |
| 6.1.8 PEDV、PDCoV、SADS-CoV单一感染/共感染对胆固醇代谢的影响 |
| 6.1.9 NSIG1 过表达和sh RNA重组质粒效果鉴定 |
| 6.1.10 INSIG1 过表达和sh RNA重组质粒转染IPEC-J2 细胞对病毒复制的影响 |
| 6.1.11 PEDV、PDCoV、SADS-CoV重组过表达质粒转染IPEC-J2 细胞 |
| 6.1.12 不同葡萄糖浓度对INSIG1的影响 |
| 6.1.13 统计学分析 |
| 6.2 结果与分析 |
| 6.2.1 过表达载体的构建 |
| 6.2.2 INSIG1重组质粒的构建 |
| 6.2.3 PEDV、PDCoV、SADS-CoV单一感染/共感染对胆固醇代谢的影响 |
| 6.2.4 INSIG1 过表达和sh RNA重组质粒效果鉴定 |
| 6.2.5 INSIG1 过表达和sh RNA重组质粒转染IPEC-J2 细胞对病毒复制的影响 |
| 6.2.6 PEDV、PDCoV、SADS-CoV结构和非机构基因对INSIG1 表达的影响 |
| 6.2.7 葡萄糖浓度对病毒影响INSIG1的关系 |
| 6.3 讨论 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 附录 Ⅰ 溶液、试剂配制及试剂盒操作步骤 |
| 附录 Ⅱ 附图与附表 |
| 攻读博士学位期间发表论文及获奖情况 |
| 致谢 |
（2）人经血干细胞携带溶瘤腺病毒用于结直肠癌的治疗研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 经血干细胞的分离培养及鉴定 |
| 1.1 前言 |
| 1.2 材料和试剂 |
| 1.2.1 MenSCs的来源 |
| 1.2.2 主要试剂 |
| 1.2.3 主要设备 |
| 1.3 实验方法 |
| 1.3.1 MenSCs的分离培养 |
| 1.3.2 细胞冻存和复苏 |
| 1.3.3 MenSCs细胞表面标记分子鉴定 |
| 1.3.4 MenSCs诱导分化实验 |
| 1.3.5 免疫荧光检测MenSCs表面干性分子 |
| 1.4 实验结果 |
| 1.4.1 MenSCs的分离培养 |
| 1.4.2 MenSCs细胞成骨成脂分化结果 |
| 1.4.3 MenSCs细胞表面标记分子流式鉴定结果 |
| 1.4.4 MenSCs表面干性标记的表达 |
| 1.5 讨论 |
| 1.6 结论 |
| 第二部分 MenSCs-CRAd5/F11 细胞株的构建及功能鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 材料与试剂 |
| 2.2.1 主要试剂 |
| 2.2.2 主要设备 |
| 2.2.3 MenSCs及肿瘤细胞系来源 |
| 2.2.4 结直肠癌细胞的培养 |
| 2.2.5 溶瘤腺病毒CRAd5/F11的构建及分离纯化 |
| 2.2.6 动物实验 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 Western Blot检测MenSCs表面受体蛋白表达 |
| 2.3.2 CRAd5/F11 感染MenSCs |
| 2.3.3 电镜的检测CRAd5/F11 |
| 2.3.4 CRAd5/F11对MenSCs毒性作用的检测 |
| 2.3.5 CRAd5/F11 感染后MenSCs上清中病毒颗粒数的检测 |
| 2.3.6 MenSCs-CRAd5/F11 细胞表面标记分子鉴定 |
| 2.3.7 MenSCs-CRAd5/F11 对肿瘤细胞的趋化实验 |
| 2.3.8 MenSCs-CRAd5/F11 在肿瘤小鼠体内的迁移实验 |
| 2.3.9 统计学分析 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 MenSCs表面受体蛋白的表达 |
| 2.4.2 溶瘤病毒对MenSCs感染效率的检测 |
| 2.4.3 MenSCs细胞内病毒颗粒的电镜检测 |
| 2.4.4 CRAd5/F11对MenSCs的毒性作用 |
| 2.4.5 感染CRAd5/F11的MenSCs上清中病毒颗粒数检测 |
| 2.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 表面标记的表达情况 |
| 2.4.7 MenSCs-CRAd5/F11 体外对肿瘤细胞的趋化作用 |
| 2.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 在体内对肿瘤组织的归巢作用 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 CRAd5/F11 依赖细胞受体CD46 感染MenSCs |
| 2.5.2 CRAd5/F11对MenSCs和肿瘤细胞的毒性作用 |
| 2.5.3 MenSCs-CRAd5/F11 对肿瘤的靶向迁移 |
| 2.6 结论 |
| 第三部分 MenSCs运载CRAd5-F11 治疗结直肠癌的体内外实验研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料与试剂 |
| 3.2.1 主要试剂 |
| 3.2.2 主要设备 |
| 3.2.3 MenSCs及肿瘤细胞系来源 |
| 3.2.4 溶瘤腺病毒CRAd5/F11及CRAd5/F11-TIS的构建 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 WB检测肿瘤细胞表面腺病毒结合受体的表达 |
| 3.3.2 CRAd5/F11对肿瘤细胞毒性作用的检测 |
| 3.3.3 运载CRAd5/F11的MenSCs对肿瘤细胞的抑制实验 |
| 3.3.4 荷瘤小鼠肿瘤模型的建立及肿块大小的测量 |
| 3.3.5 MenSCs的移植 |
| 3.3.6 组织标本的制备 |
| 3.3.7 肿瘤组织的免疫组化分析 |
| 3.3.8 肿瘤组织细胞凋亡的TUNEL检测 |
| 3.3.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS对肿瘤的作用 |
| 3.3.10 统计学分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 肿瘤细胞表面腺病毒受体蛋白的表达 |
| 3.4.2 溶瘤病毒对肿瘤细胞具有杀伤作用 |
| 3.4.3 携带CRAd5/F11的MenSCs对肿瘤细胞的杀伤作用 |
| 3.4.4 病毒抗体血清对溶瘤病毒杀伤肿瘤细胞的影响 |
| 3.4.5 体内动物实验操作及时间安排示意图 |
| 3.4.6 MenSCs-CRAd5/F11 移植后抑制肿瘤的生长 |
| 3.4.7 肿瘤组织免疫组化相关蛋白的检测 |
| 3.4.8 MenSCs-CRAd5/F11 诱导肿瘤组织凋亡 |
| 3.4.9 MenSCs-CRAd5/F11-TIS在体内对肿瘤的抑制作用 |
| 3.5 讨论 |
| 3.5.1 MenSCs运载CRAd5/F11 对肿瘤的治疗 |
| 3.5.2 溶瘤病毒对肿瘤细胞的杀伤和抑制机制 |
| 3.5.3 溶瘤病毒结合基因治疗 |
| 3.5.4 溶瘤病毒CRAd5/F11从MenSCs胞内释放的机制探讨 |
| 3.5.5 MenSCs结合溶瘤病毒治疗肿瘤的安全性问题 |
| 3.6 结论 |
| 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 间充质干细胞的基本特性与疾病治疗的应用 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间取得的科研成果 |
（3）HP-PRRSV HuN4株对仔猪骨髓感染与损伤机制的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 引言 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的概况 |
| 1.1.1 病原学 |
| 1.1.2 病毒的分子生物学特点 |
| 1.1.3 PRRS的临床症状 |
| 1.1.4 PRRSV的细胞噬性以及致病机理 |
| 1.1.5 PRRSV与ADE现象 |
| 1.1.6 疫苗研究与PRRS的预防控制 |
| 1.2 PRRSV诱导的细胞凋亡 |
| 1.2.1 细胞凋亡 |
| 1.2.2 PRRSV与细胞凋亡 |
| 1.3 PRRSV与骨髓 |
| 1.4 研究目的及意义 |
| 第二章 HP-PRRSV HuN4株对仔猪骨髓的感染及损伤 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.1.1 实验毒株 |
| 2.1.2 主要仪器和试剂 |
| 2.1.3 动物实验设计 |
| 2.1.4 临床观察 |
| 2.1.5 病毒检测 |
| 2.1.6 骨髓细胞的凋亡检测 |
| 2.1.7 TUNEL法检测骨髓细胞凋亡 |
| 2.1.8 免疫荧光检测病毒 |
| 2.1.9 外周血及骨髓内T淋巴细胞亚群的检测 |
| 2.1.10 免疫组化检测骨髓细胞感染 |
| 2.1.11 免疫荧光双标记检测PRRSV和凋亡细胞 |
| 2.1.12 荧光双标记检测凋亡细胞类型 |
| 2.1.13 免疫荧光双标记检测PRRSV感染细胞类型 |
| 2.1.14 骨髓感染细胞与凋亡的共定位 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 病毒对断奶仔猪骨髓的感染情况 |
| 2.2.2 免疫组化检测感染仔猪骨髓内的病毒 |
| 2.2.3 免疫荧光检测病毒感染断奶仔猪骨髓内的病毒 |
| 2.2.4 SWC3/SWC8细胞感染病毒 |
| 2.2.5 骨髓细胞的凋亡情况 |
| 2.2.6 骨髓内粒细胞的凋亡情况 |
| 2.2.7 凋亡细胞的观察,检测以及统计结果 |
| 2.2.8 细胞调亡与病毒感染共定位 |
| 2.2.9 骨髓内淋巴细胞亚群的分析 |
| 2.2.10 外周血淋巴细胞亚群的变化分析 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 ：HP-PRRSV体外感染仔猪骨髓细胞的损伤研究 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 病毒毒株 |
| 3.1.2 实验设计 |
| 3.1.3 主要试剂和仪器 |
| 3.1.4 骨髓细胞的分离及培养 |
| 3.1.5 骨髓细胞内病毒的检测(免疫荧光) |
| 3.1.6 骨髓细胞内病毒的检测(流式) |
| 3.1.7 骨髓细胞凋亡的流式检测 |
| 3.1.8 TUNEL法检测骨髓细胞凋亡 |
| 3.1.9 数据分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 流式检测骨髓细胞感染病毒的感染量 |
| 3.2.2 IFA检测骨髓内病毒蛋白 |
| 3.2.3 HP-PRRSV引起仔猪骨髓细胞发生异常凋亡 |
| 3.2.4 PRRSV-阳性细胞与凋亡细胞的共定位 |
| 3.2.5 骨髓细胞感染病毒后形态变化 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 全文结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（4）乙肝病毒体外自然感染人骨髓间充质干细胞的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分：人骨髓间充质干细胞的分离、培养和纯化 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 第二部分：乙肝病毒体外自然感染人骨髓间充质干细胞 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附图表 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文论文(一) |
| 英文论文(二) |
（5）荣昌猪BMMNCs诱导分化及其BPI表达与抗病性的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 骨髓单个核细胞研究进展 |
| 1.2 猪抗病基因研究进展 |
| 1.3 荣昌猪研究概况 |
| 第2章 引言 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 研究主要内容与研究目的意义 |
| 第3章 BMMNCs培养增殖与诱导分化 |
| 3.1 实验材料与方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 猪BMMNCs分化过程中BPI的表达 |
| 4.1 实验材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 外显子3不同SNP基因型对BPI表达以及细菌攻毒的影响 |
| 5.1 实验材料与方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.3 讨论 |
| 第6章 结论 |
| 6.1 骨髓单核细胞培养 |
| 6.2 骨髓单核细胞增殖分化 |
| 6.3 几种因子对骨髓单核细胞中BPI表达的影响 |
| 6.4 荣昌猪外显子3基因型对BPI表达与细菌攻毒保护的影响 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 发表论文及参加课题一览表 |
（6）间充质干细胞携带选择复制性腺病毒靶向肿瘤治疗的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 研究背景 |
| Reference |
| 第一部分 间充质干细胞分离培养、分子鉴定、多向分化潜能验证以及其携带与释放选择复制性腺病毒(Adv-stat3(-))的能力 |
| 摘要 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 间充质干细胞体内分布及其肿瘤归巢能力验证 |
| 摘要 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 间充质干细胞携带选择复制性腺病毒Adv-stat3(-)对肿瘤靶向杀伤体内体外验证 |
| 摘要 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 MSC与肿瘤的关系 |
| English paper1 |
| English paper2 |
| 致谢 |
（7）骨髓来源Flk-1+CD34-间充质干细胞治疗大鼠脑出血的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 人骨髓间充质干细胞治疗大鼠脑出血的量效关系和治疗机制的研究 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 人骨髓间充质干细胞异种移植免疫的研究 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 创新点与不足之处 |
| 综述 |
| 英文缩略词 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）经分子修饰的人参皂苷的免疫调节作用及机理研究（论文提纲范文）
| 内容提要 |
| 英文缩写词表 |
| 引言 |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 人参皂苷的免疫调节作用及其临床应用 |
| 第二章 硫酸酯化多糖的化学组成及生物学活性 |
| 第二篇 实验研究 |
| 第一章 人参皂苷及其衍生物对小鼠主要免疫细胞功能的影响 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 人参皂苷及其衍生物体外诱生小鼠主要细胞因子的实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 致谢 |
（9）来源于人树突状细胞和骨髓基质细胞的两个新分子CRL2和CLM的克隆与功能的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 上篇 来源于人树突状细胞的Ⅰ型细胞因子受体CRL2的表达分布和功能的初步研究 |
| 第一部分 CRL2的细胞表达和细胞定位研究 |
| 第二部分 CRL2的生物学功能研究 |
| 参考文献 |
| 下篇 来源于人骨髓基质细胞的新分子CLM的克隆与生物学功能的研究新分子CLM的克隆、表达分布、细胞定位及功能的研究 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 综述 胸腺基质细胞来源的淋巴细胞生成素TSLP及其受体的结构和功能研究进展 |
| 附录 |
（10）间断压力对体外培养成人骨髓基质细胞的作用研究（论文提纲范文）
| 一、 间断压力对体外培养成人骨髓基质细胞的作用研究 |
| 1 、 中文摘要 |
| 2 、 英文摘要 |
| 3 、 前言 |
| 4 、 材料与方法 |
| 5 、 结果与分析 |
| 6 、 讨论 |
| 7 、 结论 |
| 8 、 创新点 |
| 9 、 展望 |
| 10 、 参考文献 |
| 二、 综述 |
| 1 、 正文 |
| 2 、 参考文献 |
| 三、 致谢 |
四、人骨髓基质细胞的长期培养及其对病毒的敏感性（论文参考文献）
- [1]PEDV、PDCoV与SADS-CoV共感染IPEC-J2细胞的转录组学及基于TLR3、INSIG1介导的信号通路抗病毒研究[D]. 张帆帆. 江西农业大学, 2020
- [2]人经血干细胞携带溶瘤腺病毒用于结直肠癌的治疗研究[D]. 郭洋. 浙江大学, 2019(01)
- [3]HP-PRRSV HuN4株对仔猪骨髓感染与损伤机制的研究[D]. 李莉. 中国农业科学院, 2014(12)
- [4]乙肝病毒体外自然感染人骨髓间充质干细胞的研究[D]. 马瑞萍. 山东大学, 2012(12)
- [5]荣昌猪BMMNCs诱导分化及其BPI表达与抗病性的研究[D]. 向钊. 西南大学, 2011(06)
- [6]间充质干细胞携带选择复制性腺病毒靶向肿瘤治疗的研究[D]. 夏曦. 华中科技大学, 2010(11)
- [7]骨髓来源Flk-1+CD34-间充质干细胞治疗大鼠脑出血的实验研究[D]. 柳夫义. 中国协和医科大学, 2009(11)
- [8]经分子修饰的人参皂苷的免疫调节作用及机理研究[D]. 郭志廷. 吉林大学, 2006(05)
- [9]来源于人树突状细胞和骨髓基质细胞的两个新分子CRL2和CLM的克隆与功能的研究[D]. 孙红颖. 浙江大学, 2004(03)
- [10]间断压力对体外培养成人骨髓基质细胞的作用研究[D]. 胡小毅. 广西医科大学, 2004(03)