一、肝切除后大鼠Ito细胞肝细胞生长因子mRNA表达的变化（论文文献综述）
陈钶[1]（2019）在《1、核受体共激活因子NCoA6在肝细胞性肝癌发生发展中的作用及其分子调控机制的研究2、腹腔镜对比开腹右半肝切除术治疗肝细胞性肝癌的倾向性得分配对对照研究》文中研究表明原发性肝细胞性肝癌是全世界发病率最高的恶性肿瘤之一,尤其在中国,每年无论发病人数或死亡人数均占了全球肝癌患者总数的一半以上。肝癌是一种由多种危险因素导致各种分子机制异常改变的复杂疾病。虽然以手术为主的综合治疗取得了一定的进步,然而肝癌患者总体预后仍然较差。寻找能够用于肝癌早期诊断和治疗的靶点是改善患者预后的重要方法。NCoA6是诸多核激素受体和重要转录因子基因活化所必须的一种多功能的共激活因子,对机体正常生长、发育、创伤愈合以及维持能量平衡等发挥重要作用。有研究发现NCoA6在乳腺癌、结直肠癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、黑色素瘤等众多恶性肿瘤中表达上调,但NCoA6在肝细胞性肝癌中的表达情况和具体作用仍不明确。因此本文第一部分通过检测NCoA6在肝癌组织和细胞株中的表达情况,结合一系列体内外实验,详细阐述NCoA6在肝癌中的表达,并进一步探索该基因参与肝癌发生发展的生物学机制。如前所述,手术仍是目前肝癌综合治疗的最重要组成部分。但传统的开腹手术在治疗疾病的同时也造成了巨大的创伤。以腹腔镜技术为代表的“微创外科”被认为是21世纪外科发展的两大方向之一。近些年来腹腔镜肝脏手术发展迅猛。但肝细胞性肝癌患者往往合并有肝硬化、肝功能不全,这类患者易出血、对手术的耐受性差。若肿瘤位于右肝需行右半肝切除,对这类患者在腹腔镜下完成右半肝切除手术难度大、风险高,因而相关的研究报道甚少。因此本文第二部分回顾性分析了本中心因肝细胞性肝癌行右半肝切除的病例,将病例分为腹腔镜和开腹右半肝切除组,并使用倾向性指数配对的方法,对比分析两组间围手术期临床病理指标、术后恢复及并发症情况、肿瘤远期根治效果等,以探讨腹腔镜右半肝切除治疗肝细胞性肝癌的手术经验、安全性、有效性和应用价值。第一部分:核受体共激活因子NCoA6在肝细胞性肝癌发生发展中的作用及其分子调控机制的研究第一节:NCoA6在肝细胞肝癌中的表达及其与临床病理特征之间的相关性分析方法:对Oncomine和TGCA等数据库进行检索,运用生物信息学方法分析NCoA6在肝细胞肝癌中的表达情况以及与预后的相关性。运用PCR、Westernblot和免疫组织化学技术检测NCoA6在肝癌细胞株以及临床肝癌组织和癌旁正常组织中的表达情况,分析NCoA6与患者临床病理特征及预后的相关性。结果:生物学分析发现NCoA6在肝细胞肝癌中显着升高,并且与患者预后有显着相关性。PCR和Western blot结果证实NCoA6在肝癌细胞株和临床肝癌组织中呈高表达。对103例肝癌组织进行免疫组化分析,并结合肝癌患者的临床病理特征,我们发现NCoA6的高表达与患者的肝癌肿瘤大小密切相关（p=0.004）。结合患者的随访数据,进行Kaplan-Meier生存分析,结果发现NCoA6表达高的患者术后5年生存率显着低于表达较低的患者（p=0.01）。COX多因素分析发现,NCoA6为肝癌患者总生存期和无瘤生存期的独立危险因素（p<0.05）。结论:NCoA6在肝癌细胞系以及患者肿瘤组织中呈异常高表达,并且与患者的预后存在明显相关性。第二节:NCoA6对肝细胞肝癌生物学行为的调控作用方法:通过体外转染小干扰RNA和感染慢病毒构建NCoA6敲减肝癌细胞株,通过CCK-8细胞增殖实验、克隆形成实验、EdU、流式细胞周期实验、流式细胞凋亡试验、Transwell细胞迁移/侵袭实验以及裸鼠皮下成瘤实验,并结合Western blot相关蛋白检测结果,观察和分析NCoA6对肝癌细胞周期、凋亡、增殖、迁移等能力的影响。结果:敲减NCoA6能明显抑制肝癌细胞株Huh7和HCC-LM3的增殖,发生细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,并改变细胞周期和凋亡相关蛋白,但对细胞侵袭、迁移能力无影响,不改变EMT特征蛋白的表达。裸鼠肝癌移植瘤实验发现敲减NCoA6能显着抑制肿瘤的生长。结论:NCoA6参与调控肝癌细胞体外增殖、细胞周期、凋亡和体内成瘤能力,但对癌细胞的迁移和侵袭能力无明显影响。第三节:NCoA6通过PI3K/Akt/mTOR和NF-κB信号通路促进肝癌细胞增殖方法:利用基因表达谱芯片技术筛选NCoA6调控的下游靶基因。经qRCR验证基因芯片结果可靠后,对差异基因进行GO和KEGG富集分析,以判定差异基因主要影响的生物学功能和通路。根据富集分析结果并结合文献挑选可能受调控的信号通路,采用Western blot检测这些通路的相关蛋白表达。结果:根据富集分析结果并结合文献,我们发现NCoA6可能通过PI3K/Akt/mTOR和NF-κB信号通路调节肝癌的发生发展。Western blot检测上述两条通路相关蛋白,结果发现敲减NCoA6可以抑制这些通路的活性。结论:NCoA6通过PI3K/Akt/mTOR和NF-κB信号通路促进肝癌细胞周期进程,并抑制肝癌细胞凋亡。第二部分:腹腔镜对比开腹右半肝切除术治疗肝细胞性肝癌的倾向性得分配对对照研究方法:回顾性分析医院普外科于2007年5月至2019年2月因肝细胞性肝癌行标准右半肝切除的病例,并分为腹腔镜组和开腹组。基于年龄、性别、术前治疗、肿瘤大小和个数的1:1倾向性得分用来配对两组以减少选择偏倚的影响。分别对比两组间在配对前和配对后的临床病理学指标、术后恢复情况以及远期预后等。结果:共131例因肝细胞肝癌行右半肝切除的患者。其中腹腔镜组51例,开腹组80例。腹腔镜组中转开腹8例,中转开腹率15.7%;总体术后并发症率19.6%,无围手术期死亡病例。经倾向性得分配对后,两组各44例纳入本研究。两组间总手术时间差异无统计学意义（248.4±88.7 231.6±44.4 min,p=0.26）。但与开腹组相比,腹腔镜组术中出血显着减少[300（100-1200）500（200-2000）mL,p<0.01]。虽然腹腔镜组术后并发症率低于开腹组,但差异未达到统计学意义（18.2 29.5%,p=0.21）。腹腔镜组中位随访17（2-68）个月,开腹组中位随访15（3-103）个月。两组间3年无瘤生存率和总生存率的差异均无统计学意义。结论:腹腔镜右半肝切除治疗肝细胞性肝癌在手术安全性和肿瘤根治性上可以取得与开腹手术相似的效果。腹腔镜右半肝切除可以减少术中出血,还有可能减少术后并发症,缩短住院时间。本研究的结论需要在将来被设计严谨的更高质量对照研究进一步证实。
张斌[2]（2017）在《门静脉结扎术促进梗阻性黄疸大鼠肝脏再生的实验研究》文中认为第一部分门静脉结扎术促进梗阻性黄疽大鼠肝脏再生目的:建立大鼠梗阻性黄疸模型,探讨门静脉结扎术对梗阻性黄疸大鼠非结扎侧肝脏再生的影响。方法:雄性SD大鼠90只,随机分为三组:假手术对照组（C-Sham组）、梗阻性黄疸对照组（C-OJ组）和门静脉结扎组（PVL组）。C-Sham组仅游离大鼠肝左、中叶的胆管和门静脉,不做结扎和切断;C-OJ组通过结扎并切断大鼠肝左叶和中叶的胆管,建立梗阻性黄疽模型;PVL组在C-OJ组模型基础上,在相应梗阻性黄疽时间点前24h行大鼠肝左、中叶门静脉的结扎,达到相应梗阻性黄疸时间点后各组取标本,检测未结扎侧肝脏占全肝重量的比率、免疫组织化学方法和免疫荧光方法检测未结扎侧肝细胞中增殖细胞核抗原（KI-67）的表达、血清总胆红素（TBil）、直接胆红素（DBil）、白蛋白含量（ALB）、丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）含量;达到相应的实验时间点获取大鼠的结扎侧和非结扎侧肝脏做H-E染色,观察肝脏细胞形态的变化。结果:PVL组未结扎侧肝脏占全肝重量比率和未结扎侧肝脏KI-67表达量在各时间点均明显高于C-OJ组和C-Sham组（P<0.05）;C-OJ组未结扎侧肝脏占全肝重量比率和未结扎侧肝脏KI-67表达量在48h、72h、120h、168h时间点明显高于C-Sham组（P<0.05）。C-OJ组、PVL组的TBIL和DBIL含量在各时间点均高于C-Sham组（4.34±1.56）umol/L、（2.85±1.40）umol/L（P<0.05）。在48h时间点,PVL组的ALB含量为（23.75±3.16）8/L,低于C-Sham组的（31.25±2.03）8/L和C-OJ组的（30.32±3.35）g/L（P<0.05）。PVL组、C-OJ组的ALT和AST含量均在36h时间点达到高峰,PVL组ALT和AST含量分别为（356.53±74.36）U/L、（843.76±156.43）U/L,C-OJ组ALT和AST含量分别为（146.62±50.24）U/L、（501.87±142.54）U/L,组间差异有统计学意义（P<0.05）;PVL组ALT含量在48h、120h、168h与C-OJ组无明显差异（P>0.05）,PVL组AST含量在 120h、168h与C-OJ组无明显差异（P>0.05）。PVL组结扎侧肝脏HE染色可见肝细胞明显萎缩,局部可见变性坏死,非结扎侧肝细胞体积增大、核深染、核分裂明显增多。结论:结扎大鼠70%肝脏的胆管可以稳定地建立梗阻性黄疸模型;门静脉结扎术可以安全、有效地促进梗阻性黄疸大鼠未结扎侧肝脏再生第二部分门静脉结扎术促进梗阻黄疽大鼠肝再生信号转导通路的初步研究目的:研究门静脉结扎术促进梗阻黄疸大鼠肝再生的信号转导通路方法:在第一部分三个实验组（C-Sham组、C-OJ组和PVL组）相应时间点取大鼠血清、结扎侧肝脏和非结扎侧肝脏,酶联免疫吸附测定法检测相应实验时间点的血清TNF-α、IL-6表达水平;western-blot检测各时间点相应的肝脏内HIF-1α、NF-K B P65和P50蛋白表达水平;应用免疫组织化学方法检测48h实验时间点未结扎侧肝细胞核内NF-K B P50的表达水平。结果:术后C-OJ组和PVL组TNF-α、IL-6表达量均迅速增加,在术后48h达到高峰。C-OJ组TNF-α表达量除168h时间点外均高于对照组;PVL组TNF-α表达量在各个时间点均高于C-sham组和C-OJ组。C-OJ、PVL组IL-6在各实验时间点的表达量均高于对照组;在各个实验时间点,PVL组的IL-6的表达量均高于C-sham组和C-OJ组。在C-Sham组和C-OJ组各时间点,肝细胞内HIF-1α未见明显表达;PVL组结扎侧肝细胞内HIF-1α表达明显升高,非结扎侧肝细胞内HIF-1α未见明显表达。C-OJ组、PVL组的结扎侧和非结扎侧肝细胞中N F-κ B P65和P50表达量均明显升高;48h时间点PVL组未结扎侧肝细胞核内NF-K B P50表达水平明显高于C-sham组。结论:门静脉结扎术可能通过HIF-1α诱导TNF-α高表达启动未结扎侧肝再生,然后通过N F-κ B和IL-6等共同参与的信号转导通路促进未结扎侧肝再生。
杨龙[3]（2014）在《肝硬化大鼠部分肝切除后肝再生过程中HGF/C-met通路的差异性表达》文中进行了进一步梳理[目的]通过大鼠部分肝切除模型研究完整的HGF/c-met通路及其相关因子在肝硬化和正常肝脏再生过程中的表达差异,探索硬化肝脏部分肝切除后肝再生缓慢的原因。[方法]实验分为两部分：第一部分,建立肝硬化大鼠的部分肝切除模型：实验前期先利用四氯化碳诱导大鼠肝硬化,成模后行70%肝部分切除术。第二部分,研究HGF/C-met通路及其相关影响因子在大鼠肝硬化和正常肝脏再生中的表达差异：①实验大鼠为雄性SD大鼠,5-6周龄,体重200-220g。②实验大鼠分为2组：单纯行70%肝部分切除术组（N组）,先使用CCl4诱导肝硬化后再行70%肝切除术组（C组）,每组30只。两组均于术前及术后不同时间（3h、6h、12h、24h、48h）处死大鼠,每时段每组处死5只,采集血样和肝脏以及脾脏标本,标本置入-80℃C冻存待检。③指标检测：病理学观察采用肝组织经10%福尔马林固定,石蜡包埋、切片、HE染色,光镜下观察肝脏硬化程度；ELISA法检测血清中HGFA和HGF的含量；免疫组化染色检测C-met在术后肝脏中的阳性表达率；利用RT-PCR测定肝组织中HGF mRNA和C-met mRNA及脾源性HAI-1mRNA、HAI-2mRNA的水平。④数据用统计软件SPSS19.0软件进行统计学处理,结果以均数±标准差表示,采用独立样本t检验,检验水准α=0.05。[结果]第一部分：肝硬化大鼠70%肝切除动物模型稳定,可以用于进行肝硬化个体肝切除术后再生的相关研究；第二部分：1.HGF变化：术后各时间点C组血清HGF及肝HGF mRNA均显着高于N组（P<0.05）,N组术后3h即开始升高,12h达高峰,C组术后12h开始升高,24h达高峰,随着时间推移,两组HGF均先升高后下降。2.血清HGFA变化：术后各时间点C组血清HGFA水平均显着低于N组（P<0.05）,两组大鼠血清HGFA均于术后12h降至最低水平,后逐渐回升,至48h恢复正常。3. C-met变化：C组任一时间点的C-met蛋白及C-met mRNA的表达量均显着低于N组（P<0.05）,N组表达量在术后6h即开始下降,24h降至最低,后开始回升,C组自12h开始随时间推移不断降低。4.HAI-1mRNA变化：C组任一时间点的HAI-1mRNA的表达量均显着高于N组（P<0.05）,两组表达量均术后6h即开始升高,12h达到高峰,然后逐渐回降至正常水平。5.HAI-2mRNA变化：任一时间点两组HAI-2mRNA的表达量之间无明显差异（P<0.05）,同一组任意两时间点之间亦无统计学差异（P<0.05）。[结论]1、本研究通过大量预实验,选择了一种简便、易行且成模稳定的方法来诱导建立了大鼠肝硬化模型,后在此模型的基础上实施70%部分肝切除术。该动物模型可操作性强、成模率高,是研究肝硬化大鼠肝切除术后再生规律及其影响因素的理想模型。2、与对照组相比,肝硬化组大鼠的HGF/C-met通路表达能力较低,且术后呈现出合成分泌延迟现象,这可能导致了硬化肝脏在部分肝切除术后较正常肝脏再生缓慢。3、硬化肝脏PH后HGF的合成分泌减少受HGFA以及HAI-1的调控,三者之间可能存在反馈作用,但肝硬化个体HAI-1的持续高表达原因不明,需进一步深入研究。4、HAI-2并没有参与到肝组织的损伤修复过程中。
邰沁文[4]（2013）在《自体肝移植的临床和相关实验研究》文中研究表明目的：1)探讨离体全肝切除和自体肝移植术（Ex-vivo liver resection and autotransplantation, ELRA）治疗晚期肝脏泡球蚴病（Alveolar echinococcosis, AE）的适应症,可行性,安全性和有效性；评价三维重建影像评估系统与个体化虚拟手术的临床意义；初步探讨ELRA术后移植物增生的规律；评价ELRA术经济和社会效益；2)建立Wistar大鼠极限肝切除模型,评价极限肝切除术后的肝再生和存活率；3)建立Wistar大鼠慢性肝损伤模型,探讨骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cell, BMSCs）和慢性肝纤维化肝再生修复的关系及可能机制；4)探讨TLR3通路与BMSCs在慢性肝纤维化中的相互作用和与肝纤维化肝再生修复的可能机制。方法：第一部分：1)总结2010年8月至2013年08月按纳入标准实施的10例ELRA术治疗晚期肝AE患者的临床资料,分析临床资料,探讨临床适应症；2)通过术前CT与三维肝脏重建软件测量数据和手术探查所见与移植物实际质量结果分析,分析个体化虚拟手术设计的准确性和可行性。3)通过患者术中情况、并发症和住院总费用等临床资料,分析手术可行性和安全性。4)术后CT随访1,3和6月移植肝体积（GV）和受体标准肝体积（SLV）比,结合术后PET/CT检查结果,分析半年内肝脏增生变化。第二部分：对Wistar大鼠分别行70%、80%、90%肝体积极限切除,统计术后各组大鼠的存活率,并检测外周血清中ALT及AST浓度,对比术后14天存活大鼠肝脏质量。HE染色观察三组肝脏组织形态学变化。第三部分：取雄性大鼠股骨和胫骨骨髓,提取、分离培养、纯化、扩增BMSCs,使用光学显微镜观察BMSCs的形态,用免疫组织化学（IHC）检测BMSCs表面CD31、CD45、CD44、CD105、CDllb、CD29的表达阳性率。用二乙基亚硝胺（DEN）配成0.01%浓度饮用水供雌性大鼠饮用16周换正常水,建立慢性肝损伤模型,第4、8、12、16周经尾静脉输注1×106个BMSCs,并设置单纯造模组及空白对照组；20周核磁共振（MRI）检查大鼠肝脏；21周处死大鼠,HE染色观察肝脏组织形态变化：原位杂交技术检测大鼠肝脏SrY表达；VG染色观察肝脏中胶原纤维量；IHC检测α-SMA、LR3; Western-blotting检测肝脏α-SMA、 TLR3、TRIF、NF-kBp65、IRF3表达,FQ-RT-PCR检测TLR3、IRF3mRNA表达。结果：第一部分：1)10例移植物均存活,符合纳入标准时手术安全性较高。2)术中探查与移植物体积和术前CT与肝脏三维重建结果一致,10例患者GV/SLV在41%-78%之间,平均60.6%,其中9例患者虚拟切除移植物体积695.11±142.14cm3,实际余肝脏体积687.78±130.81cm3（P>0.05）；3)术中1例经脐静脉低温灌注外,余9例经门静脉灌注；2例无肝期下腔静脉未重建,3例行自体下腔静脉重建,5例人造血管暂时性门腔分流；手术11.5～20.5h,平均15.2h,无肝期200-435min,中位时间285.5min,术中输注红细胞悬液0～15u,术后住院时间21～58d,总并发症发生率6例（60%）；住院总费用10.16～43.48万元,中位费用17.44万元；4)CT测术后第1月移植物体积平均增加14.75%；术后2～3月平均每月增加3.75%；术后4～6月平均每月增加3.08%；术后半年移植物/标准肝体积比平均87.5%；PET/CT测18氟-脱氧葡萄糖（18F-FDG）的平均标准摄取率（SUVave）0.9～1.9;随访时间2～37个月,1例术后6个月死亡,最长存活时间27个月。第二部分：1)大鼠肝切术后6h开始出现死亡,术后8-12h为死亡高峰,70%、80%、90%肝体积切除组2周存活率分别为86.7%、80%、7%。2)80%及90%肝体积切除组术后8h、12h时血清ALT、AST浓度比70%组显着增高（P<0.05）,而80%与90%组之间无差异（P>0.05）；80%组术后24h、3天时血清ALT及AST浓度比70%肝体积切除组高（P<0.05）；术后7天左右各组ALT及AST浓度基本恢复正常。3)术后14天80%组剩余肝体积明显大于70%肝体积切除组（P<0.05）。4)三组肝脏组织形态无明显异常。第三部分：1)P3代BMSCs细胞表面的CD31、CD45、CD44、CD105、CDllb、CD29的阳性率分别为（12.0%、8%、1.2%、62.2%、1.5%、16.7%）；2)原位杂交技术检测示仅有BMSCs移植组表达SrY。3)核磁共振结果示BMSCs移植组肝脏上结节数量比单纯造模组多（P<0.05）；4)HE染色显示单纯造模组8只轻度肝纤维化形成；BMSC移植组中9只形成明显的肝纤维化,1只形成肝癌；空白对照组无肝纤维化形成。5)免疫组化显示BMSCs移植组比单纯造模组α-SMA阳性表达率高（P<0.05）；空白对照组无表达。TLR3主要表达于肝细胞包浆中；6)VG染色BMSCs移植组胶原区的百分比数比单纯造模组高（P<0.05）。7)western blotting结果显示BMSCs移植组比单纯造模组α-SMA蛋白水平高（P<0.05）,BMSCs移植组肝脏中TLR3、 NF-kBp65、IRF3蛋白水平及TLR3、IRF3mRNA表达比空白对照组和单纯造模组都高（P均<0.05）,单纯造模组稍高于空白对照组（P<0.05）；而TRIF蛋白表达水平在三组间无明显差异（P>0.05）。结论：1)对于外科原位手术切除极为困难或侵及下腔静脉无法切除的晚期肝AE可以通过ELRA术治疗,适应症为本研究纳入标准；CT和三维肝脏重建软件能够在术前准确评估肝脏病灶与主要管道关系,评价病灶侵犯程度和预测移植物体积,提高手术安全性；在无肝期个体化处理进行自体或人造血管腔静脉暂时性门体分流技术,下腔静脉重建技术和离体肝切除血管重建技术等综合应用安全、有效；术后移植肝再生主要发生在移植术后半年内,尤其是术后第1个月,术后2～6月逐渐放缓,半年后基本接近患者标准肝体积；ELRA术治疗晚期肝AE有良好的经济社会效益和独特的应用前景,有助于在国内外推广应用；2)大鼠肝切除量在80%以下是安全的,提示对于正常成人极限肝切体积有可能超越70%；且肝脏切除量越大,其增生体积越多；3)BMSCs在DEN所致的慢性肝损伤模型中具有促进肝纤维化的作用,并有致肝癌的可能；4)TLR3通路上的相关蛋白可能参与了慢性肝损伤肝再生修复过程,BMSCs在TLR3通路激活的微环境中可能倾向于分化为肝星状细胞、肌成纤维细胞,TLR3与BMSCs之间相互影响,并相互作用于对方,最终导致慢性肝损伤后肝纤维化形成。
赵丹丹[5]（2013）在《完全去神经对大鼠再生肝雌激素受体表达的影响研究》文中进行了进一步梳理目的：研究完全去神经对大鼠再生肝中雌激素受体表达的影响，进一步探讨神经对肝再生的调控机制。方法：将84只雄性SD大鼠随机分为2组（n=42）：部分肝切除（PH）组、完全去神经（PHT）组。两组大鼠分别在术后12h、24h、36h、48h、72h、120h、168h处死取大鼠肝脏；用免疫组织化学法检测大鼠再生肝组织中雌激素两个受体（ERα、ERβ）和细胞色素P450的表达；用实时荧光定量法（RT-PCR）检测大鼠再生肝细胞中ERαmRNA、ERβmRNA和细胞色素P450mRNA的表达。结果：（1）本实验成功构建大鼠2/3肝切除模型和完全去神经再生肝模型。（2）大鼠再生肝中ERα的表达：与PH组比较，PHT组大鼠在术后12h～168h的ERα表达量逐渐增多，在术后36h～120h表达与PH组趋势相同逐渐增多并保持稳定，但显着高于肝切除组（P<0.05），在术后168h的PHT组大鼠再生肝中ERα表达量达到峰值；（3）大鼠再生肝中ERβ表达：与PH组比，PHT组大鼠在术后12h～36h表达量逐渐增多，术后48h～120h表达能力逐渐减弱，数量逐渐减少为弱阳性表达，在术后168h又增多，在术后24h、36h、120h、168h有显着性差异（P<0.05），术后36h的ERβ表达量达到峰值。（4）大鼠再生肝中细胞色素P450表达：与PH组比，两组大鼠的表达量变化规律较为一致，PHT组大鼠在术后36h～120h表达量逐渐减少且在术后24h、48h、72h、120h表达有显着性差异（P<0.05），术后36h、168h表达量较高，168h达到峰值。（5）大鼠再生肝细胞中ERαmRNA表达：与PH组比，PHT组大鼠从术后12h至24h肝细胞内ERαmRNA表达量上升并达到峰值，术后48h～120h表达量显着性降低（P<0.05），术后24h和48h表达能力最强。（6）大鼠再生肝细胞中ERβmRNA表达结果：与PH组比，PHT组大鼠再生肝细胞在术后12h～72h大鼠体内ERβmRNA表达量明显减少（P<0.05），在120h表达量显着性增多（P<0.05）。（7）大鼠再生肝细胞中细胞色素P450mRNA表达结果：与PH组相比，PHT组大鼠在术后在术后12h～72h表达量显着性增强（P<0.05），120h再生肝细胞中P450mRNA表达量降低，在168h表达有显着性差异（P<0.05）。结论：（1）完全去神经在术后48h～120h对大鼠残肝再生有促进作用（2）完全去神经对大鼠残肝再生的调控机制可能通过促进再生肝细胞雌激素受体α的表达，抑制雌激素受体β的表达来调节大鼠肝细胞的增殖过程，并且可能通过再生肝细胞CYP450表达活性的升高来调节体内物质代谢，促进肝脏再生。
许惠仙[6]（2012）在《草苁蓉环烯醚萜苷对大鼠肝脏癌前病变保护机制的实验研究》文中研究表明目的：了解草苁蓉环烯醚萜苷（IGBR）对肝癌前病变的防治作用及IGBR对肝组织中凋亡相关蛋白、肝细胞生长因子（HGF）、转化生长因子β（TGF-β/smad）信号通路的关键蛋白以及金属蛋白酶（MMP）和组织金属蛋白抑制剂（TIMP）的表达水平的影响,探讨IGBR阻断癌前病变的机理。方法：将50只Wistar雄性大鼠适应性饲养一周后随机分为5个组,每组为10只,分别为假处理组、模型组、IGBR低剂量组、IGBR中剂量组、IGBR高剂量组。在实验开始第1天按0.1ml/100g给假处理组大鼠一次性腹腔注射生理盐水,并饲喂正常饲料共56天。余4组大鼠一次性经腹腔注射DEN200mg/kg,从第15天开始在饲料中添加0.008%乙酰氨基芴（AAF）,同时IGBR低、中、高剂量3个组分别按125、250、500mg/kg剂量灌胃IGBR至第56天。在实验第22天将所有组的大鼠肝脏行70%切除,第56天处死大鼠。实验期间观察大鼠一般状态,体重变化；测肝脏重量,计算肝脏再生度；用比色法测定肝匀浆及肝脏线粒体中天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物岐化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）、谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性及丙二醛（MDA）含量；用苏木精-伊红（HE）染色法,观察肝脏组织病理形态变化；用western blot法测定肝组织中HGF、bax、bcl-2、caspase-3、 TGF-β1、转化生长因子β1受体Ⅰ和Ⅱ（TPRⅠ、T3RⅡ）、smad2/3、smad4、 smad7、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、MMP-13、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2蛋白的表达变化。结果：1.IGBR促进大鼠食欲,能改善大鼠的精神状态、皮毛色泽。各组大鼠间无明显体重变化,但模型组肝脏重量明显高于其它组（P<0.05）。IGBR具有降低肝再生度及肝再生指数的趋势,但无统计学意义。2.组织病理学结果显示,模型组大鼠肝脏表面凹凸不平,质地硬,可见直径不等的结节,结节数明显多于其它组；HE染色结果显示,肝细胞失去正常排列,肝小叶结构消失,汇管区有以卵圆细胞为主的小细胞增生,纤维隔内有大量胶原沉积,有较明显纤维组织增生；肝细胞胞浆疏松,发生广泛的变性水肿,水样变性甚至气球样变性甚至灶状坏死,肝小叶中见嗜碱性肝细胞和玻璃样的透明肝细胞灶混合排列拥挤形成的肝细胞增生结节；IGBR干预后各剂量组大鼠肝脏较模型组表面光滑,边缘钝,灰白色结节较模型组减少；HE染色显示IGBR各剂量组大鼠肝小叶结构基本存在,可见嗜酸性细胞变性,肝细胞水肿较轻。有不同程度坏死灶,肝细胞异型性明显减少,病理性核分裂相减少,病变较轻。3.模型组大鼠肝组织匀浆和肝脏线粒体中AST、ALT、γ-GT活性升高,解毒酶GST活性和MDA含量显着高于假处理组,SOD、CAT、GSH-PX活性显着低于假处理组；IGBR干预后可降低大鼠肝组织匀浆和肝脏线粒体中ALT、AST、γ-GT、GST活性和MDA含量,升高SOD、CAT、GSH-PX活性。4.蛋白印迹实验结果显示,癌前病变大鼠肝组织中HGF、bcl-2、TGF-β1、 smad2/3、smad4、α-SMA、TIMP-1、MMP-2、TIMP-2蛋白表达增加,明显高于假处理组,caspase-3、smad7、MMP-13蛋白表达减少,显着低于假处理组： IGBR干预后可减少大鼠肝组织中HGF、TGF-β1、smad2/3、smad4、α-SMA、TIMP-1、MMP-2、TIMP-2蛋白的表达,增加bax、caspase-3、MMP-13蛋白表达。结论：IGBR对肝脏癌前病变具有明显的保护作用,其可能机制如下：1.IGBR可能增强肝脏抗氧化活性而抑制脂质过氧化作用。2.IGBR可抑制肝再生,可能与降低HGF水平有关。3.IGBR调节肝脏中bcl-2与bax的比值,诱导肝细胞凋亡。4.IGBR影响smad蛋白表达而调控TGF-β信号通路。5.IGBR降低肝脏α-SMA的表达,调节肝脏MMP和TIMP的比值,减少纤维化病变。
陈东,周奇,梁力建,殷晓煜,彭宝岗,李绍强,黄力,黄洁夫[7]（2011）在《胆道外引流对大鼠肝再生的影响及其细胞周期调控机制》文中研究表明目的:观察胆道外引流（ED）对大鼠肝再生及肝细胞周期的影响。方法:采用大鼠70%肝切除模型,SD大鼠随机分成6组,每组8只,分别为正常切肝24 h组、48 h组,阻塞性黄疸（OJ）切肝24 h组、48 h组,OJ后ED 3 d切肝24 h组、48 h组。采用增殖细胞核抗原（PCNA）标记和Feulgen染色测定肝再生能力;采用RT-PCR测定肝组织肝细胞生长因子（HGF）、p27和cyclin D1 mRNA水平变化;免疫组化法测定HGF、转化生长因子β1（TGF-β1）和p21在肝细胞的表达。结果:OJ切肝后PCNA标记指数较对照组低（P<0.05）,ED后PCNA标记指数更低,与OJ组对比差异显着（P<0.05）。DNA含量变化与PCNA标记指数相似。与正常切肝组比较,OJ后切肝组HGF mRNA下降（P<0.05）,ED后切肝组进一步下降并较OJ组低（P<0.05）。与正常组相比,OJ后切肝24 h和48 h cyclin D1 mRNA均下降（P<0.05,P<0.01）,ED后切肝组进一步下降,但差异不显着。与正常切肝组相比,48 h时OJ后切肝组高于正常切肝组（P<0.05）,ED后p27 mRNA水平较OJ进一步升高（P<0.05）。与正常切肝组比较,OJ后切肝组肝细胞HGF表达在24 h下降（P<0.05）,ED后切肝组进一步下降并较OJ组低（P<0.05）。p21表达各组间无显着差异。与正常切肝组相比,24 h时OJ后切肝组TGF-β1表达上调,差异显着（P<0.05）,ED后切肝组上调,但差异不显着。结论:OJ可造成大鼠肝再生能力下降,ED后其肝再生能力进一步降低。ED后肝再生能力下降可能和HGF、p27密切相关,与TGF-β1、p21、cyclin D1无关。
孙锋[8]（2011）在《缺血再灌注及缺血预处理大鼠肝部分切除术后肝再生的研究》文中认为第一部分缺血再灌注及缺血预处理大鼠肝部分切除肝再生动物模型目的建立大鼠肝脏缺血再灌注和缺血预处理肝大部分切除术后残余肝脏再生模型,探讨缺血再灌注和缺血预处理对大鼠肝大部切除术后残肝再生功能的影响,为以后的研究提供基础。方法健康的雌性Sprague-Dawley（S-D）大鼠随机分为三组：①、假手术组（sham-operation, S组）,n=6；②、缺血再灌注损伤状态下肝叶切除组（Ischemia Reperfusion, IR组）,无损伤血管夹阻断大鼠第一肝门25分钟后开放血流,阻断开始即行肝部分切除术（肝左、右叶,70%肝切除术）,手术时间约15分钟,n=27；③、缺血预处理组（Ischemic Preconditioning, IPC组）,即在肝门阻断前先行10分钟的肝脏缺血及10分钟的再灌注,再重复IR组操作,n=27。分别在术后4小时、24小时、48小时各处死6只实验大鼠进行取材和指标检测,应用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST、TBil含量结果残余肝细胞不同程度受损,细胞肿胀、脂肪变性、但无明显的细胞坏死,24小时和48小时IR组大鼠肝细胞肿胀及脂肪变性较IPC组变化明显。在4小时肝细胞再生不明显,24小时起肝细胞再生,IPC组核分裂相较为明显。随着肝叶切除后时间延长,血清ALT、AST在两组均逐渐增高,在24小时左右达最高峰后渐下降；术后各检测点,IR组大鼠的ALT和AST值高于IP组（P<0.05）。随着肝功能好转术后24小时起大鼠无死亡。结论大鼠70%肝切除术后,随着肝细胞再生,肝功能逐步恢复。IR组及IPC组再生肝组织24小时起均有不同程度的脂肪变性。IPC在早期可减轻肝细胞的损伤,24小时起可见核分裂相,血清ALT、AST值低于同一时间点IR组。缺血预处理在早期对肝细胞有一定的保护作用。第二部分缺血再灌注及缺血预处理大鼠肝部分切除后肝再生基因表达谱的变化肝脏缺血再灌注损伤（Iischemia reperfusion injury, IRI）是指不同原因导致肝脏缺血（血流中断或供应不足）,在血液再灌注后,肝细胞功能障碍和结构损伤反而加重的现象。IRI是肝脏外科如肝切除术、肝移植、肝外伤及休克等常见的病理生理过程,易诱发肝功能衰竭和多器官功能不全,使死亡率增高,成为影响手术后患者恢复和疾病预后的主要原因。肝脏具有强大的再生功能,在手术、毒素、感染等损伤因素致肝组织丧失后,残余肝组织通过细胞增殖以恢复肝功能。减轻肝脏缺血再灌注损伤、提高术后残余肝组织再生能力,对促进肝功能恢复有重要意义,然而肝脏缺血再灌注损伤对肝细胞再生影响的机制尚欠清楚。肝脏手术暂时性阻断肝脏血流或在肝移植的供肝保存及植入期间都不可避免地遭遇肝脏缺血再灌注损伤,肝脏的缺血再灌注损伤可导致全身炎症反应综合征和多系统器官衰竭,增加肝切除术和肝移植术后的死亡率,至今没有有效的预防和阻止肝脏缺血再灌注损伤的方法。研究证实,肝脏缺血预处理是一简单可行的降低肝脏缺血再灌注损伤的方法,缺血预处理是指器官在一次较长缺血再灌注之前短暂的缺血再灌注,以诱导机体产生一种内源性保护机制,提高组织或器官对后续较长时间缺血再灌注的耐受性,减轻由缺血再灌注造成的损伤。目的研究缺血再灌注和缺血预处理对大鼠肝部分切除术后肝组织再生过程中基因表达谱的动态变化的影响,探讨缺血再灌注损伤及缺血预处理对大鼠肝部分切除术后残肝再生影响的机制。方法健康的雌性Sprague-Dawley（S-D）大鼠随机分为三组：①、假手术组（sham-operation, S组）,n=6；②、缺血再灌注损伤状态下肝叶切除组（Ischemia Reperfusion, IR组）,无损伤血管夹阻断大鼠第一肝门25分钟后开放血流,阻断开始即行肝部分切除术（肝左、右叶,70%肝切除术）,手术时间约15分钟,n=27；③、缺血预处理组（Ischemic Preconditioning, IPC组）,即在肝门阻断前先行10分钟的肝脏缺血及10分钟的再灌注,再重复R组操作,n=27。分别在肝切除术后4小时、24小时、48小时各处死6只大鼠取再生肝组织。提取肝组织RNA,用Affmetrix RAT GeneArray LOST基因表达谱芯片筛选大鼠再生肝组织中差异表达基因,进行功能分析及归类。RT-PCR验证Socs3mRNA, Gadd45amRNA,Ptgs2mRNA, AnglmRNA及GckmRNA在再生肝组织中的表达。结果1、缺血再灌注大鼠肝部分切除术后残存肝组织再生肝再生中有差异表达基因1742个,涉及细胞周期调控基因、细胞生长及分化基因、DNA修复基因、物质代谢相关基因、生物氧化基因、炎症反应相关基因、信号传导相关基因、细胞因子相关基因、调亡相关基因等；差异表达基因显着性的表达趋势有8种。2、缺血预处理对大鼠肝部分切除术后残肝再生肝组织中筛选出差异表达基因1103个,涉及细胞周期调控基因、细胞生长及分化基因、DNA修复基因、代谢相关基因、炎症反应相关基因、细胞因子相关基因、生物氧化基因、信号传导相关基因、调亡相关基因等,差异表达基因显着性的表达趋势有7种。缺血预处理肝切除术后肝再生时糖代谢相关基因中与糖酵解有关的PK, GCK表达下调,氨基酸代谢相关基因变化较明显。结论缺血再灌注及缺血预处理后肝部分切除术肝再生是一多基因调控的动态变化过程,多种基因之间的相互作用共同协调促进肝再生。细胞生长及细胞周期相关基因均在肝部分切除术后肝再生的4小时开始上调,促进肝细胞再生；物质代谢相关基因表达开始下调,24小时后逐渐上调,以适应机体物质代谢及能量供应的需求。炎症相关基因及生物氧化基因在肝再生过程也显示出不同的功能。缺血预处理肝部分切除术肝再生中PK, GCK表达的变化有利于肝细胞能量平衡。第三部分缺血再灌注和缺血预处理大鼠肝部分切除肝再生时COX-2及GADD45a蛋白表达变化目的探讨缺血再灌注和缺血预处理大鼠肝大部切除术肝再生过程中COX-2蛋白及GADD45a蛋白表达的变化。方法健康的雌性Sprague-Dawley（S-D）大鼠随机分为三组：健康的雌性Sprague-D awley（S-D）大鼠随机分为三组：①、假手术组（sham-operation, S组）,n=6；②、缺血再灌注损伤状态下肝叶切除组（Ischemia Reperfusion, IR组）,无损伤血管夹阻断大鼠第一肝门25分钟后开放血流,阻断开始即行肝部分切除术（肝左、右叶,70%肝切除术）,手术时间约15分钟,n=27；③、缺血预处理组（Ischemic Preconditioning, IPC组）,即在肝门阻断前先行10分钟的肝脏缺血及10分钟的再灌注,再重复IR组操作,n=27。分别在术后4小时、24小时、48小时各处死6只实验大鼠进行取材和指标检测,用Western blot检测肝组织COX-2蛋白和GADD45a蛋白表达。结果1、IR组和IPC组与sham组比较,COX-2蛋白表达量明显增加（p<0.01）,且4小时表达量多于24小时及48小时（P<0.01）；R组COX-2蛋白表达比IPC组明显,以4小时表达最明显（P<0.01）。2、在4小时IR组和IPC组GADD45a的表达比S组明显,即GADD45a蛋白的表达量增加（P<0.01）；而24小时、48小时IR组和IPC组GADD45a的表达与S组比较无明显变化（P>0.05）。IPC组GADD45a表达在4小时高于IR组（P<0.01）。结论我们认为肝细胞COX-2的表达与肝脏缺血再灌注损伤有关,缺血预处理通过减少COX-2的表达可能有助于减轻早期肝缺血再灌注损伤,同时缺血预处理可通过激活3ADD45a的表达,促进损伤DNA的修复,通过调控细胞周期,有助于增加肝细胞的增殖。
常翠芳[9]（2011）在《大鼠再生肝中星形细胞的基因表达谱分析》文中研究说明肝脏是人体的重要器官,其强大的再生能力亦为学者重视。通常,人们用Higgins和Anderson建立的大鼠2/3肝切除模型（partial hepatectomy,PH）和肝组织材料研究肝再生（liver regeneration,LR）机理,但肝脏由多种细胞组成,若将再生肝的各种细胞分离出来分别进行研究,将会使研究更加明晰、简化和易行。肝星形细胞（hepatic stellate cells,HSCs）是肝脏特有的间充质细胞,位于肝索与肝窦壁之间的Disse间隙中,表面突起附于窦内皮细胞外表面及肝细胞表面,内含粗面内质网、Golgi复合体及许多大小不一的脂滴,具有维生素A储存和运输功能;脂肪吸收功能;参与肝细胞、肝脏损伤应答和修复;是一种专职抗原递呈细胞,能吞噬凋亡小体,参与肝免疫炎症调节;是肝内胞外基质和趋化因子等细胞因子主要的分泌细胞。大量证据表明星形细胞在肝再生中起关键作用。近来尽管有关星形细胞的研究报道越来越多,但在基因组范围内研究肝再生中星形细胞生理活动变化的并不多。另外,在基因组范围内研究星形细胞的新技术虽然不断涌现,但目前对星形细胞在肝再生中作用的认识主要来自传统的研究方法。因此若能检测它们在肝再生的动态表达谱,就有可能揭示星形细胞在肝再生中的作用机制。本文按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%的Percoll密度梯度离心和免疫磁珠分离肝星形细胞,用结蛋白（desmin,DES）和波形蛋白（vimentin,VIM）的免疫组织化学方法定位、定性再生肝（regenerating liver,RL）和分散肝脏细胞中的肝星形细胞及分离的肝星形细胞,用RT-PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量肝星形细胞的DES和VIM蛋白。初步证实,分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定。用Rat Genome 230 2.0芯片检测大鼠2/3肝切除后恢复0、2、6、12、24、30、36、72、120、168h等10个时间点的大鼠再生肝星形细胞的基因表达谱,用RT-PCR和免疫印迹方法检验了芯片检测结果的可靠性,用生物信息学和系统生物学等方法分析它们在大鼠肝再生中的表达变化。结果表明2609个基因与肝再生相关,包括1186个表达上调、1212个表达下调和211个表达上/下调基因。PCA分析它们在PH后不同时点星形细胞的基因转录谱特征表明,9个时间点的基因表达谱明显的聚集均为三组,即6、24和30h,2、12和36h,72、120和168h,且主要在2、12和36h组表达上调。为探讨1183个新基因在肝再生中作用,本研究首先通过电子克隆和ORF finder序列分析工具预测它们编码的氨基酸序列,发现其中的936个新基因有相应的蛋白。将它们与本实验室建立的大鼠蛋白质亚细胞定位数据集中的蛋白序列比对,以预测它们的亚细胞位置。结果发现,大部分基因编码产物定位在细胞基质、细胞核、细胞质膜和线粒体中。协同作用分析1426个已知基因涉及的60类生理活动在再生肝星形细胞中的变化表明,跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路、细胞建成、细胞生长、细胞分化、细胞凋亡、糖类分解等活动在肝再生启动阶段增强,SMO信号通路、核酸分解、糖类合成、蛋白质分解、胶原合成、神经递质运输、有机酸运输、离子运输等活动在肝再生进展阶段增强,蛋白激酶信号通路、细胞增殖、辅因子分解等活动在肝再生终止阶段增强,脂类运输、跨膜运输等活动在肝再生启动和进展阶段增强;而细胞粘附、细胞因子合成等活动在肝再生进展阶段减弱,免疫反应激活的信号通路、一氧化氮介导的信号通路、氨基酸及其衍生物合成、脂类运输、神经递质运输、氧运输在肝再生终止阶段减弱,一氧化氮介导的信号通路、小GTP酶介导的信号通路等活动在肝再生启动和进展阶段减弱。本研究证实Rat Genome 230 2.0表达谱芯片的检测结果是可靠的;再生肝星形细胞的增殖主要在PH后36h开始,主要通过跨膜受体蛋白酪氨酸激酶信号通路和细胞因子介导的信号通路的调控完成;胰岛素样生长因子及其结合蛋白含量的增加,对星形细胞的生长有明显的促进作用;星形细胞会在生长激素的刺激下马上展现分化的特征,但是随着肝再生的进程,Notch信号通路会抑制星形细胞的分化。
陈晓光[10]（2011）在《大鼠肝再生中基因组范围内的窦内皮细胞转录谱动态分析》文中研究表明哺乳类动物肝脏在物理的（如部分肝切除、缺血/再灌注）或化学的（如CCL4）刺激后,便显示出强大的再生能力。肝脏是一种由十多种细胞构成的复杂器官,肝脏结构及其功能的恢复要依赖各种肝脏细胞体积和数量的增加,以及不同肝脏细胞或同种细胞间的相互作用。作为组成肝脏的主要非实质细胞,肝窦内皮细胞（Liver sinusoidial endithlial cells, LSEC）在肝再生启动中起重要作用。但目前在分子水平上有关肝窦内皮细胞在肝再生中作用的研究很少。因此,本论文试图通过检测窦内皮细胞的基因动态表达谱以揭示它与肝脏再生的关系。首先,我们按Higgins等描述的方法建立大鼠70%部分肝切除（Partial hepatectomy, PH）动物模型,用两步灌流和胶原酶消化法分散肝脏细胞,用Percoll密度离心与抗CD31-免疫磁珠分选相结合的方法分离纯化PH后10个不同恢复时点的再生肝窦内皮细胞。利用窦内皮细胞标志蛋白CD14和ET-1进行免疫细胞化学检测窦内皮细胞的纯度,分析显示分离的窦内皮细胞纯度在95%以上。最后用含11789个已知基因和13231个未知基因,占大鼠基因组基因85%的Rat Genome 230 2.0芯片检测了PH后10个恢复时间点大鼠再生肝窦内皮细胞的基因转录谱。为验证芯片结果的可靠性,本研究用荧光定量RT-PCR检测了再生肝窦内皮细胞中GAPDH、UBC、JUN、TTR、MYC、PCNA、APOE、TRIM24、CD14和ET-1等10个基因的表达变化情况,对肝窦内皮细胞的芯片检测结果进行分析,发现共1629个基因与肝再生相关,包括833个已知基因及796个功能未知的未知基因。K-means方法分析显示,833个已知基因大致呈现8种表达模式:即（1）肝再生启动期快速上调,PH后6 h达到表达高峰,然后快速降低,72 h时再次达到高峰;（2）肝再生增殖期显着上调,然后逐渐减弱;（3）肝再生启动期快速上调,并迂回减弱,终止期再次上调;（4）PH后逐渐上调;（5）PH后快速下调并快速恢复;（6）PH后快速下调并逐渐恢复;（7）PH后整体下调,30 h达到最低;（8）肝再生早期稍微上调后逐渐下调,终止期达到最低。基因功能分析显示,这些基因参与细胞信号转导、凝血反应、血管形成、血管收缩、细胞代谢、细胞发生、生长、增殖、分化、免疫炎症、解毒、活性物质分泌等多种生物活动。用Fisher精确检验分析这些基因功能群在8种表达模式中的富集情况,并结合通过普函数计算的基因协同效应发现,PH后短时间内,参与窦内皮细胞重要生理功能（凝血、细胞吞噬和物质运输）的基因被激活,表明肝再生早期窦内皮细胞功能有恢复的趋势;解毒相关基因在再生早期表达增强,利于肝再生中废物的清除;活性物质分泌调控活动在PH后6 h开始增强,与下游细胞因子基因表达在时间上相偶联;免疫炎症、防御应答及免疫炎症信号途径相关基因虽在再生早期减弱,但协同效应结果显示它们肝再生几乎无显着变化,很显然基因的协同效应并非是单个基因作用的简单叠加;氨基酸代谢在肝再生早期增强,在终止期减弱;糖合成相关基因在再生早期表达上调,而糖代谢基因在再生后期表达减弱,根据协同效应结果发现,肝再生早期窦内皮细胞的糖合成活动增强,终止阶段无论糖合成还是糖酵解活动均减弱。另外,细胞增殖相关基因的表达在部分肝切除术30 h后恢复,这有利于肝再生中肝窦内皮细胞增殖。总之,肝再生中基因功能群富集和基因协同作用相结合的分析方法将助于揭示窦内皮细胞与大鼠肝再生的相关性。为探讨796个未知基因在肝再生中作用,本研究首先通过电子克隆预测它们编码的氨基酸序列,发现其中486个未知基因具有相应的氨基酸序列。根据本实验室建立的大鼠蛋白质亚细胞定位方法进行预测,发现大部分基因编码产物定位在细胞外基质、细胞质膜和细胞核中,表明它们可能参与组织结构重建、细胞膜形成和基因转录调控等活动。总之,上述预测结果为下一步实验研究其功能提供了有价值的参考。
二、肝切除后大鼠Ito细胞肝细胞生长因子mRNA表达的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、肝切除后大鼠Ito细胞肝细胞生长因子mRNA表达的变化（论文提纲范文）
（1）1、核受体共激活因子NCoA6在肝细胞性肝癌发生发展中的作用及其分子调控机制的研究2、腹腔镜对比开腹右半肝切除术治疗肝细胞性肝癌的倾向性得分配对对照研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 中英文缩写词对照表 |
| 第一部分核受体共激活因子NC〇A6在肝细胞性肝癌发生发展中的作用及其分子调控机制的研究 |
| 绪论 |
| 第一节 NCoA6在肝细胞肝癌中的表达及其与临床病理特征之间的相关性分析 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二节 NCoA6对肝细胞肝癌生物学行为的调控作用 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三节 NCoA6通过PI3K/Akt/mTOR和NF-κB信号通路促进肝癌细胞增殖 |
| 1 引言 |
| 2 实验材料与方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 腹腔镜对比开腹右半肝切除术治疗肝细胞性肝癌的倾向性得分配对对照研究 |
| 前言 |
| 1 资料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历 |
（2）门静脉结扎术促进梗阻性黄疸大鼠肝脏再生的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略词 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一部分: 门静脉结扎术促进梗阻性黄疸大鼠肝脏再生 |
| 引言 |
| (一)、材料和方法 |
| (二)、结果 |
| (三)、讨论 |
| 第二部分: 门静脉结扎术促进梗阻黄疸大鼠肝再生信号转导通路的初步研究 |
| 引言 |
| (一)、材料和方法 |
| (二)、结果 |
| (三)、讨论 |
| 结论 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 博士研究生期间立项课题和发表论文情况 |
| 致谢 |
（3）肝硬化大鼠部分肝切除后肝再生过程中HGF/C-met通路的差异性表达（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、大鼠肝硬化模型及部分肝切除模型的建立 |
| 1.1 材料和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要实验试剂及仪器设备 |
| 1.1.3 手术器械 |
| 1.1.4 肝硬化大鼠模型制备 |
| 1.1.5 大鼠70%肝切除模型的建立 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 肝硬化成模过程中大鼠的大体观 |
| 1.2.2 肝硬化成模后肝脏的形态及病理改变 |
| 1.2.3 部分肝切除术中大体改变 |
| 1.2.4 术后观察 |
| 1.2.5 建模及术后生存率观察以及死亡原因分析 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 建立肝硬化大鼠肝部分切除动物模型的价值 |
| 1.3.2 大鼠肝硬化模型的建立及依据 |
| 1.3.3 大鼠70%部分肝切除模型的建立及依据 |
| 1.3.4 模型建立的难点及成功的关键 |
| 1.3.5 模型的可行性及稳定性 |
| 1.4 小结 |
| 二、HGF/c-met通路在肝硬化大鼠部分肝切除术后肝再生过程中的差异性表达 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要实验试剂及仪器设备 |
| 2.1.3 实验方法 |
| 2.1.4 标本取材和处理 |
| 2.1.5 指标检测 |
| 2.1.6 统计学方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 大鼠一般状态及肝再生情况观察 |
| 2.2.2 两组大鼠血清HGF的变化 |
| 2.2.3 两组大鼠血清HGFA的变化 |
| 2.2.4 两组大鼠肝脏中C-met蛋白免疫组化阳性表达率的变化 |
| 2.2.5 两组肝组织各个时间点HGF mRNA的表达情况 |
| 2.2.6 两组肝组织各个时间点C-met mRNA的表达情况 |
| 2.2.7 两组脾源性HAI-1 mRNA的表达情况 |
| 2.2.8 两组脾源性HAI-2 mRNA的表达情况 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 探讨硬化肝脏部分切除术后再生的意义 |
| 2.3.2 动物模型的选择 |
| 2.3.3 HGF/C-met通路在肝再生过程中的作用 |
| 2.3.4 HGF/C-met通路相关的影响因子 |
| 2.3.5 HGF/C-met通路在硬化肝脏切除后再生过程中表达的研究现状 |
| 2.3.6 本次实验中相关因子检测方法的选择 |
| 2.3.7 实验结果分析 |
| 2.3.8 本研究的不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
（4）自体肝移植的临床和相关实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 自体肝移植治疗晚期肝泡型包虫病临床研究 |
| 1. 资料和方法 |
| 1.1 临床资料 |
| 1.2 纳入标准和排除标准 |
| 1.3 手术前准备与评估 |
| 1.4 移植手术步骤 |
| 1.5 围移植期指标和临床路径探讨 |
| 1.6 病例随访 |
| 1.7 统计分析方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 4. 小结 |
| 第二部分 肝切除与再生的大鼠实验观察 |
| 1. 内容和方法 |
| 1.1 实验动物和分组 |
| 1.2 主要试剂和仪器 |
| 1.3 大鼠肝部分切除 |
| 1.4 术后观察指标 |
| 2 统计学方法 |
| 3. 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 慢性肝损伤与再生修复的大鼠实验研究 |
| 实验一 骨髓间充质干细胞在慢性肝损伤与再生修复中的作用 |
| 1. 内容和方法 |
| 1.1 实验动物的选择与分组 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 1.3 骨髓间充质干细胞的的提取、分离培养、纯化、扩增 |
| 1.4 骨髓间充质干细胞的鉴定 |
| 1.5 肝损伤动物模型的建立 |
| 1.6 大鼠肝脏的影像学检查 |
| 1.7 标本采集与处理 |
| 1.8 大鼠肝脏HE染色 |
| 1.9 原位杂交检测大鼠肝脏SrY阳性细胞表达 |
| 1.10 大鼠肝脏α-SMA免疫组织化学的检测 |
| 1.11 VG染色检测大鼠肝纤维化情况 |
| 1.12 Western blot检测大鼠肝脏α-SMA表达水平 |
| 1.13 统计学分析方法 |
| 1.14 结果判定方法 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 实验二 TLR3通路在慢性肝损伤与再生修复中的作用 |
| 1. 内容和方法 |
| 1.1 实验动物的选择与分组 |
| 1.2 主要试剂及仪器 |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 免疫组织化学检测大鼠肝脏TLR3的表达 |
| 1.3.2 Western Blotting法检测大鼠肝脏细胞TLR3、NF-Kapa65、IRF3、TRIF的蛋白水平 |
| 1.3.3 FQ-RT-PCR检肝脏组织TLR3、IRF3、mRNA表达 |
| 1.4 统计学分析 |
| 2. 结果 |
| 3. 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（5）完全去神经对大鼠再生肝雌激素受体表达的影响研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 肝脏的结构与神经分布 |
| 1.1.1 肝脏及其功能 |
| 1.1.2 肝脏的神经分布 |
| 1.2 神经对肝脏的调节 |
| 1.2.1 迷走神经的调节作用 |
| 1.2.2 交感神经的调节作用 |
| 1.3 肝脏再生机理 |
| 1.3.1 肝脏损伤程度与肝再生的关系 |
| 1.3.2 肝再生能力与肝再生的关系 |
| 1.3.3 营养支持与肝脏再生的关系 |
| 1.3.4 肝脏再生不同阶段正负调控因子的调节 |
| 1.4 大鼠肝再生研究现状 |
| 1.4.1 MMP-2 与肝再生的关系 |
| 1.4.2 血管内皮生长因子与肝再生的关系 |
| 1.4.3 雌激素受体与肝再生的关系 |
| 1.4.4 细胞色素 P450 与肝再生的关系 |
| 1.5 研究的目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要试剂配制 |
| 2.1.4 主要手术器械 |
| 2.1.5 主要仪器 |
| 2.2 动物模型制备 |
| 2.2.1 术前准备 |
| 2.2.2 大鼠 2/3 肝切除组和对照组模型的建立 |
| 2.2.3 大鼠肝脏完全去神经再生肝模型的建立 |
| 2.2.4 术后管理 |
| 2.3 免疫组化法检测雌激素受体 ERα、ERβ、CYP450 的表达 |
| 2.3.1 动物分组、取材 |
| 2.3.2 石蜡包埋、制片 |
| 2.3.4 二步法免疫组化检测 ERα的表达 |
| 2.3.5 二步法免疫组化检测 ERβ的表达 |
| 2.3.6 二步法免疫组化检测 CYP450 的表达 |
| 2.4 实时定量法（RT-PCR）检测大鼠肝脏细胞雌激素受体 ERαmRNA、ERβmRNA CYP450 mRNA 表达 |
| 2.4.1 动物分组与取材 |
| 2.4.2 总 RNA 提取与纯化 |
| 2.4.3 cDNA 合成与纯化 |
| 2.4.4 Real-time PCR 引物设计 |
| 2.4.5 实时荧光定量 PCR 反应 |
| 2.5 统计学处理 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 动物模型的建立及成功关键因素 |
| 3.2 免疫组织化学法检测大鼠再生肝中 ERα、ERβ、CYP450 的表达 |
| 3.2.1 肝切除和完全去神经再生肝中 ERα的表达 |
| 3.2.2 肝切除和完全去神经再生肝中 ERβ的表达 |
| 3.2.3 肝切除和完全去神经再生肝中 CYP450 的表达 |
| 3.3 RT-PCR 法检测再生肝中 ERαmRNA、ERβmRNA 及 P450 mRNA 的表达 |
| 3.3.1 总 RNA 浓度测定和质量鉴定 |
| 3.3.2 RT-PCR 反应结果 |
| 3.3.3 完全去神经对再生肝细胞中 ERα表达的影响 |
| 3.3.4 完全去神经对再生肝细胞中 ERβ表达的影响 |
| 3.3.5 完全去神经对再生肝细胞中 CYP450 表达的影响 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 大鼠肝脏完全去神经模型构建方法的选择 |
| 4.2 完全去神经对大鼠再生肝中 ERα表达的影响 |
| 4.3 完全去神经对大鼠再生肝中 ERβ表达的影响 |
| 4.4 完全去神经对大鼠再生肝中 CYP450 表达的影响 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表论文的清单 |
（6）草苁蓉环烯醚萜苷对大鼠肝脏癌前病变保护机制的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 第二章 材料 |
| 2.1 试剂及药品 |
| 2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验动物 |
| 2.4 饲料 |
| 2.5 外科手术器械 |
| 第三章 方法 |
| 3.1 实验动物的分组 |
| 3.2 制作肝癌前病变模型及实验动物的处理 |
| 3.3 观察指标 |
| 3.4 统计学分析 |
| 第四章 结果 |
| 4.1 大鼠的一般状态,体重 |
| 4.2 大鼠肝脏外观形态、肝脏再生度、肝再生指数 |
| 4.3 大鼠肝脏组织HE染色结果 |
| 4.4 大鼠肝脏GST-P免疫组化结果 |
| 4.5 IGBR对癌前病变大鼠肝脏组织中ALT、AST、γ-GT活性的影响 |
| 4.6 IGBR对癌前病变大鼠肝脏组织中GST、SOD、CAT、GSH-PX活性的影响 |
| 4.7 IGBR对癌前病变大鼠肝脏组织中MDA含量的影响 |
| 4.8 IGBR对癌前病变大鼠肝脏组织中HGF蛋白表达的影响 |
| 4.9 IGBR对癌前病变大鼠肝脏组织中调亡相关蛋白表达的影响 |
| 4.10 IGBR对癌目I」病变大鼠肝脏组织中TGF-0 /smad信号转导通路表达的影响 |
| 4.11 IGBR对癌前病变大鼠肝组织中a SMA蛋白表达的影响 |
| 4.12 IGBR对癌别病变大鼠肝脏组织中MMP-13、TIMP-1、MMP-2、TIMP-2蛋白表达的影响 |
| 第五章 讨论 |
| 第六章 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 英文缩略语 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间已发表文章 |
（7）胆道外引流对大鼠肝再生的影响及其细胞周期调控机制（论文提纲范文）
| 材 料 和 方 法 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 手术方法 |
| ① 经典OJ模型 |
| ② 改进OJ模型和ED方法[3] |
| ③ 70%肝切除 (partial hepatectomy) |
| 2.3 Feulgen染色测DNA含量 |
| 2.4 逆转录聚合酶链反应 (reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR) 检测HGF、cyclin D1和p27 mRNA |
| 2.5 免疫组化染色检测增殖细胞核抗原 (proliferating cell nuclear antigen, PCNA) 、HGF、TGF-β1和p21 |
| 3 统计学处理 |
| 结 果 |
| 1 肝组织PCNA和DNA含量 (Feulgen染色) 的变化 |
| 2 大鼠肝组织HGF、cyclin D1和p27 mRNA水平的变化 |
| 3 大鼠肝细胞HGF、p21和TGF-β1表达的变化 |
| 讨 论 |
| 1 胆道外引流对OJ大鼠肝再生的影响 |
| 2 胆道外引流对OJ大鼠肝再生的细胞周期调控机制 |
（8）缺血再灌注及缺血预处理大鼠肝部分切除术后肝再生的研究（论文提纲范文）
| 中英文名词对照与缩写 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一部分 缺血再灌注及缺血预处理大鼠肝部分切除肝再生动物模型 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 缺血再灌注及缺血预处理大鼠肝部分切除肝再生基因表达谱的变化 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 缺血再灌注及缺血预处理大鼠肝部分切除肝再生时COX-2蛋白及GADD45α蛋白表达变化 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 发表及待发表文章情况 |
| 在读期间获奖情况 |
| 致谢 |
（9）大鼠再生肝中星形细胞的基因表达谱分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 肝再生研究进展 |
| 1.1 肝脏的结构和功能 |
| 1.2 肝再生 |
| 1.3 肝再生模型 |
| 1.4 肝再生的调控 |
| 2 肝星形细胞与肝再生 |
| 2.1 肝星形细胞的结构 |
| 2.2 肝星形细胞的功能 |
| 2.3 肝星形细胞的标志物 |
| 2.4 肝星形细胞与肝再生的相关性 |
| 2.5 肝星形细胞的分离、纯化 |
| 3 本论文研究目的及意义 |
| 3.1 研究的目的和目标 |
| 3.2 理论意义和应用前景 |
| 参考文献 |
| 第二部分 大鼠肝再生中星形细胞在基因组范围内的转录谱分析 |
| 引言 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1 实验动物 |
| 2 大鼠2/3 肝切除模型构建 |
| 3 再生肝星形细胞的制备 |
| 3.1 工作液配制 |
| 3.2 再生肝星形细胞的分离、纯化 |
| 4 再生肝组织的免疫组织化学 |
| 4.1 工作液配制 |
| 4.2 防脱载玻片制作 |
| 4.3 取材固定 |
| 4.4 石蜡切片制作 |
| 4.5 石蜡切片染色 |
| 5 再生肝星形细胞的免疫组织化学 |
| 5.1 细胞涂片制作 |
| 5.2 染色 |
| 6 免疫印记 |
| 6.1 工作液配制 |
| 6.2 蛋白样品制备和浓度测定 |
| 6.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 |
| 6.4 蛋白免疫印迹 |
| 6.5 阳性条带分析 |
| 7 总RNA 提取与纯化 |
| 7.1 总RNA 提取 |
| 7.2 总RNA 的质量检测 |
| 7.3 总RNA 纯化 |
| 7.4 纯化总RNA 的定量和质检 |
| 8 荧光定量PCR |
| 8.1 引物的设计与合成 |
| 8.2 标准曲线的制备 |
| 8.3 定量PCR 检测 |
| 8.4 定量分析 |
| 9 Rat Genome 230 2.0 芯片检测 |
| 9.1 总RNA 提取与纯化 |
| 9.2 cDNA 的合成和纯化 |
| 9.3 cRNA 的合成和纯化 |
| 9.4 cRNA 片段化 |
| 9.5 芯片杂交、洗脱和扫描 |
| 9.6 芯片检测数据分析 |
| 10 大鼠再生肝的星形细胞肝再生相关基因的确认 |
| 11 大鼠再生肝的星形细胞肝再生相关基因的功能注释 |
| 12 大鼠再生肝的星形细胞肝再生相关基因表达模式分析 |
| 13 大鼠再生肝的星形细胞肝再生相关基因聚类分析 |
| 14 大鼠再生肝星形细胞中新基因的功能预测 |
| 14.1 预测新基因的cDNA 和氨基酸序列 |
| 14.2 建立大鼠蛋白亚细胞定位方法 |
| 14.3 预测新基因编码产物的亚细胞定位 |
| 15 大鼠再生肝星形细胞肝再生相关基因编码的蛋白互作分析 |
| 16 大鼠再生肝和星形细胞中基因协同作用和各种生理活动的相关性分析 |
| 第二章 研究结果 |
| 1 再生肝细胞分散率、收率及分离的星形细胞纯度、活性 |
| 2 再生肝的组织结构和星形细胞结构 |
| 3 荧光定量PCR 检测结果与Rat Genome 230 2.0 芯片检测结果比较 |
| 4 蛋白免疫印迹检测结果及其与Rat Genome 230 2.0 芯片检测结果比较 |
| 5 大鼠肝再生中星形细胞的基因表达谱 |
| 6 大鼠再生肝星形细胞中肝再生相关新基因的功能预测 |
| 7 大鼠肝再生中星形细胞已知基因涉及的生理活动 |
| 7.1 大鼠再生肝星形细胞中信号传导相关基因的表达变化 |
| 7.2 大鼠再生肝星形细胞中损伤相关基因的表达变化 |
| 7.3 大鼠再生肝星形细胞中应激反应相关基因的表达变化 |
| 7.4 大鼠再生肝星形细胞中免疫反应相关基因的表达变化 |
| 7.5 大鼠再生肝星形细胞中炎症反应相关基因的表达变化 |
| 7.6 大鼠再生肝星形细胞中细胞活化相关基因的表达变化 |
| 7.7 大鼠再生肝星形细胞中细胞建成相关基因的表达变化 |
| 7.8 大鼠再生肝星形细胞中细胞增殖相关基因的表达变化 |
| 7.9 大鼠再生肝星形细胞中细胞生长相关基因的表达变化 |
| 7.10 大鼠再生肝星形细胞中细胞分化相关基因的表达变化 |
| 7.11 大鼠再生肝星形细胞中细胞凋亡相关基因的表达变化 |
| 7.12 大鼠再生肝星形细胞中细胞粘附相关基因的表达变化 |
| 7.13 大鼠再生肝星形细胞中细胞迁移相关基因的表达变化 |
| 7.14 大鼠再生肝星形细胞中DNA 修复相关基因的表达变化 |
| 7.15 大鼠再生肝星形细胞中氨基酸及其衍生物代谢相关基因的表达变化 |
| 7.16 大鼠再生肝星形细胞中核酸代谢相关基因的表达变化 |
| 7.17 大鼠再生肝星形细胞中糖类代谢相关基因的表达变化 |
| 7.18 大鼠再生肝星形细胞中脂类代谢相关基因的表达变化 |
| 7.19 大鼠再生肝星形细胞中蛋白质代谢相关基因的表达变化 |
| 7.20 大鼠再生肝星形细胞中有机酸代谢相关基因的表达变化 |
| 7.21 大鼠再生肝星形细胞中辅因子代谢相关基因的表达变化 |
| 7.22 大鼠再生肝星形细胞中胶原代谢相关基因的表达变化 |
| 7.23 大鼠再生肝星形细胞中细胞因子合成相关基因的表达变化 |
| 7.24 大鼠再生肝星形细胞中运输相关基因的表达变化 |
| 8 肝星形细胞与再生肝组织的转录谱及生理活动差异 |
| 第三章 讨论 |
| 1 肝星形细胞中的物质运输与大鼠肝再生 |
| 2 肝星形细胞中的细胞建成与大鼠肝再生 |
| 3 肝星形细胞中的细胞增殖与大鼠肝再生 |
| 4 肝星形细胞中的细胞生长与大鼠肝再生 |
| 5 肝星形细胞中的细胞分化与大鼠肝再生 |
| 6 肝星形细胞中的细胞凋亡与大鼠肝再生 |
| 7 肝星形细胞中的氨基酸及其衍生物代谢与大鼠肝再生 |
| 8 肝星形细胞中的核酸代谢与大鼠肝再生 |
| 9 肝星形细胞中的糖类代谢与大鼠肝再生 |
| 10 肝星形细胞中的蛋白质代谢与大鼠肝再生 |
| 11 肝星形细胞中的辅因子代谢与大鼠肝再生 |
| 12 肝星形细胞中的胶原代谢与大鼠肝再生 |
| 13 肝星形细胞中的细胞因子合成与大鼠肝再生 |
| 参考文献 |
| 第三部分 小结 |
| 附录 1 英文缩略语 |
| 附录 2 主要实验仪器 |
| 个人简介 |
| 在攻读博士学位期间参加的科研项目和发表的论文 |
| 致谢 |
（10）大鼠肝再生中基因组范围内的窦内皮细胞转录谱动态分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 文献综述 |
| 1 肝脏 |
| 1.1 肝脏的结构 |
| 1.2 肝脏的功能 |
| 2 肝再生 |
| 2.1 肝再生动物模型 |
| 2.2 肝再生进程及调控 |
| 2.3 肝再生中肝脏细胞间相互作用关系 |
| 3 肝窦内皮细胞与肝再生 |
| 4 肝窦内皮细胞 |
| 4.1 肝窦内皮细胞的结构 |
| 4.2 肝窦内皮细胞的异质性 |
| 4.3 肝窦内皮细胞的标志物 |
| 4.4 肝窦内皮细胞表面的特异受体 |
| 4.5 肝窦内皮细胞的功能 |
| 5 肝窦内皮细胞的分离和纯化 |
| 6 高通量基因表达谱检测 |
| 参考文献 |
| 第二部分 大鼠肝再生中肝窦内皮细胞的基因表达谱分析 |
| 引言 |
| 第一章 材料与方法 |
| 1 实验动物与分组 |
| 2 大鼠2/3 肝切除模型制备 |
| 2.1 实验用品 |
| 2.2 操作步骤 |
| 3 大鼠肝脏细胞的分散 |
| 3.1 实验用品 |
| 3.2 试剂配制 |
| 3.3 操作步骤 |
| 4 肝窦内皮细胞的分离和纯化 |
| 4.1 实验用品 |
| 4.2 试剂配制 |
| 4.3 操作步骤 |
| 5 肝窦内皮细胞的鉴定 |
| 5.1 免疫细胞化学检测 |
| 5.2 免疫组织化学检测 |
| 5.3 Western blot 检测 |
| 6 总RNA 的提取与纯化 |
| 6.1 总RNA 的提取 |
| 6.2 RNA 质量检测 |
| 6.3 总RNA 的纯化 |
| 6.4 纯化的总RNA 质量检测 |
| 7 cDNA、cRNA 的合成与纯化 |
| 7.1 cDNA 的合成与纯化 |
| 7.2 cRNA 的合成与纯化 |
| 8 cRNA 片段化和Rat Genome 230 2.0 芯片检测 |
| 8.1 cRNA 片段化 |
| 8.2 杂交液的配制 |
| 8.3 芯片预杂交和杂交 |
| 8.4 芯片洗脱 |
| 8.5 芯片扫描 |
| 8.6 芯片检测数据的获取、预处理、均一化及数据转换 |
| 8.7 芯片检测数据的校正 |
| 9 荧光定量RT-PCR 检测芯片结果的可靠性 |
| 9.1 引物的设计与合成 |
| 9.2 标准曲线的建立 |
| 9.3 定量PCR 检测 |
| 9.4 定量分析 |
| 10 基因芯片数据分析 |
| 10.1 大鼠再生肝窦内皮细胞中肝再生相关基因的确认 |
| 10.2 基因的聚类分析 |
| 10.3 基因的表达模式分析 |
| 11 基因功能注释及统计学分析 |
| 12 基因协同作用分析 |
| 13 大鼠未知基因编码产物的亚细胞定位预测 |
| 13.1 未知基因电子克隆 |
| 13.2 大鼠蛋白亚细胞定位方法的建立 |
| 13.3 预测未知基因编码产物的亚细胞定位 |
| 第二章 研究结果 |
| 1 大鼠肝再生中肝系数变化 |
| 2 大鼠肝再生中肝窦内皮细胞形态结构变化 |
| 3 大鼠肝再生中肝窦内皮细胞数量变化 |
| 4 大鼠肝再生中窦内皮细胞的标志蛋白及其mRNA 的含量变化 |
| 5 大鼠肝再生中肝窦内皮细胞基因转录表达谱概述 |
| 6 荧光定量RT-PCR 检测结果与Rat Genome 230 2.0 芯片结果比较 |
| 7 大鼠再生肝窦内皮细胞中肝再生相关的已知基因的表达谱分析 |
| 7.1 基因的表达模式分析 |
| 7.2 基因功能注释 |
| 7.3 八种表达模式中基因功能群的富集分析 |
| 7.4 显着富集的功能群在大鼠部分肝切除后窦内皮细胞中的活动变化 |
| 7.5 凝血反应相关基因的转录谱变化 |
| 7.6 肝窦内皮细胞重要的生理功能---吞噬作用和运输相关基因的转录谱变化 |
| 7.7 解毒作用相关基因的差异表达调控 |
| 7.8 活性物质分泌调控相关基因的转录谱变化 |
| 7.9 防御应答、免疫炎症及免疫炎症信号途径相关基因的转录谱变化 |
| 7.10 细胞信号转导相关基因的转录谱变化 |
| 7.11 氨基酸代谢和糖代谢相关基因的差异表达调控 |
| 7.12 蛋白质代谢相关基因的转录谱变化 |
| 7.13 细胞生长增殖相关基因的转录谱变化 |
| 7.14 细胞分化相关基因的转录谱变化 |
| 7.15 细胞凋亡相关基因的转录谱变化 |
| 8 大鼠肝窦内皮细胞中肝再生相关未知基因的功能预测 |
| 8.1 大鼠蛋白亚细胞定位预测数据库构建 |
| 8.2 未知基因亚细胞定位预测结果 |
| 第三章 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 结论 |
| 附录 1 英文缩略语 |
| 附录 2 主要实验仪器 |
| 个人简介 |
| 在攻读博士学位期间参加的科研项目和发表的论文 |
| 致谢 |
四、肝切除后大鼠Ito细胞肝细胞生长因子mRNA表达的变化（论文参考文献）
- [1]1、核受体共激活因子NCoA6在肝细胞性肝癌发生发展中的作用及其分子调控机制的研究2、腹腔镜对比开腹右半肝切除术治疗肝细胞性肝癌的倾向性得分配对对照研究[D]. 陈钶. 浙江大学, 2019(03)
- [2]门静脉结扎术促进梗阻性黄疸大鼠肝脏再生的实验研究[D]. 张斌. 南京医科大学, 2017(05)
- [3]肝硬化大鼠部分肝切除后肝再生过程中HGF/C-met通路的差异性表达[D]. 杨龙. 天津医科大学, 2014(01)
- [4]自体肝移植的临床和相关实验研究[D]. 邰沁文. 新疆医科大学, 2013(02)
- [5]完全去神经对大鼠再生肝雌激素受体表达的影响研究[D]. 赵丹丹. 河南师范大学, 2013(01)
- [6]草苁蓉环烯醚萜苷对大鼠肝脏癌前病变保护机制的实验研究[D]. 许惠仙. 延边大学, 2012(01)
- [7]胆道外引流对大鼠肝再生的影响及其细胞周期调控机制[J]. 陈东,周奇,梁力建,殷晓煜,彭宝岗,李绍强,黄力,黄洁夫. 中国病理生理杂志, 2011(11)
- [8]缺血再灌注及缺血预处理大鼠肝部分切除术后肝再生的研究[D]. 孙锋. 昆明医科大学, 2011(10)
- [9]大鼠再生肝中星形细胞的基因表达谱分析[D]. 常翠芳. 新疆大学, 2011(11)
- [10]大鼠肝再生中基因组范围内的窦内皮细胞转录谱动态分析[D]. 陈晓光. 新疆大学, 2011(11)