一、供肝的切取与修整技巧（论文文献综述）
吴凤东[1]（2019）在《DCD巴马小型猪肝脏常温机械灌注下劈离肝脏移植的实验研究》文中研究说明目的肝脏移植是治疗各种终末期肝病的根治性方法,近年来供肝短缺日益明显,劈离肝脏移植（Split liver transplantation,SLT）可将一个肝脏劈分给两个受者,提高了供肝利用率。体外劈离一般是在冷保存条件下进行,其缺陷是延长了冷缺血时间,增加了术后血管和胆管并发症及移植物功能不全的发生率。体内肝脏劈离缩短了缺血时间,但只能在循环稳定的脑死亡捐献（Donation after brain death,DBD）患者进行。目前心脏死亡器官捐献（Donation after circulatory death,DCD）肝脏所占比率越来越大,如果能够对DCD肝脏进行劈离肝移植则会进一步扩大供体来源。DCD患者的循环状况不适合体内劈离,体外劈离又会给经历较长时间热缺血损伤的DCD肝脏带来额外损伤。常温机械灌注（Normothermic machine perfusion,NMP）能够通过连续提供氧气、营养物质,维持细胞的生理机能及代谢,修复肝脏损伤。本研究拟构建简单、稳定、实用的NMP灌注保存系统,并探讨NMP对DCD猪肝SLT的保护作用。方法1.巴马小型猪肝脏解剖学研究:结合文献并通过对5只巴马小型猪腹部和肝脏进行解剖研究,观察肝脏各叶的大小,观察肝动脉、门静脉、胆道和肝静脉的解剖分布走行以及肝脏劈离面的选择,为肝脏劈离手术提供解剖学基础。2.猪原位无转流劈离肝移植的研究:选用健康巴马小型猪20只,分别按文献方法获取供肝和原位无转流肝脏移植（预实验组）,以及改进方法获取供肝和原位无转流肝脏移植（实验组）,比较两组术中血流动力学指标、术后生化、术后并发症和生存率,掌握猪原位无转流肝脏移植手术技巧及验证模型的稳定性;选用健康巴马小型猪10只分为供体组和受体组,按前面所述实验组方法获取供肝,供肝在冷保存过程中沿肝中裂劈离,注意保护门静脉右中叶支和右外侧叶胆管,以右半肝为移植物行原位无转流劈离肝移植,观察术中情况、术后化验、术后并发症和生存率,掌握劈离肝移植手术技巧。3.常温机械灌注DCD巴马小型猪劈离肝脏移植研究:选用健康巴马小型猪10只,随机选取5只作为灌注采血用,其余5只在供肝获取时建立功能性热缺血30分钟和无循环热缺血10分钟DCD模型,进行DCD肝脏体外NMP,观察NMP过程中门静脉和肝动脉灌注压、灌注液流量和胆汁分泌量变化,检测胆汁中碳酸氢盐和胆汁PH值,测量灌注液乳酸及ALT、AST变化,评估肝脏活力并改进灌注液组成、灌注通路设计和灌注模式;DCD猪肝脏常温机械灌注下劈离肝移植研究:巴马小型猪30只,其中10只作为采血用,其余20只分为供体组和受体组,每组10只。供体组均建立功能性热缺血30分钟和无循环热缺血10分钟DCD模型,受体组随机分为冷保存DCD肝脏劈离移植组（冷保存5小时）和NMP保存DCD肝脏劈离移植组（冷保存2小时后NMP 3小时）,每组5只,分别进行右半肝供肝原位无转流肝脏移植,比较两组术中血流动力学指标、术后生化、术后并发症和生存率。结果1.巴马小型猪肝脏解剖与人有一定区别,其固定韧带薄弱,肝动脉分支多,门静脉右中叶支起于门静脉左干起始段。胆管有多种变异,尾状叶和右外侧叶胆管绕行汇入左肝管约占2/3。下腔静脉与尾状叶间难以解剖分离,左半肝移植需重建替代下腔静脉的血管。肝中裂平面左右肝之间的交通支较少,在此平面进行劈离可将肝脏分为左右侧体积相近的两个半肝。2.采用改进方法获取供肝和原位无转流肝脏移植,有利于无肝期血液动力学稳定,术后出血、低体温发生率显着降低,预实验组7天存活率20%,实验组7天存活率80%。冷保存肝脏劈离过程中无门静脉右中叶支的损伤,无肝脏断面搭桥重建肝静脉,与全肝移植实验组对比,劈离肝移植术后ALT、AST均显着增高,生存率稍低（80%对60%）。3.通过在门静脉灌注通路添加压力缓冲装置,保证了灌注期间灌注压力的可控性,采用20分钟内逐渐升温升压的NMP灌注模式,DCD肝脏在体外灌注期间,血液动力学稳定,灌注液乳酸由灌注初期6.04±0.54mmol/L下降到结束时1.96±0.294mmol/L,NMP期间分泌胆汁逐渐增加,NMP结束前胆汁PH和碳酸氢盐浓度分别为7.59±0.04和32.98±1.04 mmol/L。与冷保存DCD肝脏劈离移植组比较,NMP保存DCD肝脏劈离移植组开放后循环更加稳定,其术后在3天生存率为60%,差异有显着意义。结论巴马小型猪有其特殊的解剖学特点,右半肝供肝移植宜选择肝中裂为劈离面,劈离时需注意防止损伤门静脉右中叶支和右外侧叶胆管;采用改进方法获取供肝和原位无转流肝脏移植的实验模型稳定,但是与全肝移植对比劈离肝移植仍然会对动物恢复造成显着的影响;在门静脉灌注通路增加压力缓冲装置可使灌注血液动力学更稳定,在灌注早期采用逐渐升温升压的NMP灌注模式,在NMP灌注后期进行肝脏劈离,可以修复肝脏并减少灌注机械性损伤。NMP期间通过对灌注液乳酸和分泌胆汁的检测,可以进行肝脏活力的评估。通过对比静止冷保存和NMP条件下DCD猪肝劈离肝移植,证明了NMP保存对DCD猪劈离肝移植的保护作用。
张黎[2]（2019）在《CaMKⅡγ在大鼠DCD肝移植缺血-再灌注损伤作用的研究》文中提出第一部分大鼠CaMKⅡγ基因慢病毒载体的构建及鉴定[目 的]构建大鼠CaMKⅡγ基因的过表达及干扰慢病毒载体并鉴定,为下一步探讨慢病毒介导CaMKⅡγ基因干扰调控Ca2+/CaM/CaMKⅡ信号通路及其在大鼠DCD肝移植缺血-再灌注损伤的作用提供基础。[方 法]根据大鼠CaMKⅡγ目的基因的mRNA序列,全基因合成CaMKⅡγ目的基因,构建大鼠CaMKⅡγ过表达慢病毒载体及CaMKⅡγ过表达慢病毒空载体,根据本课题组前期实验中已筛出的干扰效率最高的siRNA序列构建大鼠CaMKⅡγshRNA慢病毒载体及CaMKⅡγyshRNA慢病毒空载体,转化至大肠杆菌TOP10感受态细胞并进行测序验证,随后转染293T细胞进行慢病毒包装并用绝对定量qPCR测定慢病毒滴度。应用Western Blot检测大鼠CaMKⅡγ过表达慢病毒载体的蛋白表达情况,确定大鼠CaMKⅡγ过表达的有效性。根据不同慢病毒转染大鼠肝细胞BRL-3A,将其分为生理盐水空白对照组（CON组）,CaMKⅡγ过表达慢病毒空载体组（CON-mCaMKⅡγ组）,CaMKⅡγ过表达慢病毒载体组（mCaMKⅡγ组）,CaMKⅡγ干扰慢病毒空载体组（CON-shCaMKⅡγ组）,CaMKⅡγ干扰慢病毒载体组（shCaMKⅡγ组）,应用Western Blot检测各组CaMKⅡγ蛋白表达情况。[结 果]成功构建了大鼠CaMKIIⅡγ过表达慢病毒载体及CaMKⅡγ过表达慢病毒空载体,Western Blot检测大鼠CaMKⅡγ过表达慢病毒载体蛋白的表达。根据已知干扰效率最高的siRNA序列成功构建大鼠CaMKⅡγshRNA慢病毒载体及CaMKⅡγshRNA慢病毒空载体。绝对定量qPCR测定大鼠CaMKⅡγ过表达慢病毒载体、大鼠CaMKⅡγshRNA慢病毒载体滴度均为2E+9TU/mL。不同慢病毒转染大鼠肝细胞BRL-3A 48h后,mCaMKⅡγ组的CaMKⅡγ蛋白表达最高,shCaMKⅡγ的CaMKⅡγ表达最低,mCaMKⅡγ组的CaMKⅡγ表达高于CON-mCaMKⅡγ组（P<0.01）,shCaMKⅡγ组的 CaMKⅡγ表达低于CON-shCaMKⅡγ组（P<0.01）。[结 论]大鼠CaMKⅡγ基因的过表达慢病毒在293T细胞中构建成功并表达,大鼠CaMKⅡγshRNA慢病毒载体在293T细胞中构建成功。大鼠CaMKⅡγ过表达慢病毒在大鼠肝细胞BRL-3A中蛋白表达显着增加,而大鼠CaMKⅡγ干扰慢病毒在大鼠肝细胞BRL-3A中的蛋白表达量显着下降,为后续研究CaMKⅡγ作为靶基因干扰调控Ca2+/CaM/CaMKⅡ信号通路及在大鼠DCD肝移植术缺血-再灌注损伤的作用提供基础。第二部分建立SD大鼠DCD原位肝移植模型[目 的]建立稳定的SD大鼠DCD原位肝移植模型并确定在本课题后续实验中SD大鼠DCD原位肝移植模型的最佳热缺血时间。[方 法]本实验通过Kamada“二袖套”法,控制不同热缺血时间（热缺血Omin、热缺血15min及热缺血30min）建立SD大鼠DCD原位肝移植模型,并通过移植术后存活时间及肝脏变化确定本实验最佳动物模型热缺血时间。[结 果]供肝热缺血Omin、15min及30min的SD大鼠DCD原位肝移植模型术后7d的生存率分别为90%、80%及60%,随着热缺血时间延长,肝脏损伤加重,肝功能ALT、AST及TBIL逐渐升高,肝脏病理切片结果显示肝细胞从轻度水肿到点状坏死,再从桥接样坏死到大片状坏死。[结 论]在SD大鼠DCD原位肝移植模型中,热缺血时间的长短是直接影响供肝质量的关键因素,随着热缺血时间延长,供肝肝功能损伤逐渐加重,与病理结果一致,术后受体存活率随热缺血时间延长而显着下降。经过对比,热缺血15min是建立SD大鼠DCD原位肝移植模型并为后续进一步试验的理想造模时间,既可保证移植术后受体有一定的存活率,又可观察后续慢病毒干预对肝损伤是否有效。第三部分CaMKⅡγ在不同热缺血时间与大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注损伤的关系[目 的]探讨CaMKⅡγ在不同热缺血时间与大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注损伤的关系。[方 法]用第二部分建立的供肝热缺血Omin、15min及30min的SD大鼠DCD原位肝移植模型,三组分别于肝移植术后1d、3d及7d处死20只大鼠,取肝细胞行流式细胞术测Ca2+浓度水平、线粒体膜势能,Tunel法测肝组织中肝细胞的凋亡,Western Blot测肝组织中CaM、CaMKⅡγ及肝细胞质中AIF、CytC的蛋白水平表达,QRT-PCR测肝组织中CaMmRNA、CaMKⅡγmRNA,免疫组化测肝组织中CaM、CaMKⅡγ蛋白表达,探讨CaMKⅡγ在不同热缺血时间与大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注损伤的关系。[结 果]三组移植术后1dCa2+水平达到高峰,术后3d Ca2+下降,到术后7d Ca2+又逐渐升高,同一时点,热缺血15min组及30min组Ca2+浓度水平高于热缺血Omin组（P<0.01）。JC-10标记绿色荧光细胞比例随时间延长逐渐升高,提示线粒体膜势能下降比例逐渐升高,术后1d,三组无统计学差异,术后3d,热缺血15min组及30min组绿色荧光细胞比例高于热缺血Omin组（P<0.05）,术后7d,热缺血15min组及30min组绿色荧光细胞比例高于热缺血Omin组（P<0.01）。Tunel检测肝细胞凋亡比例随时间延长逐渐升高,术后1d,热缺血30min组肝细胞凋亡比例高于热缺血Omin组（P<0.05）,热缺血15min组与热缺血Omin组无统计学差异,术后3d,热缺血15min组及30min组肝细胞凋亡比例高于热缺血Omin组（P<0.05）,术后7d,热缺血30min组肝细胞凋亡比例高于热缺血Omin组（P<0.05）且热缺血30min组肝细胞凋亡比例高于热缺血15min组（P<0.05）。Western Blot测CaaM、CaMKⅡγ、AIF及Cyt C蛋白表达随热缺血时间延长而逐渐增加（P<0.05,P<0.01）,同一时点,热缺血15min组及30min组的蛋白表达高于热缺血Omin组,QRT-PCR及免疫组化测CaMmRNA、CaMKⅡγmRNA及 CaM、CaMKⅡγ蛋白阳性率与 Western Blot 结果趋势大致相同。[结 论]热缺血时间是影响供肝质量的关键因素,SD大鼠DCD原位肝移植术后,供肝热缺血时间越长,供肝功能损伤越重,移植术后Ca2+浓度逐渐升高,从分子、蛋白及组织水平验证了随热缺血时间的延长,CaM及CaMKⅡγ表达增加,CaMKⅡγ作用于线粒体膜,线粒体膜势能下降细胞比例增加,AIF及CytC从线粒体内释放,线粒体凋亡增加,由线粒体凋亡引起的肝细胞凋亡随之增加。第四部分慢病毒介导CaMKⅡγ与大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注损伤的关系[目 的]探讨慢病毒介导CaMKⅡγ与大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注损伤的关系。[方 法]建立热缺血15min SD大鼠DCD原位肝移植模型,每只大鼠术中通过门静脉按1.0×108TU/mL注射CaMKⅡγ过表达及其对照慢病毒。（mCaMKⅡγ组、CON-mCaMKⅡγ组）、CaMKⅡγ干扰及其对照慢病毒（shCaMKⅡγ组及CON-shCaMKⅡγ组）、生理盐水（CON组）转染移植肝脏,于术后1d、3d、7d分别处死20只大鼠。取血清行肝功能检测,取肝细胞行流式细胞术测Ca2+浓度水平、线粒体膜势能,Tunel法测肝组织中肝细胞的凋亡,Western Blot测肝组织中CaM、CaMKⅡγ及肝细胞质中AIF、Cyt C的蛋白水平表达,QRT-PCR测肝组织中CaMmRNA、CaMKⅡγmRNA,免疫组化测肝组织中CaM、CaMKⅡγ的蛋白表达,电镜检测肝组织中肝细胞、线粒体的超微结构变化。[结 果]CaMKⅡγ过表达慢病毒组移植术后1d、3d及7d的生存率分别为83.3%、78.3%及70.0%,而CaMKⅡγ干扰慢病毒组移植术后1d、3d及7d的生存率分别为98.3%、93.3%及88.3%,提示干扰CaMKⅡγ的表达对大鼠DCD肝移植术后肝损伤是保护因素,可提高大鼠DCD肝移植术后生存率。肝功能结果示:血清 ALT、AST 术后各时点 mCaMKⅡγ组高于 CON-mCaMKⅡγ组,shCaMKⅡγ组低于CON-shCaMKⅡγ组（P<0.01）,血清TBIL于术后1d各组无显着差异,术后3d及7d结果同血清ALT、AST。移植术后Ca2+浓度于术后1d达到高峰,各组间无显着差异,术后3d逐渐下降,术后7d再次升高,术后3d及7d,mCaMKⅡγ组高于 CON-mCaMKⅡγ组,shCaMKⅡγ组低于 CON-shCaMKⅡγ组（P<0.01）。JC-10标记绿色荧光细胞比例在术后1d及3d,shCaMKⅡγ组绿色荧光细胞比例低于 CON-shCaMKⅡγ组（P<0.05,P<0.01）,术后 7d,mCaMKⅡγ组绿色荧光细胞比例高于 CON-mCaMKⅡγ组,shCaMKⅡγ组低于 CON-shCaMKⅡγ组（P<0.01）。Tunel法测肝细胞凋亡结果示:术后1d、3d及7d,mCaMKⅡγ组肝细胞凋亡比例高于CON-mCaMKⅡγ组,shCaMKⅡγ组肝细胞凋亡比例低于CON-shCaMKⅡγ组（p<0.01）。Western Blot 测 CaM、CaMKⅡγ、AIF 蛋白表达于术后 1d,mCaMKⅡγ组表达高于 CON-mCaMKⅡγ组（P<0.01,P<0.05）,术后 3d 及 7d,mCaMKⅡγ组表达高于CON-mCaMKⅡγ组,shCaMKⅡγ组表达低于CON-shCaMKⅡγ组（P<0.01）,CytC蛋白表达于术后1d、3d及7d,mCaMKⅡγ组表达高于CON-mCaMKⅡγ组,shCaMKⅡγ组表达低于 CON-shCaMKⅡγ组（P<0.05,P<0.01）。QRT-PCR 测 CaMmRNA、CaMKⅡγmRNA 的表达及免疫组化测 CaM、CaMKⅡγ蛋白阳性率与Western Blot结果趋势相同。电镜结果可见mCaMKⅡγ组出现超微结构损伤,肝细胞肿胀及坏死、线粒体肿胀、嵴消失,而shCaMKⅡγ组受损形态明显改善,肝细胞大致正常,线粒体或肝细胞轻微肿胀,CON组、CON-mCaMKⅡγ组、CON-shCaMKⅡγ组可见肝组织轻微的超微结构损伤,随时间推移,mCaMKⅡγ组损伤逐渐加重,shCaMKⅡγ组损伤逐渐减轻。[结 论]DCD供肝因缺血-再灌注损伤导致CaMKⅡγ异常表达,可通过激活Ca2+/CaM/CaMKⅡ信号通路诱导线粒体损伤,上调CaMKⅡγ可使Ca2+水平升高,CaMKⅡγ作用于线粒体膜,使线粒体膜势能下降,线粒体通透性增加进而导致线粒体肿胀、破裂及凋亡,线粒体中AIF及Cyt C释放入细胞质可启动线粒体凋亡,进一步促进肝细胞凋亡;而下调CaMKⅡγ则可使Ca2+水平降低,减少线粒体膜势能下降,线粒体中AIF及Cyt C释放入细胞质减少,进而减少线粒体凋亡及其诱导的肝细胞凋亡,对SD大鼠DCD原位肝移植术后的肝功能损伤有保护作用。CaMKⅡγ过表达在DCD供肝因缺血-再灌注损伤导致的线粒体凋亡中起主导作用,特异性干扰CaMKⅡγ表达可特异性调控Ca2+/CaM/CaMKⅡ信号通路,有效改善SD大鼠DCD原位肝移植术后肝损伤及提高术后移植大鼠存活率。
范林[3]（2017）在《低温携氧机械灌注对大鼠脂肪供肝的修复作用及其潜在机制》文中研究说明第一部分大鼠原位肝移植模型手术改进目的:建立大鼠原位肝移植（Rat orthotopic liver transplantation,ROLT）模型对供肝质量的评价与研究至关重要。传统的显微缝合重建管道方法耗时较长,且对吻合技术要求过高,不利于推广。Kamada二袖套法及其改良法的出现使该模型简化并趋于稳定。笔者基于此方法,针对手术中潜在危险因素和细节问题的处理进行了探讨,并且对整个ROLT术中影响大鼠术后生存率的危险因素进行分析,对肝上下腔静脉吻合（suprahepatic inferior vena cava,SHVC）技术进行改进,以期获得稳定的大鼠术后生存率。方法:雄性SPF级SD大鼠180只,体重250±20 g。实验分为三组,第一组:ROLT模型学习阶段（60只）;第二组:ROLT模型稳定阶段（60只）;第三组:ROLT模型改良阶段（60只）。在受体手术过程中,记录各个部分操作用时,包括:无肝期,肝上下腔静脉、门静脉、肝下下腔静脉及胆管的重建时间等,同时记录手术成功率。术后每天观察受体的一般状况,对术中及术后死亡的大鼠及时进行尸检。统计并比较移植术后1天及7天生存率。结果:本研究共实施大鼠原位肝移植手术90例。三个阶段无肝期相比较,第二阶段比第一阶段缩短40%,第三阶段比第一阶段缩短64%。三个阶段肝移植术后24小时存活率分别为:20%（6/30）;86.7%（26/30）;100%（30/30）。三个阶段大鼠肝移植术后一周存活率分别为 10%（3/30）,60%（18/30）及 93%（28/30）。结论:ROLT术后生存率的提升须注意对术中各细节的处理。无肝期过程中,需快速、熟练地完成SHVC的吻合。尤其是缩短无肝期可提高手术安全性,而缩短无肝期决定于手术熟练度,技术稳定性,特别是针对大鼠无肝期内环境和血液动力学改变采取有效的处理措施,可有效减少术中危险因素,提高围手术期和术后生存率,并为进一步实验奠定坚实的基础。第二部分大鼠低温携氧机械灌注系统的建立及其参数探讨目的:本研究通过比较并评估低温携氧机械灌注（Hypothermic oxygenated machine perfusion,HOPE）过程中不同压力参数下肝脏质量的变化,建立一种稳定、安全、有效的HOPE系统,实现对肝脏的精细化灌注,以达到修复和优化肝脏质量的目的,为临床研究提供思路,从而达到扩大供肝来源的目的。方法:雄性SPF级SD大鼠（220±10g）30只,根据不同的门静脉灌注压力分随机分为 5 组（n=6）,A 组:OmmHg,B 组:2mmHg,C 组:4mmHg,D 组:6mmHg及E组:8mmHg。肝脏获取后经离体冷保存（A组）或HOPE（B组、C组、D组及E组）干预3小时后,观察并记录各组肝脏湿重变化,检测灌注液中ALT、AST及LDH的含量与肝组织中MDA、糖原、乳酸盐含量以评估肝脏质量。结果:随着肝脏门静脉灌注压力的升高,各组肝脏湿重均有不同程度增加,D组及E组增加最为明显,最高达40%。同时,灌注液中ALT、AST、LDH,肝脏组织中的MDA及乳酸盐的含量随着门静脉灌注压力的升高逐渐增加,而C组肝脏中糖原含量最低,E组含量最高。结论:严格调控HOPE期间的灌注参数,将灌注压力控制在4mmHg以内,能够保证肝脏充分灌注的同时尽可能地降低灌注性损伤,从而达到修复和优化肝脏质量的目的,为临床应用提供理论依据。第三部分大鼠脂肪供肝模型的建立目的:本研究旨在建立一种稳定的大鼠脂肪供肝模型,模拟人体发病机制,为优化边缘供肝的研究奠定基础。方法:成年SPF级SD大鼠90只,雄性,体重220±10g。随机选取10只大鼠经过适应性喂养一周后取材,检测指标作为正常对照。其余80只分为两组,A组:高脂饮食组（High-fat diet,HFD）（n=40）,采取60%高脂饮食（60%脂肪,20.6%碳水化合物,19.4%蛋白。其中脂质部分包含90%猪油及10%大豆油）饲养;B组:普通饮食组（Standard chow diet,SCD）（n=40）,采用普通低脂饮食饲养,饮食诱导持续8周。造模期间观察大鼠生命体征及一般情况,每周检测其组织学及血清学变化情况。结果:与SCD组相比,HFD组血清中ALT和AST水平均无统计学差异。HFD组血清TG水平在第1、2周上升较快,达到正常值的两倍以上,在随后的第3-8周内逐渐降至正常值。HFD组血糖、胰岛素及肝组织脂质含量与SCD组比较有明显统计学差异（P<0.05,P<0.05和P<0.01）。各组脂肪肝中MDA含量无明显差异（P>0.05）。随着造模时间延长,肝脏脂肪变性程度逐渐加重,第1-3周以小泡型脂肪变性为主,第4-8周则以大泡型脂肪变性为主。结论:选择不同造模时间来诱导实验所需程度的大鼠肝脏脂肪变性,本组脂肪供肝的模型验证了该配方的有效性及稳定性,并为进一步实验提供可靠稳定的大鼠脂肪供肝模型。第四部分低温携氧机械灌注对大鼠脂肪供肝的修复作用及其机制目的:器官供需严重失衡,脂肪供肝质量的优化可提高使用率,有益于扩大供体器官的来源。本研究拟分析静态冷保存（Static Cold storage,SCS）与低温携氧机械灌注（Hypothemic oxygenated machine perfusion,HOPE）对脂肪肝的作用,进一步探讨 HOPE对于脂肪供肝的质量优化作用及其潜在机制。方法:成年SPF级SD大鼠44只,雄性,体重220±10g,采用普通饲料（A组）或60%高脂饲料（B-D组）进行饲养。分为4组:A组（11只）:非脂肪变性肝脏获取后,置于UW液（0-4℃）中保存45分钟（修肝）后移植。B组（11只）:脂肪变性肝脏获取后在0-4℃的保存液中4小时后移植。C组（11只）:脂肪变性肝脏获取后经历3小时HOPE以及1小时CS后移植。D组（11只）:脂肪变性肝脏获取后经历3小时HOPE+1小时CS（灌注液中增加脱脂药）后移植。通过记录肝脏灌注过程中的参数,Western blot 检测肝脏组织中 KLF-2、eNOS、ICAM-1、HMGB1、TLR4、PRDX6、Caspase-3、PP2A、PPY、GRP78、CHOP 与 ATF-6 蛋白表达水平,Tunel 检测各组中肝细胞凋亡情况,试剂盒检测肝脏组织中ATP与肝糖原含量,比较各组移植术后生存率,综合评价肝脏质量。结果:比较门静脉开放1min后各组肝脏复灌情况,结果显示A组脂肪供肝复灌效果最佳,B组效果最差;与B组相比,C组与D组微循环相关蛋白KLF2及eNOS表达明显升高,同时D组表达最高,且差别有统计学意义（P<0.05）,而ICAM-1蛋白水平明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）;HMGB1与TLR4在C组与D组的表达水平明显下降,B组中表达量最高,而PRDX6在B组中明显降低,三者差别均有统计学意义（P<0.05）,表明经HOPE与DF干预之后的脂肪供肝炎症损伤明显减轻,抗氧化损伤能力明显增强;C组与D组内质网应激相关蛋白PPY、GRP78、CHOP、ATF-6表达较B组呈下降趋势,其中D组表达最低,反之C组与D组中PP2A表达升高,B组表达最低,三者差异有统计学意义（P<0.05）,同时Tunel结果证实:与B组相比,C组与D组肝细胞凋亡得到明显抑制。移植术后24小时肝脏组织中ATP与糖原含量结果显示,B组中ATP含量较低,而C与D组中ATP含量明显升高,反之,肝糖原含量在B组中较高,三者差异有统计学差异（P<0.05）;比较各组移植术后生存曲线发现,C组与D组移植术后生存率较B组明显升高。结论:低温携氧机械灌注通过改善脂肪供肝微循环,抑制内质网应激,稳定线粒体功能促进ATP合成,清除炎症因子等减轻缺血再灌注损伤,从而提高移植术后受者生存率,为临床应用HOPE提供了理论依据。脱脂药在低温状态下无法促进脂肪供肝的脂质分解,但可以进一步改善微循环、抑制炎症因子的释放等,从而优化肝脏质量。为脂肪肝应用于移植提供理论依据。
史志勇,徐钧,孙超[4]（2017）在《小儿肝移植左外侧叶供肝切取与修整体会》文中研究说明目的总结小儿肝移植中左外侧叶供肝切取和修整的经验体会。方法收集2014年9月-2015年8月终末期肝病实施肝移植的患儿26例,供肝为左外侧叶,其中活体供肝22例,劈离式4例。受者手术均为背驮式肝移植。结果 22例活体供者均无严重并发症及死亡,26例小儿在接受肝移植术后,除1例在围术期死亡,其他患儿均长期随访健康存活。结论小儿接受左外侧叶供肝,术前应精确评估,手术精细操作,最大限度保证供受者安全,移植效果良好。
叶少军,仲福顺,钟自彪,王彦峰,叶启发[5]（2016）在《公民逝世后器官捐献肝肾器官获取与修整术》文中研究说明目的:探讨中国公民逝世后器官捐献（CDCD）器官获取与修整的方法与技巧。方法:采用原位灌注及联合切取及体外修整的方法共进行64例CDCD供体腹部器官联合获取及修整。结果:64例CDCD器官热缺血时间范围为3-7min;冷缺血时间为6-16h。经获取和修整后的器官,成功进行64次肝移植、128次供肾移植,目前,大部分患者移植物功能良好。结论:所建立的CDCD供体腹部器官联合获取手术和修整技术,可同时为不同的移植受体提供供体肝、肾等器官,是有效的方法。
陆森,黄新立,李相成,孙倍成,孔连宝,鲁佩,王学浩[6]（2011）在《腹部多器官联合切取的技术改进》文中进行了进一步梳理目的:探讨腹部多器官联合切取与保存的技术改进经验。方法:采用腹部多器官联合切取技术,首先原位灌注腹主动脉,其次于肝十二指肠韧带内,十二指肠上缘分离出门静脉主干并插管灌注,整体切取腹部肝、双肾和胰腺并保存48例。结果:48例获取器官的热缺血时间是（3.4±1.8）min,肝脏的冷缺血时间是（8.1±4.3）h,发现肝动脉变异3例,起源于胃左动脉的变异肝左动脉1例,起源于肠系膜上动脉的变异肝右动脉2例,腹腔干和肠系膜上动脉共干1例,双支肾动脉2例,未发生血管损伤和输尿管损伤,48例供肝的组织学检查43例为正常肝组织表现,5例为轻度脂肪肝表现,行改良背驮式肝移植48例,所有病例均于无肝期结束开放血流后胆总管有金黄色胆汁流出,无原发性移植肝无功能,2例移植后胆道并发症,96例肾移植后患者恢复顺利。结论:采用腹部多器官联合切取是保证器官有效利用的重要前提,快速切取技术是器官移植的重要保证。
赵宏峰,任选磊,周杰,张国伟[7]（2011）在《改良快速法供肝切取技术在大鼠肝移植中的应用》文中研究说明目的探讨能改善供肝质量的快速法供肝切取技术。方法 Sprague-Dawley大鼠60只,采用改良快速法切取供肝。观察术后1周存活率、供肝大体观和灌洗后肝脏病理形态学改变。结果共完成30次行改良快速法供肝切取的大鼠原位肝移植手术。供肝热缺血和冷缺血时间分别为0和8 min,供肝切取手术时间（24.2±1.2）min,供肝修整时间（16.8±1.5）min;受体手术时间（46.3±4.8）min,无肝期（21.6±2.3）min;手术成功率93.3%（28/30）;术后1周存活率86.7%（26/30）。供肝灌注后质地柔软,色泽均匀呈土黄色,光镜下肝窦内未见红细胞。结论改良快速法供肝切取技术能够提高供肝质量和术后存活率。
李江,刘静,侯宇,李立[8]（2011）在《30%小体积肝移植大鼠模型的手术技巧及改良》文中指出背景:活体肝移植显着缓解了供肝短缺矛盾,如何使供者献出的肝量最小,同时受者得到最大的临床受益成为了目前的研究热点。目的:探索一种简便、稳定的小体积肝移植大鼠模型的建立方法。方法:以Kamada"二袖套法"非动脉化原位肝移植SD大鼠模型为基础并参考国内外文献,制作30%小体积肝移植模型。实验分为Ⅰ组为体内肝叶减除;Ⅱ组为体外肝叶减除组;Ⅲ组为改良后小体积肝移植模型。主要观察供体手术各阶段时间;移植后并发症和生存情况。结果与结论:改良后模型较改良前的供肝获取时间和肝叶减除时间均显着缩短（P<0.05）。Ⅱ组的供肝冷缺血时间显着长于Ⅰ组和Ⅲ组（P<0.05）。改良后的小体积肝移植模型手术成功率较改良前显着提高（P<0.05）,改良后7及14d存活率均高于改良前模型（P<0.05）。改良模型较改良前生存时间延长了9d。改良模型的手术总并发症例次较改良前组显着较少（P<0.01）。提示采用此改良方法能建立稳定的30%小体积肝移植大鼠模型,而且在操作简便、减少并发症、提高手术成功率和术后存活率等方面有显着优势。
冉江华,李铸,刘静,张升宁,吴淑媛,张熙冰,李来邦,李立,张鸿青,刘滇生[9]（2011）在《二袖套法建立恒河猴原位肝移植的稳定模型》文中提出背景:以往多应用大鼠建立肝移植模型对肝移植术后排斥反应进行基础研究,而灵长类非人类大动物建立肝移植模型能更接近临床肝移植的需求。目的:探讨建立稳定的恒河猴原位肝移植模型的最佳方案。方法:选用健康恒河猴进行同种异体原位肝移植20次,以10只雄性作为受体,10只雌、雄不限为供体,借鉴临床肝移植和各种动物模型建立的方法,使用二袖套法加肝动脉重建建立稳定的恒河猴原位肝移植模型。结果与结论:20次恒河猴原位肝移植模型成功率90%,供肝切取时间（17±3）min,供肝修整时间（35±5）min,受体移植时间（133±45）min,受体无肝期（12±4）min,术后24h存活率90%（18/20）,72h存活率为80%（16/20）,1周存活率50%（10/20）,14只分别于术后2周内死于急性排斥反应,最长存活38d,也死于急性排斥反应,所有受体均无门静脉血栓形成及胆道并发症发生。改进后的恒河猴同种异体原位肝移植模型具有操作简便、手术成功率高、重复性和稳定性好的优点,是肝移植临床前期研究的较理想动物模型。
林艺雄,周杰,林建华,王宇,张国伟,崔忠林,李湘竑,谭永法[10]（2010）在《肝移植供肝获取和修整的临床研究》文中认为目的总结肝移植供肝获取和修整的临床经验。方法分析2004年8月～2007年12月共126例快速肝肾联合获取及105个供肝修整的资料,105个供肝均用于原位肝移植术。结果 126例供肝、肾热缺血时间为1～8.5min,平均4min。肝肾联合切取手术时间19～28min,平均22.5min。105个供肝修整时间38～102min,平均51min;冷缺血时间5.5～13h,平均8h;有8例供肝存在动脉变异。结论供肝获取和修整应强调器官灌注和动脉修整技术,预防供体因素导致的岀血,注意与受体手术组配合。
二、供肝的切取与修整技巧（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、供肝的切取与修整技巧（论文提纲范文）
（1）DCD巴马小型猪肝脏常温机械灌注下劈离肝脏移植的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、巴马小型猪肝脏解剖学研究 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 麻醉及静脉动脉通路建立 |
| 1.1.3 手术方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 巴马小型猪肝脏大体解剖 |
| 1.2.2 巴马小型猪肝脏各叶重量及比率 |
| 1.2.3 巴马小型猪肝脏血管和胆道 |
| 1.3 讨论 |
| 二、巴马小型猪经典非转流肝脏移植研究 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验动物及分组 |
| 2.1.2 麻醉及静脉动脉通路建立 |
| 2.1.3 肝脏获取及修整 |
| 2.1.3.1 预实验组供肝获取及修整 |
| 2.1.3.2 实验组供肝获取及修整 |
| 2.1.4 受体手术 |
| 2.1.5 术后治疗方案 |
| 2.1.6 观察指标 |
| 2.1.7 统计分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 移植术后基本情况 |
| 2.2.2 术中血流动力学及体温改变 |
| 2.2.3 实验组术后肝功能改变 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 猪肝脏移植的困难 |
| 2.3.2 猪肝脏移植血液的准备及无肝期处理 |
| 2.3.3 猪肝脏移植供肝获取和移植技术的改进 |
| 2.3.4 猪肝脏移植的体温维持和术后管理 |
| 2.4 小结 |
| 三、巴马小型猪经典非转流劈离肝脏移植研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验动物及分组 |
| 3.1.2 手术方法 |
| 3.1.2.1 麻醉和供肝获取方法 |
| 3.1.2.2 供肝劈离及修整 |
| 3.1.2.3 受体肝脏劈离式移植手术(右半肝) |
| 3.1.3 术后治疗方案 |
| 3.1.4 观察指标 |
| 3.1.4.1 手术基本情况 |
| 3.1.4.2 受体术后监测指标 |
| 3.1.5 统计分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 移植术后基本情况 |
| 3.2.2 术后肝功能情况 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 劈离肝移植左、右半肝移植物的选择 |
| 3.3.2 血管和胆道的劈离 |
| 3.3.3 劈离肝移植的管理和并发症的防治 |
| 3.4 小结 |
| 四、巴马小型猪DCD肝脏常温机械灌注研究 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 常温机械灌注装置的主要设备及材料 |
| 4.1.2 实验药品 |
| 4.1.3 实验动物 |
| 4.1.4 DCD供肝获取 |
| 4.1.5 常温机械灌注灌注液配方 |
| 4.1.6 常温机械灌注管路运行及检测 |
| 4.1.7 灌注过程中标本收集 |
| 4.1.8 统计方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 灌注过程中血液动力学情况 |
| 4.2.2 常温灌注过程中灌注液酶学、乳酸,胆汁情况 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 DCD肝脏模型的建立 |
| 4.3.2 NMP灌注液成分 |
| 4.3.3 氧气浓度 |
| 4.3.4 灌注模式(灌注压力和灌注温度) |
| 4.4 不足 |
| 五、DCD巴马小型猪肝脏常温机械灌注下劈肝脏移植的研究 |
| 5.1 对象和方法 |
| 5.1.1 实验动物及分组 |
| 5.1.2 手术方法 |
| 5.1.2.1 冷保存组手术方法 |
| 5.1.2.2 NMP组手术方法 |
| 5.1.3 术后治疗方案 |
| 5.1.4 观察指标 |
| 5.1.4.1 手术基本情况 |
| 5.1.4.2 受体术后监测指标 |
| 5.1.5 统计分析 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 移植术后基本情况 |
| 5.2.2 生化检验情况 |
| 5.2.3 组织学改变 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 DCD肝脏在常温机械灌注下劈离的优势 |
| 5.3.2 DCD肝脏在常温机械灌注下劈离的时机 |
| 5.3.3 常温机械灌注下劈离需要注意情况 |
| 5.3.4 NMP对DCD劈离肝移植的保护作用 |
| 5.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 肝脏机械灌注保存进展 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（2）CaMKⅡγ在大鼠DCD肝移植缺血-再灌注损伤作用的研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 大鼠CaMKⅡγ基因慢病毒的构建及鉴定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 建立SD大鼠DCD原位肝移植模型 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 CaMKⅡγ在不同热缺血时间与大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注损伤的关系 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 慢病毒介导CaMKⅡγ与大鼠DCD原位肝移植缺血-再灌注损伤的关系 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（3）低温携氧机械灌注对大鼠脂肪供肝的修复作用及其潜在机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 大鼠原位肝移植模型手术改进 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 附图 |
| 第二部分 大鼠低温携氧机械灌注系统的建立及其参数探讨 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 附图 |
| 第三部分 大鼠脂肪供肝模型的建立 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 附图 |
| 第四部分 低温携氧机械灌注对大鼠脂肪供肝的修复作用及其潜在机制 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 附图 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 攻博期间发表的科研成果目录 |
| 致谢 |
（4）小儿肝移植左外侧叶供肝切取与修整体会（论文提纲范文）
| 1 资料与方法 |
| 1.1 研究对象: |
| 1.2 伦理学:三代直系亲属均签署知情同意书, 并经医院伦理委员会审查通过。 |
| 1.3 供者术前评估: |
| 1.4 移植手术情况: |
| 1.5 免疫抑制方案: |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（5）公民逝世后器官捐献肝肾器官获取与修整术（论文提纲范文）
| 1 临床资料 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 供体器官获取 |
| 1.2.1 切口 |
| 1.2.2腹主动脉灌注 |
| 1.2.3 门静脉灌注 |
| 1.2.4 器官切取 |
| 1.3 供体器官分离 |
| 1.3.1 供肝修整 |
| 1.3.2 供肾修整 |
| 2 结果 |
| 2.1 供体器官修整结果 |
| 2.2 供体器官移植效果 |
| 3 讨论 |
（6）腹部多器官联合切取的技术改进（论文提纲范文）
| 1 对象和方法 |
| 1.1 对象 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 腹腔探查, 腹主动脉和门静脉插管灌注 |
| 1.2.2 腹腔全胃肠的游离和腹腔脏器整体切取 |
| 1.2.3 肝、肾和胰腺的分离 |
| 1.2.4 检测复查血型 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
（9）二袖套法建立恒河猴原位肝移植的稳定模型（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 实验动物数量分析 |
| 2.2 恒河猴肝移植时间 |
| 2.3 受体恒河猴术后一般情况 |
| 2.4 恒河猴肝移植成功率及存活率 |
| 2.5 并发症 |
| 3 讨论 |
| 3.1 原位肝移植手术方式的选择 |
| 3.2 二袖套法在恒河猴肝移植术中的应用和改良 |
| 3.3 术中严密止血、输血补液是手术成功的关键 |
| 3.4 缩短无肝期是恒河猴肝移植手术成功的主要因素 |
| 3.5 肝动脉重建在恒河猴肝移植模型中的应用 |
（10）肝移植供肝获取和修整的临床研究（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 一般资料 |
| 1.2 器官获取的方法 |
| 1.3 供肝修整方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 关于灌注的体会 |
| 3.2 关于供肝修整的体会 |
| 3.3 关于如何与受体手术配合的体会 |
四、供肝的切取与修整技巧（论文参考文献）
- [1]DCD巴马小型猪肝脏常温机械灌注下劈离肝脏移植的实验研究[D]. 吴凤东. 天津医科大学, 2019(02)
- [2]CaMKⅡγ在大鼠DCD肝移植缺血-再灌注损伤作用的研究[D]. 张黎. 昆明医科大学, 2019(05)
- [3]低温携氧机械灌注对大鼠脂肪供肝的修复作用及其潜在机制[D]. 范林. 武汉大学, 2017(06)
- [4]小儿肝移植左外侧叶供肝切取与修整体会[J]. 史志勇,徐钧,孙超. 实用器官移植电子杂志, 2017(01)
- [5]公民逝世后器官捐献肝肾器官获取与修整术[J]. 叶少军,仲福顺,钟自彪,王彦峰,叶启发. 武汉大学学报(医学版), 2016(04)
- [6]腹部多器官联合切取的技术改进[J]. 陆森,黄新立,李相成,孙倍成,孔连宝,鲁佩,王学浩. 南京医科大学学报(自然科学版), 2011(09)
- [7]改良快速法供肝切取技术在大鼠肝移植中的应用[J]. 赵宏峰,任选磊,周杰,张国伟. 新乡医学院学报, 2011(05)
- [8]30%小体积肝移植大鼠模型的手术技巧及改良[J]. 李江,刘静,侯宇,李立. 中国组织工程研究与临床康复, 2011(18)
- [9]二袖套法建立恒河猴原位肝移植的稳定模型[J]. 冉江华,李铸,刘静,张升宁,吴淑媛,张熙冰,李来邦,李立,张鸿青,刘滇生. 中国组织工程研究与临床康复, 2011(05)
- [10]肝移植供肝获取和修整的临床研究[J]. 林艺雄,周杰,林建华,王宇,张国伟,崔忠林,李湘竑,谭永法. 南方医科大学学报, 2010(05)