一、Integration of TNF-α signaling: crosstalk between caspasesl,IKK and JNK（论文文献综述）
Gulsum Ozlem Elpek[1]（2021）在《Molecular pathways in viral hepatitis-associated liver carcinogenesis: An update》文中进行了进一步梳理Hepatocellular carcinoma（HCC） is the most common type of cancer among primary malignant tumors of the liver and is a consequential cause of cancer-related deaths worldwide. In recent years, uncovering the molecular mechanisms involved in the development and behavior of this tumor has led to the identification of multiple potential treatment targets. Despite the vast amount of data on this topic, HCC remains a challenging tumor to treat due to its aggressive behavior and complex molecular profile. Therefore, the number of studies aiming to elucidate the mechanisms involved in both carcinogenesis and tumor progression in HCC continues to increase. In this context, the close association of HCC with viral hepatitis has led to numerous studies focusing on the direct or indirect involvement of viruses in the mechanisms contributing to tumor development and behavior. In line with these efforts, this review was undertaken to highlight the current understanding of the molecular mechanisms by which hepatitis B virus（HBV） and hepatitis C virus（HCV） participate in oncogenesis and tumor progression in HCC and summarize new findings. Cumulative evidence indicates that HBV DNA integration promotes genomic instability, resulting in the overexpression of genes related to cancer development, metastasis, and angiogenesis or inactivation of tumor suppressor genes. In addition, genetic variations in HBV itself, especially preS2 deletions, may play a role in malignant transformation. Epigenetic dysregulation caused by both viruses might also contribute to tumor formation and metastasis by modifying the methylation of DNA and histones or altering the expression of microRNAs. Similarly, viral proteins of both HBV and HCV can affect pathways that are important anticancer targets. The effects of these two viruses on the Hippo-YapTaz pathway in HCC development and behavior need to be investigated. Additional, comprehensive studies are also needed to determine these viruses’ interaction with integrins, farnesoid X, and the apelin system in malignant transformation and tumor progression. Although the relationship of persistent inflammation caused by HBV and HCV hepatitis with carcinogenesis is well defined, further studies are warranted to decipher the relationship among inflammasomes and viruses in carcinogenesis and elucidate the role of virus-microbiota interactions in HCC development and progression.
张慧君[2]（2021）在《檀香籽油对肥胖大鼠胰岛素抵抗的调节作用及机制研究》文中进行了进一步梳理目的本研究通过高脂高糖（high fat high surcose,HFHS）饮食建立肥胖诱导的胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）大鼠模型,通过与鱼油（fish oil,FO）、亚麻籽油（linseed oil,LO）和葵花籽油（sunflower seed oil,SO）比较,探究檀香籽油（sandalwood seed oil,SSO）对IR的预防作用。通过检测磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）胰岛素信号通路,Jun氨基末端激酶（c Jun amino-terminal kinase,JNK）/核因子（nuclear factor-kappa B,NF-κB）炎症信号通路相关蛋白表达量及肠道菌群来探讨其预防作用的分子机制。方法1.动物模型建立及分组:50只Sprague-Dawley雄性大鼠适应性喂养一周后,随机分为正常对照组（N,n=10）、檀香籽油组（SSO,n=10）、鱼油组（FO,n=10）、葵花籽油组（SO,n=10）和亚麻籽油组（LO,n=10）。正常对照组饲喂AIN-93G饲料（含64%碳水化合物、20%蛋白质和7%脂肪）。另外四组分别喂食高脂高糖饲料（含27%蔗糖和15%猪油）和7%SSO、FO、SO和LO。五组大鼠分别于基线及干预后4周、8周、12周空腹采集眼静脉丛血液。喂养12周,禁食12小时后处死大鼠,采集血液并收集肝脏、骨骼肌以及脂肪等组织,血液在4℃、3000转每分钟离心10分钟,分离血清。动物组织称重,迅速冷冻在液氮中,并保存在-80℃冰箱中以供进一步分析。2.指标分析:采用全自动生化分析仪检测血清葡萄糖（fasting blood gluocse,FBG）、甘油三酯（triglyceride,TG）、总胆固醇（total cholesterol,TC）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein-cholesterol,HDL-C）;ELISA试剂盒检测血清胰岛素（fasting insulin,FINS）、白介素1β（interleukin 1β,IL-1β）、白介素6（interleukin 6,IL-6）、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNF-α）和游离脂肪酸（free fatty acid,FFA）;用化学试剂盒检测肝脏TG和TC;计算稳态模型胰岛素抵抗指数（homeostasis model insulin resistance index,HOMA-IR）;气相色谱法检测血清脂肪酸组成。采用蛋白印迹实验检测肝脏和骨骼肌中PI3K/AKT胰岛素信号通路中胰岛素受体（insulin receptor,INSR）、胰岛素样生长因子受体（insulin-like growth factor receptor,IGFR）、胰岛素受体底物1（insulin receptor substrate 1,IRS-1）、丝氨酸IRS磷酸化（p-IRS,ser1101）、PI3K、AKT、酪氨酸AKT磷酸化（p-AKT,tyr308）、葡萄糖转移蛋白4（glucose transfer protein 4,GLUT4）和转录因子1（forkhead box transcription factor O1,FOXO1）的蛋白水平,并检测肝脏中JNK/NF-κB炎症信号通路中JNK、苏氨酸JNK磷酸化（p-JNK,thr183/185）、NF-κB、IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白水平。对大鼠粪便16Sr RNA基因进行Mi Seq测序,分析肠道菌群结构和组成。结果1.与SO组相比,SSO、FO和LO组显着降低HFHS喂养大鼠FBG、FINS和HOMA-IR水平,增强葡萄糖耐受性以及提高胰岛素敏感性。此外,与SO组相比,补充SSO显着增加血清中二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid,DHA）水平,并减少肝脏异位脂肪沉积。2.与SO组相比,SSO、FO和LO组显着增加肝脏和骨骼肌组织中INSR、PI3K、AKT、p-AKT、GLUT4的蛋白表达水平,降低p-IRS和FOXO1的蛋白表达水平,提示补充SSO、FO和LO改善PI3K/AKT胰岛素信号通路的传导。3.与SO组相比,SSO、FO和LO组显着降低肝脏中JNK、p-JNK、NF-κB、IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达水平,表明补充SSO、FO和LO抑制JNK/NF-κB炎症信号通路的传导,并降低血清中促炎性细胞因子水平。4.与SO组相比,SSO、FO和LO组显着改善HFHS饲养大鼠肠道菌群的结构和组成,增加有益菌群疣微菌门（Verrucomicrobia）,Oscillospira菌属和Ruminococcus菌属的相对丰度,并抑制有害菌群放线菌门（Actinobacteria）和Blautia菌属的相对丰度以及降低厚壁菌门（Firmicutes）/拟杆菌门（Bacteroidete）的比值。与FO和LO组相比,补充SSO显着增加有益菌群Allobaculum菌属和Akkermansia菌属。相关性分析显示,肠道菌群的变化与HFHS喂养大鼠的糖脂代谢、炎性因子和HOMA-IR相关参数显着相关。结论SSO对肥胖诱导的IR具有预防作用,其作用机制可能与改善PI3K/AKT胰岛素信号通路传导、抑制JNK/NF-κB炎症信号通路以及改善肠道菌群的组成有关。这些发现为IR相关慢性病的营养干预提供了新的依据。
殷韶杰[3]（2021）在《青蒿琥酯通过ERS-UPR信号通路调控溃疡性结肠炎的作用机制研究》文中研究说明溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis,UC）是一种影响直肠和结肠的非特异性、复发性结肠黏膜炎症性疾病。UC的发病原因尚没有完全阐明,目前认为是基因、肠道菌群、宿主免疫系统和环境等多因素相互作用的结果。在UC中,肠道屏障被破坏,导致肠道菌群移位和免疫系统过度激活,进而引起炎症反应。内质网借助庞大的内膜系统与其他细胞器联系在一起。因此,内质网能够感知各种不断变化的生理信号,从而调整其多种功能,以维持细胞内稳态。内质网正确折叠蛋白质的环境平衡被破坏可引发内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）,从而激活未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）。越来越多的研究表明ERS-UPR信号通路参与了 UC的发生与发展。持续未缓解的ERS可诱导上皮细胞凋亡、损害肠道屏障、激活肠道炎症和引发免疫失调导致UC。因此,调控ERS被认为是UC的一种潜在治疗方法。研究表明多种青蒿素类药物（artemisinins,ARTs）对实验性结肠炎具有保护作用,但该保护作用是否依赖于ERS-UPR信号通路还不够明确。青蒿琥酯（artesunate,ARS）作为一种水溶性青蒿素衍生物,在临床上得到广泛使用。为此本研究选用ARS作为研究对象,以ERS及其感应的三条UPR信号通路为切入点,在小鼠UC模型和体外细胞模型中开展ARS对ERS-UPR通路调控作用的研究。通过检测ERS-UPR信号通路、炎症信号通路和肠道免疫反应中关键基因和蛋白表达以及免疫细胞的变化,阐明ARS对肠道炎症性疾病发挥保护作用的潜在机制,为ARTs在动物肠道炎性疾病中的应用提供参考依据。1 ARS对DSS诱导小鼠UC的预防保护作用本研究利用DSS饮水7d诱导小鼠结肠炎,并每天一次给予30mg/kgARS腹腔注射处理。通过观察小鼠体重变化,结肠长度、疾病活动指数（Disease activity index,DAI）,同时利用HE染色和电镜扫描观察结肠组织病理学变化来综合评估ARS对结肠炎的保护作用。结果表明,DSS刺激导致小鼠体重减轻、DAI升高和结肠缩短,以及肠黏膜上皮细胞侵蚀、杯状细胞减少、隐窝破坏并伴有炎症细胞浸润等典型病变;而ARS处理可明显缓解上述症状和病理变化。免疫荧光和Western blot分析发现,ARS明显抑制了 DSS诱导的结肠黏膜层黏蛋白2（Muc2）和紧密连接蛋白Claudin-1的丢失,并上调了 Bcl-2/Bax的比值,而下调了 cleaved-caspase-3的表达。这提示ARS对UC小鼠肠屏障具有明显的保护作用。然后,利用Western blot和RT-qPCR技术分别检测了核因子-κB（NF-κB）的磷酸化水平和炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达情况。结果表明,ARS显着抑制了 UC小鼠结肠组织中核因子-κBα（IκBα）、NF-κB p65的活化和IL-1β、IL-6、TNF-α的表达,说明ARS能明显抑制DSS诱导的结肠组织炎症反应。以上数据表明,ARS可通过维持肠黏膜屏障重要蛋白的表达、抑制结肠上皮细胞凋亡和炎症反应,减轻结肠病变及临床症状,从而对UC小鼠发挥预防保护作用。2 ARS对结肠组织ERS信号通路的抑制作用研究我们对小鼠结肠组织中ERS标志性蛋白的表达进行了检测。Western blot和免疫荧光结果显示,DSS暴露导致ERS标志蛋白GRP78和CHOP表达显着增加,并激活了UPR感应蛋白PERK、IRE1、ATF6及其信号通路。然而,ARS通过阻止UPR中的PERK-eIF2α-ATF4-CHOP和IRE1α-XBP1信号通路的激活,显着抑制了 ERS的严重程度。为了探讨ERS是否参与了 ARS对结肠屏障的维护和NF-κB活化的抑制。我们借助ERS抑制剂4-PBA和诱导剂2-DG,分别与ARS共处理DSS诱导的UC模型小鼠。结果显示,在ARS作用基础上,4-PBA共处理对caspase12表达和Bcl-2/Bax比值无明显影响,但可进一步抑制PERK-eIF2α-ATF4-CHOP和IRE1α-XBP1信号通路的激活;2-DG则显着地逆转了 ARS对上述信号通路的抑制作用。这表明4-PBA和2-DG可用于调控ERS的严重程度。与ARS单独治疗组相比,4-PBA共处理可加强ARS对屏障蛋白cluadin-1和Muc2的保护作用,以及对NF-κB和IL-1β、IL-6、TNF-α表达的抑制作用;同时,4-PBA加强了 ARS对UC小鼠的临床症状和病理变化的缓解作用;2-DG则显着逆转了 ARS对上述指标的调控作用。上述结果提示,过度的ERS是DSS导致UC发生发展的重要原因,ARS可通过抑制ERS及其下游PERK-eIF2α-ATF4-CHOP和IRE1α-XBP1信号通路的过度激活,进而抑制结肠炎症的发展并维护肠道屏障功能。3 ARS对肠上皮细胞ERS的抑制作用研究本研究利用ARS预处理IEC-6细胞,并利用ERS诱导剂衣霉素（tunicamycin,Tm）刺激细胞诱导ERS,以探讨ARS在IEC-6细胞中对ERS的抑制作用以及ERS对Claudin-1和NF-κB的调控作用。首先我们利用CCK8确定了 ARS和Tm的工作浓度分别为1 μM和2μM;Tm刺激时间为12h。随后,用浓度为2μM的Tm刺激细胞不同时间,观察ERS标志蛋白GRP78和CHOP,以及紧密连接蛋白Claudin-1的表达和NF-κB活化情况。Western blot结果显示,随着时间的延长,GRP78和CHOP表达量以及p-p65/p65和p-IκB/IκB比值逐渐升高,且12h时效果最显着。此外Tm刺激12h可显着降低Claudin-1的表达量。这表明在IEC-6细胞中,ERS可以激活NF-κB并抑制Claudin-1的表达。ARS处理可显着抑制Tm对细胞内IRE1α-XBP1s和PERK-eIF2α-ATF4-CHOP两条信号通路的激活,并缓解ERS对NF-κB和Claudin-1的调控作用。进一步研究发现,siRNAPERK和siRNAIRE1α转染细胞可分别显着抑制PERK-eIF2α-ATF4-CHOP 和 IRE1α-XBP1s 信号通路的活化,其中 PERK-eIF2α-ATF4-CHOP 通路在培养细胞中主要调控Claudin-1的表达,而IRE1α-XBP1s信号通路主要负责调控NF-κB的激活。4 ARS在结肠炎治疗中的免疫调控作用已有研究表明先造模后治疗的结肠炎模型更适合探讨药物对肠道先天和获得性免疫的调控作用。因此,我们用DSS刺激小鼠7d诱导UC,再用剂量为30mg/kg的ARS治疗5 d,每天一次以观察ARS对小鼠免疫细胞的调控作用以及UC的治疗作用。为了探讨ARS在UC中对Th17、Treg和巨噬细胞的调控作用,我们采用流式细胞术检测小鼠脾脏中Th17和Treg细胞在CD4+细胞中的比率以及结肠组织中巨噬细胞M2/M1型的比例,并通过RT-qPCR技术对这四种细胞的标志基因和分泌的细胞因子在结肠组织中的表达进行了检测。与DSS组小鼠相比,ARS治疗可显着抑制Th17细胞在CD4+细胞中的比率,以及IL-17A、IL-17F和RORγt mRNA的表达,但促进TGF-β mRNA的表达。此外,ARS治疗明显地升高了结肠组织中巨噬细胞M2/M1的比值和Arg-1和IL-10 mRNA的表达,并抑制了炎症因子iNOS、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达。同时ARS治疗显着缓解了 UC小鼠的临床症状和结肠组织病理变化。这说明,ARS可通过调控Th17/Treg细胞的平衡和促进巨噬细胞的M2极化而对DSS诱导的UC发挥治疗作用。5 ARS通过抑制ERS调控肠道免疫为了探讨ERS是否参与了 ARS对结肠肠道免疫的调控以及对UC的治疗作用,我们利用4-PBA和2-DG,分别与ARS共处理DSS诱导的UC小鼠。结果显示,在ARS治疗的基础上,4-PBA共处理可进一步抑制脾脏CD4+细胞中Th17细胞的比率,以及IL-17A、IL-17F和RORγt mRNA在结肠中的表达,但对Treg细胞和TGF-β无明显影响。相比于ARS单独治疗组,4-PBA共处理可显着升高结肠组织中巨噬细胞M2/M1型的比值;并加强ARS对Arg-1和IL-10 mRNA表达的促进作用,以及对iNOS、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达的抑制作用。此外,4-PBA促进了 ARS对UC小鼠的临床症状和病理变化的缓解作用。相反,2-DG则显着抵消了 ARS对上述指标的调控作用。以上结果表明,ERS参与了 ARS对Th17/Treg细胞平衡和巨噬细胞极化的调控。
赵洪春[4]（2020）在《内质网应激在中耳炎发病机制中的作用研究》文中研究指明研究背景中耳炎（Otitis media,OM）作为耳鼻喉的常见疾病,其发病率较高,病诊量较大,尤以儿童常见。国内没有确切的OM发病率报道。据欧洲和美国等报道,3岁之前大约80%的儿童经历过至少1次OM。OM最常见的病原菌是肺炎链球菌,肺炎链球菌可引起30%～60%的OM。对于目前急性中耳炎的治疗,临床棘手问题是OM频繁发作,导致的中耳一系列并发症,例如引起患儿鼓室硬化、中耳黏连以及并发中耳胆脂瘤,可导致病患不同程度的听力障碍,严重者会影响到语言的发育。迄今为止,肺炎球菌引发的疾病（Pneumococcal disease,PD）是全世界未被解决的临床卫生医疗问题之一。肺炎链球菌（Streptococcuspneumoniae,Spn）导致的OM,现今被认为属于非侵袭性疾病,不早期治疗或治疗方式不当可引发婴幼儿性听力下降,还会导致语言发育中枢滞后,可能累及其他中枢,对儿童损害较大。临床上中耳炎的治疗包括药物和手术,药物以抗生素为主,但由于其耐药性,Spn对常用抗生素应用时间存在限制,使得临床药物治疗难度上升。所以建立合适的模型,同时对OM发病机制和潜在治疗模式探索已成为儿科和耳鼻喉科临床医生的当务之急,我们迫切需要对OM发病机制进行深入研究,寻求治疗靶点。内质网（Endoplasmic reticulum,ER）作为一种细胞内复杂的膜网络,它不仅可以确保细胞钙和脂质的稳态,还可以有效介导蛋白的的折叠和运输,尤其是跨膜、分泌蛋白的途径。ER是一种多功能细胞器,包含着许多酶,折叠酶和伴侣蛋白,可协助氧化蛋白折叠和其他翻译后修饰可确保维持ER稳态。在组织缺氧、细胞应激及感染造成的稳态失衡这些生理和病理条件下可引发内质网蛋白质功能受到抑制,促使UPR（未折叠蛋白反应）,引起内质网应激ERS（ER-stress）。ERS的特征是活化转录因子4（ATF4）-C/EBP同源蛋白（CHOP）的激活途径。越来越多的证据表明,ERS参与多系统多器官疾病的发生、发展,如脑血管/心血管系统疾病、神经样病变、病毒性炎症、听功能损伤等,在这些人类疾病的发病机理中起着不可忽视的作用。研究发现,炎症会触发内质网应激,使内质网内环境失衡,导致炎症性疾病发生。最近,在各种炎症性疾病研究中,一些研究已经报道了内质网应激和炎症反应之间的信号串连作用,特别是炎症性肠病中两者关系密切相关。而且,众所周知,内质网中蛋白质的过度生产可以引发炎症,炎症反应可以触发内质网应激。先前的研究认为,炎症发生可以激活UPR,诱发内质网应激启动,破坏内质网稳态平衡,从而导致炎症性疾病。除了内质网应激和炎症之间相互作用的复杂性外,细胞对内质网应激的反应有特定细胞类型的成分,这些成分决定了对应激条件的适应或适应不良和死亡。在内质网应激的一系列反应中,可激活炎症基因表达程序,调节炎症基因表达。事实上,我们已经表明,在环境应激强度增加的过程中,通过eIF2a激酶PKR的一个新的轴与蛋白质PACT相互作用,过度激活促炎症反应的发生。据先前研究报道,ERS过程中PACT-PKR的激活机制是促凋亡的,同时可诱发细胞炎症程序。根据以往的文献数据认为,内质网应激与促炎条件相互作用,互为因果。但是,在OM发病机理中,内质网应激的作用机制尚不明确。因此,我们在一个实验性的OM小鼠模型中测试了内质网应激和炎症基因表达的存在,同时探讨运用内质网应激的抑制剂如何影响促炎反应和OM的发病机制。更进一步研究OM及ERS的关系,对于研究炎症发生理论和完善细胞自修复机制具有重要意义,且有助于进一步认识疾病发生发展的机制,为临床OM疾病预防提供新理论依据,对OM治疗提供新药物途径。拟解决的科学问题1)如何构建利于中耳炎长期效应观察类似人类中耳炎的模型,该模型是否适于讨论中耳炎分子机制及过程?2)构建的OM模型是否有内质网应激反应的启动,内质网应激又是否反作用于OM?3)抑制内质网应激是否可以减低炎症反应,降低OM发生?4)内质网应激在OM是否起到关键作用或者主导作用?第一章:构建合适的OM模型:肽聚糖（PGPS）诱导的B6小鼠中耳炎模型特点研究方案:我们先前的研究中证明,接种格兰仕阳性杆菌细胞壁成分肽聚糖(PGPS可诱导中耳炎症反应,从而创建不需要活细菌或病毒的OM模型,该模型生存率高利于长期效应观察。PGPS是一种病原体相关微生物模式（PAMP）可以激活Toll样受体2（TLR2）,导致免疫反应的激活。本文采取鼓室内注射肽聚糖（PGPS）（PGPS最佳注射剂量为55μg/10μL,PBS为溶剂）诱导C57BL/6J（B6）小鼠,构建中耳炎（OM）模型,PBS（10 μL）构建对照组。通过耳内窥镜形态学观察,听觉脑干诱发电位（ABR）、畸变产物耳声发射技术（DPOAE）及鼓室计功能学观察评估鼓膜形态变化、听力水平及鼓室压力,评判中耳炎模型中耳腔炎症的特点,同时应用HE染色、RT-PCR、Western-blot、TUNEL染色及免疫组化等分子生物学技术检测炎性相关因子及凋亡相关基因的表达,检测PGPS诱导的中耳炎模型的生物学特点。研究结果:1.PGPS诱导后发现第1d小鼠部分外耳道皮肤及鼓膜开始充血,第2d鼓膜标志不清,锤骨纹模糊,第3d鼓室内可见少许脓性分泌物,炎症模型建立。HE染色发现PGPS组小鼠中耳粘膜上皮增厚,中耳腔内炎症细胞增多,以多核细胞为主,对照PBS组中耳腔无炎症细胞浸润。2.听功能学结果提示B6小鼠在PGPS诱导后,Click、8Khz、16kh阈值在ABR上升高有统计学意义;鼓室压力降低,成负压状态。DPOAE测定与PBS组无明显统计学差异。3.PGPS诱导后B6小鼠炎症及凋亡基因cleaved Cas3、TNF-α、IL-6、TLR2mRNA增高,而IL-1β没有差异。Western-Blot也验证了 RT-PCR的结果,提示相应的炎症及凋亡蛋白表达也升高,且有统计学意义。4.免疫组化提示PGPS组中耳粘膜上皮中TNF-α表达阳性,定量分析提示PGPS组表达明显升高,差异有统计学意义。5.细胞凋亡原位检测TUNEL法检测中耳腔组织阳性凋亡情况,PGPS组较PBS组TUNEL阳性中耳表皮细胞数量显着增加,提示在PGPS诱导后的小鼠中耳组织中上皮细胞凋亡增加。第二章 内质网应激与中耳炎的关系研究方案:分组及注射同第一部分,通过RT-PCR和Western-blot探讨PGPS诱导的B6小鼠中耳粘膜上皮组织中内质网相关基因ATF6、Cas12、BIP、CHOP mRNA水平及相关蛋白的表达,探讨内质网应激在中耳炎发生过程中的作用,利用免疫组织化学方法检测凋亡相关蛋白CHOP的表达,探索ERS可诱发细胞凋亡,参与中耳炎的炎症机制;用CellRox试剂盒检测中耳粘膜上皮中ROS的生成,初步探讨氧自由基的生成与中耳炎发生的关系。研究结果:1.取PBS组和PGPS组的B6小鼠中耳组织,运用RT-PCR检测内质网应激相关相关基因ATF6、Cas12、CHOP、BIPmRNA的表达,在PGPS诱导组表达明显高于PBS组,均有统计学意义（P<0.05）。2.运用Western-Blot蛋白免疫检测发现,PGPS诱导组ERS的相关蛋白ATF6、Cas12、CHOP、BIP表达也明显增高,与PBS组比较数值有统计学意义（P<0.05）。3.免疫组化检测凋亡蛋白CHOP,提示PGPS诱导的B6小鼠组CHOP蛋白在细胞质核均有表达;同时运用ImageJ定量分析结果显示PGPS诱导的小鼠CHOP表达明显高于PBS组小鼠,数值有统计学意义（P<0.05）。4.CellRox试剂盒检测中耳上皮组织中ROS的生成,提示PGPS诱导后B6小鼠组比对照PBS组ROS生成明显增多,中耳粘膜上皮细胞荧光染色阳性。第三章 内质网应激抑制剂TUDCA对中耳炎的保护作用研究方案:我们选取B6小鼠随机分为三组:PGPS组（PGPS剂量为55 μg/10μL）,TUDCA治疗组（200μg TUDCA用10μLPGPS新鲜稀释）和PBS组。通过HE染色和耳内窥镜检查,观察三组小鼠中耳腔情况;听觉诱发脑干反应（ABR）检测ABR阈值;WB检测相关炎症及内质网应激相关蛋白表达。研究结果:1.TUDCA组ABR检查在短声Click、低频8KHz、稍高频16KHz明显比PGPS组阈值降低,数值有明显差异（P<0.05）。TUDCA组ABR与PBS组比较,虽然阈值高于PBS组,但统计学无明显差异。2.HE染色显示TUDCA组中耳上皮与PGPS组比较,中耳粘膜上皮增厚减低,炎症细胞浸润减少等,分析中耳粘膜上皮厚度及炎症覆盖面积比值,提示与PGPS组比较TUDCA组中耳上皮炎症减弱,同时测量中耳上皮的厚度以及炎症覆盖面积比值提示,TUDCA组两者数值均降低,数值有统计学意义（P<0.05）。3.westernb-blot提示TUDCA组与PGPS组相比内质网应激相关蛋白ATF6、Cas12、CHOP、BIP mRNA表达明显降低。TUDCA组炎症相关基因TNF-α的表达也明显降低。第四章探讨内质网应激在OM炎症中的主导作用—自噬、氧化应激与中耳炎的作用关系研究方案:随机选取B6小鼠,构建TUDCA、雷帕霉素（Rapamycin RAP）,自噬基因用RT-PCR定量分析,检测PGPS组和PBS小鼠组P62、LC3的表达,探讨TUDCA与RAP对自噬机制的抑制,同时检测内质网应激相关基因在各组的表达,探讨RAP对ER-stress的抑制;RT-PCR检测PBS,PGPS组和TUDCA氧化应激相关基因的表达,探讨氧化应激在PGPS诱导的OM作用;进一步阐明自噬、氧化应激与内质网应激在中耳炎机制中的作用关系。研究结果:1.PGPS诱导的B6小鼠自噬相关基因P62、LC3表达升高,TUDCA及自噬抑制剂Rap治疗后自噬相关基因P62、LC3都明显减低,与诱导组比较数值有统计学意义（P<0.05）;TUDCA组与Rap组相比自噬相关基因P62、LC3表达降低的更明显,而且两组差异有明显不同（P<0.05）,提示TUDCA可通过抑制内质网应激减低OM自噬发生。2.与第三部分结果一致,TUDCA组较PGPS组,内质网应激相关基因ATF6、BIP、CHOP mRNA减低明显,TUDCA组与PGPS组间数值差异有统计学意义（P<0.05）;Rap治疗后较PGPS组内质网应激相关基因ATF6、BIP、CHOP mRNA趋势减低,但两组间数值差异明显（P>0.05）;TUDCA治疗组相对’Rap治疗组内质网应激相关基因ATF6、BIP mRNA减低明显,两组间数值差异有意义（P<0.05）,而CHOP mRNA的减低两组之间无差异,表明Rap不能抑制内质网应激发生。4.氧化应激相关基因检测,PGPS组较PBS组氧化应激相关蛋白SOD mRNA表达轻度升高外,Nrf2、GSH-Px、NOD、Catalase基因mRNA表达无差异;TUDCA治疗后氧化应激相关基因未见明显减低,提示氧化应激机制可能未参与ROS的生成,表明PGPS诱导OM氧化应激没有发生。研究创新性及意义1.成功运用革兰氏阳性杆菌细胞壁成分肽聚糖PGPS在C57BL/6J小鼠诱导中耳炎模型,且该模型较稳定,较以往细菌诱导的模型小鼠生存率高,有助于观察小鼠的中耳炎长期效应。2.内质网应激ER-Stress参与许多炎症的发生与发展。本实验阐述ER-Stress在中耳炎发生发展中的作用及角色,同时探索中耳炎ER-Stress的发生机制;同时抑制ER-Stress可以有效减轻中耳炎症,说明抑制ER-Stress可作为一个治疗OM的潜在靶点,为以后治疗中耳炎提供新的理论基础。3.本论文首次探讨内质网应激在中耳炎中的主导作用,相比自噬及氧化应激,在PGPS诱导的C57BL/6J小鼠中耳炎模型中,内质网应激先于自噬发生,且能激活氧化应激氧自由基的产生,抑制内质网应激同时可以有效抑制自噬的发生,这为OM治疗提供治疗前景。
刘玉春[5]（2020）在《E3泛素连接酶在Wnt与NF-κB通路中的调控机制研究》文中提出泛素化是指将泛素小分子共价结合到靶蛋白上的过程,在此过程中,E3连接酶特异性的将泛素分子连接到靶蛋白上,调节蛋白的降解或者调控信号通路的转导。由于泛素化在各种生命活动过程中的重要作用及E3连接酶的特异性识别功能,使得E3连接酶越来越多的被人们所关注,然而E3连接酶在信号通路转导中的调控功能仍有待研究。本研究以CHIP（The carboxy-terminus of Hsp70-interacting protein）和 TRIM25（Tripartite motif-containing 25）两种 E3 连接酶为研究对象,深入地探究了 E3连接酶在信号通路转导中的重要作用。CHIP是一种U-box型的E3泛素连接酶,在细胞内蛋白质量监控系统、多种信号通路的调节和多种疾病的发生中起着重要作用。现已发现CHIP的酶活突变（p.T246M）导致 SCAR16（Spinocerebellar autosomal recessive 16）疾病的发生。而SCAR16是一种以小脑萎缩和共济失调为主要特征的神经退行性疾病,虽然对于此类疾病的认识已经有100多年,但是在临床上的治疗方法很有限。因此阐明CHIP蛋白在相关信号通路中的调控功能,对于CHIP突变引起SCAR16的致病机制研究具有重要意义,也为疾病的治疗奠定基础。TRIM家族是E3连接酶中包含成员最多的蛋白家族,具有RING结构域、B-box结构域和蜷曲螺旋结构域,参与调控细胞增殖、免疫反应和抗病毒反应等多种生理过程。已有研究报道TRIM家族中多个分子参与调控TNFα（Tumor necrosis factor α）诱导的NF-κB通路,与炎症、自身免疫疾病和肿瘤等多种疾病的发生有关。然而TRIM家族中TRIM25蛋白是否参与该通路的调控仍不清楚,分子机制仍有待研究。基于此我们分为两个部分,利用生物信息学方法和生物学实验分别研究了 CHIP影响的信号通路及其分子机制,以及TRIM25对TNFα诱导的NF-κB通路的调控作用与分子机制。第一部分:我们首先利用生物信息学方法,对蛋白质芯片杂交得到的数据进行分析,筛选与CHIP和缺失酶活区域的CHIP TPR-CC具有相互作用的蛋白,获得两组数据集,分别包含有262个和167个阳性候选蛋白。通过GO（Gene ontology）和 KEGG（Kyoto encyclopedia of genes and genomes）富集分析,发现多数阳性候选蛋白富集到细胞质和细胞核中,参与多种通路的转导过程。通过蛋白相互作用网络（Protein-protein interaction network,PPI）分析,筛选到 β-catenin处于相互作用网络的关键位置,因此我们具体探讨CHIP对Wnt通路的调控作用。通过免疫印迹和荧光定量PCR实验,在HEK293T细胞中,过表达CHIP蛋白能够促进Wnt信号通路的激活,而酶活突变的CHIP（p.T246M）不具有此功能。在神经细胞系SHSY5Y和HT22细胞中,沉默和敲除CHIP蛋白能够抑制Wnt通路的转导,也抑制细胞的迁移和增殖。同时在CHIP（p.T246M）突变的SCAR16发病大鼠中,发现Wnt通路被抑制。核质分离和荧光分析实验,也验证了 CHIP能够促进β-catenin的核累积,表明CHIP能够促进Wnt通路的激活。随后我们对CHIP调控Wnt通路的分子机制进行探讨。利用ZDOCK软件预测、免疫印迹和免疫共沉淀实验,发现CHIP可以靶定在LEF1蛋白。进一步的免疫共沉淀实验发现,E3连接酶CHIP能够增强LEF1的K63泛素化,并促进LEF1和β-catenin的相互作用;而酶活缺失的CHIP（p.T246M）不具有此功能;沉默CHIP可以抑制以上信号转导的功能。上述结果表明,CHIP对Wnt通路的转导具有重要的调控作用,CHIP突变导致Wnt通路被长期抑制,可能是SCAR16疾病发生的原因。第二部分:对GEO数据库中获取的数据集GSE142986和GSE40838,进行差异表达基因分析、GO和KEGG富集等生物信息学分析,发现TRIM25是其中一个具有显着差异的基因,能够被富集到NF-κB通路中,参与该通路的调控。通过双荧光素酶报告基因、免疫印迹和荧光定量PCR实验,验证了 TRIM25能够促进TNFα诱导的NF-κB通路的激活。过表达TRIM25促进IκBα蛋白的降解,增强NF-κB通路下游基因的转录,进而促进TNFα诱导的NF-κB信号通路的激活;沉默TRIM25蛋白则对该通路有抑制功能。进一步的免疫共沉淀实验结果显示,TRIM25与TRAF2具有相互作用,在TNFα激活NF-κB通路后,TRIM25与TRAF2的相互作用增强。过表达TRIM25可增强TRAF2的K63泛素化,并促进TRAF2-TAK1和TRAF2-IKKβ的相互作用,最终增强NF-κB信号的激活;而沉默TRIM25后,TRAF2的泛素化和TRAF2-TAK1的相互作用均减弱。上述结果表明,TRIM25通过靶定TRAF2,促进TNFα诱导的NF-κB通路的激活。综上所述,本研究通过生物信息学分析技术对两种E3泛素连接酶CHIP和TRIM25进行研究,快速筛选CHIP和TRIM25影响的信号通路,并通过多种细胞学实验方法具体探讨了 CHIP增强LEF1的泛素化,正向调控Wnt通路的分子机制,和TRIM25增强TRAF2的泛素化,正向调控TNFα诱导的NF-κB通路的分子机制。初步阐明CHIP突变引起SCAR16疾病发生的机制,以及TRIM25影响天然免疫反应的作用机制。
ARSHAD ZAHOOR[6]（2020）在《TAM家族受体MerTK和GAS6通过SOCS/TRAF6/Mal途径抑制乳腺炎中的TLRs通路》文中进行了进一步梳理乳腺炎是导致奶牛泌乳减少的常见疾病之一,它伴有乳腺组织损伤,给乳制品业造成重大经济损失的同时,也是危害人类健康。金黄葡萄球菌（S.aureus）是一种感染性革兰氏阳性（G+）细菌,是乳腺炎的主要病原之一。生长停滞特异性蛋白6（Gas6）和蛋白S（Pro S）是一类分泌性蛋白质,负责结合并激活TAM受体酪氨酸激酶（Tyro3 and Axl and MerTK,TAM）。但是,TAM在金黄葡萄球菌感染所致奶牛乳腺炎中的作用仍然未被充分了解。本文旨在了解金黄葡萄球菌所致乳腺炎的信号传导途径,阐明负调控Toll样受体（TLRs）介导的组织稳态和反馈机制。研究将有助于理解免疫平衡调节中的新靶点,并以此发展针对金黄葡萄球菌所致奶牛乳腺炎的治疗策略。1. 乳腺炎组织的组织病理学检测以及TAM受体激酶的作用奶牛乳腺炎是严重危害奶牛业的一种疾病,在世界范围内造成了严重的经济损失。奶牛乳腺炎的主要病因是病原菌感染。病原菌引发促炎因子（TNF-α,IL-1β,IL-6）的大量产生。奶牛乳腺存在抵抗病原菌入侵的先天性免疫防御机制,以防止不必要的炎性损伤。我们从中国武汉的屠宰场采集母牛健康和异常乳腺组织,采用组织病理学检查,发现感染乳腺组织存在严重的组织病理学改变。H&E染色可见显着的组织病理学改变:乳腺腺泡和乳腺上皮细胞的结构退化以及组织内炎性细胞浸润、水肿和充血。随后,我们采用q RT-PCR检测了乳腺炎奶牛的乳腺组织和正常奶牛的乳腺组织中促炎因子的表达水平。结果表明,与正常乳腺组织相比,金黄葡萄球菌感染的乳腺组织中促炎因子的表达水平显着升高。同时,我们还观察到患乳腺炎乳腺组织中TAM受体激酶（Tyro3,Axl和MerTK）以及SOCS1和SOCS3的基因表达水平也显着高于与正常乳腺组织。在随后的研究中,我们发现牛乳腺组织中MerTK,Axl,Tyro3以及其与配体Gas6和Pro S的表达水平随着促炎性因子的上调而增加。然而,我们对TAM受体激酶在乳腺炎中的作用机制仍未完全理解。我们希望通过对奶牛乳腺炎的反馈机制研究,完善奶牛乳腺炎发病机制的认识,为其治疗提供新的思路。此外,据报道,金黄色葡萄球菌是牛乳腺炎中最常见的致病菌。为进一步验证我们结果,我们在MerTK和Gas6敲除小鼠中构建了乳腺炎体内模型,并使用MerTK和Gas6敲除小鼠乳腺原代细胞构建了体内感染模型,来探究TAM受体家族在金黄葡萄酒球菌诱发的乳腺炎中的作用。2. MerTK缓解金黄葡萄球菌引起的炎症反应的分子机制金黄葡萄球菌诱导的急性炎症的主要特征是宿主防御力下降,促炎因子稳态失衡,组织的炎性损伤。MerTK是否通过在RAW 264.7中通过SOCS1/3途径抑制TLR2/6信号通路的激活从而缓解金黄葡萄球菌感染引发的炎性损伤。为了阐明TAM受体激酶和相关蛋白在金黄葡萄球菌诱发的乳腺炎中的作用,我们选择RAW264.7构建细胞模型。我们之所以选择巨噬细胞,是因为迄今为止,人们一直认为TAM受体在巨噬细胞上表达时,可以调控巨噬细胞的吞噬和胞吐作用。在金黄色葡萄球菌感染RAW 264.7细胞之后,病原体相关分子模式经由TLR2/6激活NF-κB和MAPK信号通路,导致促炎因子表达量显着上调。此外,与对照组相比,金黄葡萄球菌感染的DF-1细胞中MerTK的表达量显着上调。MerTK进一步通过调控SOCS1/3的表达来降解Mal从而抑制TLR2/6介导的信号通路的激活。此外,当沉默RAW 264.7中的MerTK时,MAPKs（ERK,JNK,p38）和NF-κB（I?Bα,p65）信号通路中关键蛋白的磷酸化水平显着上调,促进促炎因子的产生。综上所述,MerTK通过SOCS1和SOCS3抑制了对TLR2,TLR6介导的炎性信号途径,在金黄色葡萄球菌诱导的炎症途径和细胞因子的自我调节中发挥了重要的作用。3. MerTK通过Toll样受体介导的信号传导在乳腺中负调控金黄葡萄球菌诱导的炎症反应在对抗金黄葡萄球菌诱导的炎症反应中,我们构建了MerTK敲除小鼠乳腺炎模型,发现MerTK通过内在的负反馈调节以平衡宿主防御系统的过度反应。金黄葡萄球菌引发TLR2和TLR6信号转导,随后募集TRAF6,并通过泛素化激活下游复杂的信号转导通路,包括MAPK和NF-κB信号通路。我们发现,一旦乳腺组织和细胞感染,金黄葡萄球菌诱导的TLR2/TLR6激活与MerTK激活将同时发生,导致野生型小鼠乳腺组织和上皮细胞中SOCS1和SOCS3抑制因子表达的升高。同时,在金黄葡萄球菌感染MerTK-/-小鼠乳腺癌中,p65、IκBα、p38、JNK和ERK的磷酸化显着增加,并产生了更多的促炎因子。此外,MerTK-/-明显抑制了金黄葡萄球菌诱导的STAT1磷酸化和随后的SOCS1/SOCS3表达,这在靶向TRAF6抑制TLR2/TLR6介导的免疫反应的负反馈机制中至关重要。综上所述,我们发现并证实了,在金黄葡萄球菌感染的小鼠乳腺组织和小鼠乳腺上皮细胞（MMEC）中,MerTK通过STAT1/SOCS1/SOCS3信号轴来调节机体内在反馈。4. Gas6通过TLR信号通路负调控金黄葡萄球菌诱导的小鼠乳腺炎炎症反应本部分探讨了Gas6在金黄葡萄球菌诱发的乳腺炎中的作用。结果表明,TLR受体激活可启动乳腺组织和上皮细胞的先天免疫应答,而金黄葡萄球菌感染可激活TLR2和TLR6,从而驱动多种细胞内MAPKs和NF-κB信号传导途径。此外,金黄葡萄球菌诱导Gas6,然后激活TAM受体激酶途径,这与通过SOCS1和SOCS3诱导抑制TLR2和TLR6介导的炎症途径。Gas6的单缺失可以诱导TRAF6的大量表达和SOCS1和SOCS3的表达下调,从而作用于TAM受体介导的抗炎作用的调节。金黄葡萄球菌诱导的MAPK及NF-?B和p65的磷酸化也受控于Gas6,Gas6下调金黄葡萄球菌感染的乳腺组织和乳腺上皮细胞中促炎因子（IL-1β,IL-6和TNF-α）的产生。以上体内和体外研究揭示了Gas6介导的负反馈机制,该机制通过诱导SOCS1/SOCS3激活TAM受体激酶（MerTK,Axl和Tyro3）来抑制TLR2和TLR6介导的MAPK和NF-?B信号传导。综上所述,我们得出以下结论:炎症相关刺激物会诱发TAM受体酪氨酸激酶家族（Tyro3,Axl and MerTK）的激活。MerTK,Axl,Tyro3的激活依赖于其配体Gas6和Pro S。上调TAM受体酪氨酸激酶的表达,可以抑制TLR2和TLR6介导的MAPK和NF-?B信号传导,进而抑制促炎因子引起的瀑布反应。SOCS1/SOCS3通过调控MerTK和Gas6来降解TRAF6/Mal,抑制TLR信号通路传导,减弱机体过度的炎症反应。这一负反馈调节在金黄葡萄球菌诱发奶牛乳腺炎中发挥着至关重要的稳态调节作用。
金亮[7]（2020）在《医用可降解Mg-Nd-Zn-Zr合金与巨噬细胞的相互作用研究》文中进行了进一步梳理可降解镁合金拥有较高的力学性能,可降解性和良好的生物相容性,是心血管支架和骨内植入物等的理想制备材料。然而,异物反应（FBR）是阻碍镁合金临床应用的主要障碍之一。巨噬细胞是人体免疫系统中一类重要的固有免疫细胞,可以分为促炎型（M1）和抗炎型（M2）两类。巨噬细胞一方面可以通过识别外源性物质分化为M1型,继而触发炎症反应、参与人体免疫应答。另一方面也可以受内源或外源性物质调节分化为M2型,继而抑制炎症反应并促进组织修复。正是由于巨噬细胞的高度可塑性,使其成为FBR的主要参与者和调控者,特别是M1型巨噬细胞触发的过度炎症反应是材料植入机体失败的重要原因。可降解镁合金材料的主要降解产物是各类镁盐、氢气和氢氧根离子。目前,很少有研究报道可降解镁合金的降解产物对巨噬细胞的生物学效应。此外关于镁合金植入后产生的降解颗粒（DPs）的代谢研究也不多。因此,本研究利用课题组研发的医用可降解镁合金Mg-Nd-Zn-Zr（简称JDBM）作为研究对象,在体外实验中分别从以下四个方面系统性地开展了JDBM和巨噬细胞之间的相互作用研究:（1）镁合金对巨噬细胞的生物适应性研究;（2）镁合金对巨噬细胞的抗炎机制研究;（3）镁合金对巨噬细胞的免疫调节作用研究;（4）巨噬细胞吞噬镁合金DPs的途径和代谢机制研究。首先,本研究探索了JDBM浸提液（extract）对巨噬细胞的生物适应性,结果显示:不同浓度的浸提液（10%extract、20%extract、50%extract和100%extract）对单核细胞及其来源巨噬细胞的功能影响是不同的。具体来说,低浓度浸提液（10%extract和20%extract）对单核细胞和巨噬细胞的细胞毒性,细胞功能（增殖,分化,迁移,吞噬等）和细胞形态无明显影响,但是中高浓度浸提液（50%extract和100%extract）会通过诱导细胞毒性（前者以凋亡介导为主,后者以坏死介导为主）导致细胞功能和形态发生部分或完全受损。此外,初步发现了镁合金具有抑制酯多糖（LPS）诱导的巨噬细胞炎症反应。进一步研究发现浸提液中的镁离子浓度（而不是高碱性环境）是导致细胞功能受损的主要原因。这方面的研究工作为后续深入开展镁合金对巨噬细胞的生物效应研究提供了实验基础。其次,基于镁合金降解产物的抗炎效应,本研究进一步探索了浸提液抑制LPS诱导巨噬细胞炎症反应的潜在分子机制,研究发现合适的浸提液（15%extract）可以在不影响细胞活力前提下,有效抑制LPS诱导的炎症因子肿瘤坏死因子（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）表达,且主要是依赖浸提液中镁离子起作用。机制研究进一步发现镁离子可以有效抑制LPS诱导的Toll样受体4（TLR-4）-髓样分化因子88（MYD88）-核因子卡帕B（NF-κB）或促分裂素原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路活化以及活性氧物质（ROS）的上调。然而镁离子发挥这些效应并不是通过抑制LPS与TLR-4结合,而是通过激活瞬时感受电位melastatin7（TRPM7）-磷酸肌醇-3-激酶（PI3K）-丝氨酸/苏氨酸激酶（AKT1）通路去抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,且此抑炎效应依赖于镁离子的存续。通过这部分工作,本研究阐明了镁合金抗炎效应的分子机制。随后,利用镁合金降解产物的抗炎特性,本研究进一步探索了JDBM浸提液和巨噬细胞以及血管平滑肌细胞（VSMCs）之间关系。首先探索了低浓度浸提液（5%extract和15%extract）对于LPS激活过的巨噬细胞的极化效应和VSMC生长相关因子例如基质金属蛋白（MMP）,血小板衍生生长因子（PDGF）,转化生长因子（TGF）和血管内皮生长因子（VEGF）等表达影响。研究发现浸提液中的镁离子可以逆转LPS诱导的巨噬细胞M1极化趋势,同时促进其M2极化,并且可以显着降低M1型巨噬细胞调控的各类VSMCs相关因子表达。随后,本研究采用间接培养法（条件液或trans-well）探索了浸提液通过巨噬细胞介导VSMCs功能变化的潜在作用。研究发现JDBM浸提液可以显着抑制LPS诱导的巨噬细胞对VSMCs的增殖,迁移以及表型转换的调节作用,且不会诱导VSMCs细胞活力下降。通过这部分工作,本研究阐明了镁合金可以通过调控巨噬细胞极化,继而间接影响VSMCs功能。最后,由于可降解镁合金材料植入后可以释放直径为微纳米级别的DPs,而这些颗粒与浸提液是有显着区别的,因此有必要探索DPs和巨噬细胞的相互作用。本研究结果表明:DPs会随着浓度上升导致巨噬细胞发生凋亡依赖的细胞死亡。通过透射电镜（TEM）和光学显微镜观察发现巨噬细胞可以吞噬尺度（直径小于10μm）合适的DPs。机制研究发现巨噬细胞首先通过异物吞噬（不是自噬）途径吞噬DPs,随后在胞内形成吞噬溶酶体包裹DPs,最后DPs在吞噬溶酶体内进一步降解。本研究还发现胞内的DPs会通过激活ROS进而轻度上调炎症因子表达,而ROS的上调可能是内质网应激所致。通过这部分工作,本研究阐明了镁合金在巨噬细胞内的降解途径和代谢机制。本文首先系统性地探索了镁合金降解产物对巨噬细胞生物适应性研究,随后基于镁合金的抗炎效应,本文进一步阐明了其分子机制。这部分工作表明镁合金降解产物可以有效的控制巨噬细胞诱发的炎症反应,继而降低FBR对镁合金的影响。之后基于镁合金抗炎效应,本文发现镁合金在炎症条件下通过巨噬细胞免疫调节作用影响VSMCs的细胞功能,该研究工作表明了镁合金在血管支架领域具有特殊的优势。最后,本文又深入分析了巨噬细胞对镁合金降解产物颗粒的代谢机制,这部分研究结果拓宽了医用可降解镁合金材料体内降解代谢行为的认识。总之,本文通过上述研究,深入分析了镁合金和巨噬细胞之间相互作用的关系,这些研究工作将为生物可降解镁合金材料的临床应用提供新的理论基础和指导。
宋煜[8]（2020）在《CUL4B在调控TLR介导的炎症反应中的作用及其机制》文中认为固有免疫对于机体抵御致病微生物的侵害是非常重要的。巨噬细胞作为固有免疫反应中发挥关键作用的效应细胞,负责对感染的快速识别以及对致病微生物进行清除。固有免疫系统主要是通过模式识别受体（Pattern-recognition receptor,PRR）对病原体中广泛存在的特定分子结构即病原体相关分子模式（Pathogen-associated molecular pattern,PAMP）完成特异性的识别。PRR 通过 PAMP进而启动下游级联信号传导程序来清除病原体。Toll样受体（Toll-like receptor,TLR）是一种进化上保守的PRR,对于识别和消除病原体具有非常重要的作用,TLR可以辨别来自不同病原体的PAMPs。TLRs识别PAMPs后,触发一系列信号激活核转录因子NF-кB促使巨噬细胞等固有免疫细胞分泌趋化因子和炎性因子,启动固有免疫应答进行宿主防御。因此,TLR在固有免疫应答中起着至关重要的作用。然而,异常的TLR信号也会导致炎症反应异常和众多的免疫性疾病,败血症就是其中之一,这是一种以持续过度炎症和免疫抑制为特征的病理综合症,具有很高的发病率和死亡率。尽管目前对败血症中关键的发病机制的了解已大大增加,但在临床上仍缺乏完全有效的治疗方法。为此,探究TLR信号的作用机制,避免TLR信号的异常活化意义重大。Cullin 4B（CUL4B）蛋白是 Cullin-4B Ring E3 连接酶复合物（CRL4B）中的支架蛋白,通过针对特定底物进行泛素依赖性降解或修饰来参与调节各种生理和发育的过程。在人群中,CUL4B突变导致X连锁智力低下综合征,病患除了智力障碍外,还表现出单核细胞数升高等其他缺陷,提示CUL4B可能在单核巨噬细胞功能方面有作用。我们实验室近期的研究结果显示,CRL4B复合物协同转录抑制复合物PRC2促进H3K27三甲基化（H3K27me3）,抑制一系列抑癌基因的转录并促进肿瘤的发生发展,另一方面CRL4B复合物通过协同PRC2及HDAC复合物转录抑制磷酸酶PP2A与PHLPP1/2进而调控AKT/β-catenin信号通路,这些结果说明CUL4B参与表观遗传调控。目前,表观遗传修饰已被证明对于感染和病原体引起的免疫响应具有关键的调节功能。同时,随着TLR信号调控网络的日渐完善,表观遗传修饰在众多TLR诱导基因转录调控过程中的作用逐渐显现。而CUL4B复合物作为一个转录抑制因子是如何参与TLR相关的免疫信号途径的尚不清楚。基于上述事实,本课题通过髓系细胞特异性敲除Cul4b基因小鼠对CUL4B在TLR介导的固有免疫应答中的作用及其机制进行了研究。第一部分CUL4B缺失促进TLR介导的炎症反应本部分主要利用病原体诱导的小鼠疾病模型探究CUL4B在TLR介导的固有免疫应答中的作用,并取得以下结果。1.成功构建了特异性敲除髓系细胞Cul4b的小鼠（Myeloid cell specific KO,MKO）。利用流式检测小鼠的各种髓系细胞组成,发现Cul4b缺失不影响小鼠的脾脏和骨髓中的单核细胞、巨噬细胞、树突细胞以及中性粒细胞的比例与数量。2.LPS诱导BMDM,qRT-PCR分析细胞炎性因子的水平,结果表明在TLR2/3/4的配体诱导以后,MKO的BMDM中Tnfα、Il1β、Il6以及Ifnβ的mRNA表达量高于WT的BMDM,说明CUL4B缺失促进TLR2/3/4配体诱导的炎性因子表达。3.TLR2/3/4的配体诱导后,MKO的BMDM分泌到培养基中的炎性因子如TNF-α、IL-1β、IL-6以及IFNβ明显高于WT的BMDM分泌的炎性因子。4.分别给予小鼠脂多糖（LPS）刺激和鼠伤寒沙门氏杆菌（SL1344）感染,模拟革兰氏阴性菌感染造成的败血症休克,并通过检测小鼠血液中TNF-α、IL-1β和IL-6,分析血液细菌容量和小鼠生存率来分析CUL4B敲除对巨噬细胞中TLR信号的影响。我们发现,在LPS以及革兰氏阴性菌造成的小鼠败血症症模型中,MKO小鼠具有更严重的炎症反应和更高的死亡率。5.小鼠体内实验,TLR3的配体poly（I:C）诱导小鼠感染,对小鼠外周血中炎性因子TNF-α、IL-6以及IFNβ的含量进行了检测并且统计分析了两种基因型小鼠的生存率。实验结果表明MKO小鼠血液中TNF-α、IL-6以及IFNβ的含量明显多于WT小鼠,并且MKO小鼠的死亡率也明显高于WT小鼠。综合以上结果,小鼠髓系细胞缺失CUL4B加重了 TLR3/4配体诱导的炎性因子分泌和感染性休克。因此CUL4B负调控TLR2/3/4介导的固有免疫应答。第二部分CUL4B通过抑制GSK3β活性调控TLR2/3/4介导的免疫应答上一部分结果,我们发现CUL4B缺失促进TLR信号诱导的固有免疫反应,那么其发挥调控作用的分子机制又是怎样的呢?研究表明GSK3β是多种TLR信号通路中促炎细胞因子产生的关键调控分子,GSK3β抑制剂可以有效抑制促炎细胞因子的产生,并促进抗炎性因子IL-10的产生。尽管这些研究清楚地证明了 GSK3β在TLR介导的细胞因子产生中的重要性,但是GSK3β活性的调节机制知之甚少。实验室前期结果显示CRL4B可以调控GSK3β活性。那么,CUL4B负调控TLR2/3/4介导的免疫应答是否是通过调控GSK3β实现的呢?为此,我们进行如下分析:1.我们首先检测了 CUL4B缺失对LPS诱导的GSK3β活性的影响,发现CUL4B敲除的巨噬细胞在响应LPS诱导时下调GSK3β的S9位磷酸化水平,提示巨噬细胞CUL4B敲除后GSK3β的激酶活性显着提高。2.与LPS诱导结果一致,CUL4B敲除的BMDM在响应poly（I:C）或者PGN诱导时GSK3β S9位磷酸化水平显着低于WT巨噬细胞,这些结果表明在TLR2/3介导的固有免疫信号中CUL4B缺失增强GSK3β激酶活性。3.为了验证上述观点,我们利用GSK3β抑制剂对LPS或poly（I:C）诱导的小鼠进行拯救实验,发现GSK3β抑制剂能明显缓解休克模型中MKO小鼠的症状、降低死亡率。4.研究显示GSK3β可以增强NF-кB转录活性而抑制CREB的转录活性。因此,我们采用报告基因和Western分析方法检测了缺失CUL4B对巨噬细胞NF-кB和CREB转录活性的影响。发现敲除髓系细胞CUL4B导致NF-кB的转录活性增强,而CREB的转录活性降低,进而减少了抑炎因子IL-10表达。综上所述,CUL4B通过抑制GSK3β活性进而调控TLR2/3/4介导的固有免疫应答反应。第三部分CUL4B通过抑制Pten转录负调控TLR2/3/4介导的免疫应答第二部分我们发现CUL4B通过抑制GSK3β活性调控TLR2/3/4诱导的固有免疫反应,那么CUL4B是如何调控GSK3β活性的呢?为此,我们进行了以下分析:1.GSK3β（S9）的磷酸化受AKT催化,我们首先检测了缺失CUL4B对AKT活性的影响。发现AKT的两个活性位点Thr308、Ser473的磷酸化水平在TLR2/3/4配体刺激下MKO巨噬细胞中都显着低于对照小鼠巨噬细胞;2.分析催化AKT磷酸化和去磷酸化的激酶和磷酸酶发现,敲除CUL4B并不影响巨噬细胞这些酶的表达水平;3.进一步分析发现CUL4B敲除后AKT的负调控因子PTEN显着升高,而且CUL4B对PTEN的调控发生在转录水平;4.利用染色质免疫共沉淀实验（ChIP）确定了 CUL4B在Pten启动子区域的结合位点,而且发现TLR2/3/4刺激导致CUL4B在Pten启动子区域的结合减少。qChIP分析显示CUL4B缺失导致PRC2复合物的主要成分EZH2在Pten启动子区域的结合减弱,H2AK119ub1和H3K27me3富集程度显着降低,而激活转录的H3K4me3显着增加。提示CRL4B协同PRC2复合物抑制Pten转录。上述结果在机制上解释了 CUL4B复合物通过抑制Pten转录进而限制GSK3β的活性,避免了 TLR介导的固有免疫反应持续活化,保持免疫稳态。同时这一研究将表观遗传修饰与固有免疫相互联系,进一步丰富了对固有免疫应答信号的认识,为败血症等病原体引起的免疫系统疾病的预防和治疗提供了一个新的潜在靶点。
高照[9]（2020）在《欧前胡素对APAP诱导急性肝损伤的保护作用机制及其脂质体制备的研究》文中指出目的:药物不良反应（ADR）是临床上导致疾病和诱发死亡的重要原因。据世界卫生组织公布的数据,药物性肝损伤（DILI）作为最严重的药物不良反应之一,已经成为全球第五大死亡因素。对乙酰氨基酚（APAP）是使用最广泛的非处方止痛和解热药之一,过量或长期服用可导致肝毒性,严重者甚至诱发急性肝功能衰竭。目前研究揭示APAP肝毒性主要与体内亲电反应性代谢中间体的形成,及诱发的氧化应激和线粒体功能损伤有关,但机理尚未完全明确,对其诱导的急性肝损伤临床尚无特效药物,主要为NAC等抗氧化剂对症治疗。欧前胡素（Imperatorin,IMP）是白芷中主要的6,7-呋喃香豆素类天然活性提取物,研究揭示其具有良好的抗氧化应激、抗炎症、抗癌、神经保护及调节糖脂代谢和护肝等生物活性作用,但对于APAP引起的急性肝损伤的保护作用尚不清楚。本研究从肝组织病理损伤和氧化应激以及线粒体功能及凋亡和炎症反应等方面对欧前胡素的肝保护作用进行药效学评价和验证,并基于肝脏代谢调节关键药物靶点FXR核受体,对IMP肝保护作用分子机制进行研究并探索建立IMP长循环脂质体以改善药物生物利用度。方法:1.IMP对APAP诱导C57BL/6小鼠及原代肝细胞的肝损伤保护作用SPF级雄性C57BL/6小鼠随机分为5组（n=6）,即正常对照组、肝损伤模型组、IMP低剂量给药组（50 mg/kg/d）、IMP高剂量给药组（100 mg/kg/d）、OCA阳性激动剂给药组（10 mg/kg/d）。正常对照组给予等体积溶媒（0.5%CMC-Na）,其余各组连续灌胃给药5d,末次给药后过夜禁食12h。模型组及各剂量组小鼠腹腔注射APAP（300 mg/kg）,对照组给予等量生理盐水。APAP暴露10h后,取小鼠血清及肝组织进行肝损伤血清生化指标及组织病理学分析,以TUNEL法原位检测肝细胞凋亡,并通过小鼠生存率实验评价IMP对APAP诱导肝损伤的保护作用。通过分离C57BL/6小鼠原代肝细胞体外培养,构建肝细胞损伤及IMP预给药保护体外模型。IMP给药组分别给予浓度为10 μM、20 μM IMP预处理24h后,IMP给药组及损伤模型组分别加入10 mM APAP,空白对照组加入等体积DMSO溶媒,诱导24h后收获细胞进行相关指标研究。选择氧化应激损伤、炎症反应及细胞凋亡相关因子,以Western blot法检测小鼠肝组织中JNK磷酸化水平和和Nrf2、Bcl2、Bax表达;以试剂盒测定小鼠血清GSH/GSSG 比率以及MDA水平;以ELISA法测定小鼠血清TNF-α、IL-1 β、IL-6水平;同时以qRT-PCR法分析小鼠肝组织及各组原代肝细胞TNF-α、IL-1 β、IL-6、IL-10、COX2 mRNA转录水平;LC-MS/MS测定小鼠肝组织中花生四烯酸代谢物类炎症介质前列腺素E2（PGE2）、白三烯B4（LTB4）、血栓素B2（TXB2）及20-羟-二十烷四烯酸（20-HETE）水平;以CCK-8法检测原代肝细胞损伤模型的细胞存活率;并结合流式细胞术及荧光染色法检测原代肝细胞ROS水平,JC-1膜电位荧光探针检测原代肝细胞线粒体跨膜电位（ΔΨm）;同时以qRT-PCR法分析原代肝细胞损伤模型实验各组炎症因子及Bcl2/Bax mRNA相对转录水平;对上述结果进行对比分析,阐述作用机制。对各组大鼠肝组织进行转录组测序分析,筛选差异表达基因,并通过KEGG通路注释及富集数据库对其进行功能注释及富集性分析,筛选出显着差异表达基因FXR;结合Western blot、qRT-PCR实验结果,双荧光素酶报告基因以及分子对接实验分析,验证IMP对于FXR核受体的作用。2、FXR（Nr1h4）敲除小鼠及原代肝细胞验证IMP保护APAP诱导肝损伤分子作用机制FXR基因敲除(FXR-/-雄性小鼠,随机分为4组（n=6）,即正常对照组、肝损伤模型组、IMP给药组（100 mg/kg/d）和OCA阳性激动剂给药组（10 mg/kg/d）。正常对照组给予等体积溶媒灌胃,其余各组连续灌胃给药5d,末次给药并禁食12h后,模型组及各剂量组腹腔注射APAP（300 mg/kg）,对照组给予等容量的生理盐水。APAP暴露10h后取小鼠血清及肝组织,进行肝损伤血清生化指标及组织病理学分析和TUNEL法原位检测肝细胞凋亡。通过分离FXR-/-小鼠原代肝细胞体外培养,构建FXR-/-肝细胞损伤及IMP/OCA阳性激动剂预给药保护体外模型。IMP/OCA给药组分别给予浓度为20 μM IMP、10μM OCA预处理24h后,各给药组及损伤模型组分别加入10mM APAP,空白对照组加入等体积DMSO溶媒,诱导24h后收获细胞,进一步对FXR肝保护相关作用机制进行分析。通过小动物活体荧光成像系统（BFI）测定IMP给药预处理FXR+/+/FXR-/-小鼠肝组织ROS水平。以Western blot法检测FXR-/-小鼠肝组织中抗氧化和凋亡相关因子Nrf2、Bcl2、Bax表达;以试剂盒测定小鼠血清GSH/GSSG比率以及MDA水平;以ELISA法测定小鼠血清TNF-α、IL-1 β、IL-6水平;并通过qRT-PCR法检测 FXR-/-肝组织中 TNF-α、IL-1 β、IL-6、COX2 mRNA 的 mRNA 转录水平,LC-MS/MS测定FXR-/-小鼠肝组织中花生四烯酸代谢物类炎症介质PGE2、LTB4、TXB2、20-HETE水平。CCK-8法测定FXR-/-原代肝细胞存活率;通过流式细胞术及荧光染色法检测胞内ROS水平,JC-1膜电位荧光探针检测肝细胞线粒体跨膜电位（Δ Ψm）;以qRT-PCR法分析原代肝细胞损伤模型炎症因子及Bcl2/Bax mRNA相对转录水平;比较各组间差异并进一步验证IMP肝保护作用通路。3、IMP长循环脂质体的构建及动物体内药代动力学特征研究以蛋黄卵磷脂（EPC）作和胆固醇作为膜材,以DSPE-PEG2000为表面活性修饰剂,IMP为底物,探索通过薄膜分散法制备IMP长循环脂质体,并利用马尔文激光纳米散射仪表征和验证。通过对IMP电喷雾离子源（ESI）质谱碎裂特征的分析研究,建立高专属性和灵敏度的液相色谱质谱方法,对SD大鼠尾静脉注射IMP长循环脂质体及游离IMP药代动力学特征参数进行研究,并结合体外释放实验和体外红细胞溶血实验,对脂质体递药系统生物利用度、代谢稳定性及安全性等进行研究。结果:1.IMP给药预处理对APAP诱导C57BL/6小鼠及原代肝细胞肝损伤的保护作用动物水平实验结果表明,与APAP损伤模型组相比,IMP高、低剂量给药预处理可以显着提高小鼠存活率（P<0.05）;同时IMP高剂量给药预处理组小鼠血清ALT和AST水平较模型组显着降低（P<0.05）,小鼠肝组织病理坏死面积较损伤模型组明显减小（P<0.01）;显示IMP可以对于APAP诱导C57BL/6小鼠肝组织损伤具有明显保护作用。2.IMP给药预处理改善APAP诱导C57BL/6小鼠肝损伤所致的氧化应激IMP高剂量给药预处理组显着提高小鼠血清GSH/GSSG水平（P<0.05）,同时降低血清MDA含量（P<0.01）;小鼠肝组织及体外原代肝细胞高剂量给药预处理组SOD2及Nrf2 mRNA转录水平明显上调（P<0.05）,Western blot结果表明IMP给药预处理组小鼠肝组织中Nrf2表达明显增强;同时荧光显微镜及流式细胞仪检测结果显示,相较于损伤模型组,IMP高剂量给药预处理组原代肝细胞内ROS水平均较模型组明显降低（P<0.05）,同时细胞线粒体膜通透性改变所致跨膜电位（Δ Ψm）的耗散明显改善;显示IMP可以显着抑制APAP诱导氧化应激所导致的肝细胞抗氧化防御系统失衡及线粒体功能紊乱。3.IMP给药预处理抑制APAP诱导C57BL/6小鼠肝损伤所致的肝细胞凋亡Western blot结果显示与APAP损伤模型组相比,IMP给药预处理小鼠肝组织JNK磷酸化表达水平降低,Bcl2/Bax蛋白相对表达水平显着高于模型组（P<0.05）;IMP高、低剂量预处理组TUNEL荧光染色标记凋亡细胞减小。体外原代肝细胞实验结果显示,IMP预处理组肝细胞存活率明显高于模型组（P<0.01）、线粒体跨膜电位（ΔΨm）升高,Bcl2/Bax mRNA相对转录水平显着高于模型组（P<0.05）,显示IMP可抑制APAP引起的肝细胞线粒体途径凋亡。4.IMP给药预处理能够抑制APAP诱导肝损伤有关炎症因子的表达IMP高剂量给药预处理组小鼠血清中TNF-α、IL-1 β、IL-6水平及肝组织和原代肝细胞中TNF-α、IL-1 β、IL-6、COX-2 mRNA转录水平明显低于模型组（P<0.05）;同时 LC-MS/MS 测定小鼠肝组织中 PGE2、LTB4、TXB2 和 20-HETE 表达相比于模型组明显降低（P<0.05）,结果提示IMP给药预处理可以抑制APAP诱导肝损伤所致的炎症反应。体内外实验结果提示,过量APAP诱发小鼠严重的肝损伤并伴随明显的氧化应激、线粒体功能损伤及肝细胞凋亡和炎症反应。而IMP预处理可以有效保护APAP引起的肝损伤,作用机制与改善氧化应激损伤所致的ROS-JNK激活和线粒体功能损伤及抑制肝细胞凋亡和炎症反应相关。5.FXR（Nr1h4）-/-敲除小鼠及基因敲除FXR-/-肝细胞验证IMP保护APAP肝损伤的分子作用机制FXR基因敲除后,IMP及OCA阳性激动剂预处理组小鼠血清ALT及AST水平、GSH/GSSG比率、MDA水平,肝组织Tunel标记阳性凋亡细胞,肝组织病理坏死面积均与模型组无明显差异（P>0.05）;同时FXR-/-小鼠肝组织Nrf2及Bcl2/Bax蛋白相对表达水平及肝组织SOD2及Nrf2 mRNA转录水平抑制无明显改善（P>0.05）;小动物活体成像肝组织ROS结果显示FXR敲除后,IMP给药预处理失去对小鼠肝脏ROS升高的抑制作用;FXR-/-小鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6水平及肝组织和原代肝细胞中TNF-α、IL-1 β、IL-6、COX-2 mRNA转录水平,肝组织中花生四烯酸代谢物类炎症介质表达水平与损伤模型组相比无显着变化（P>0.05）。IMP/OCA给药预处理对于FXR-/-原代肝细胞存活率、细胞内ROS水平、线粒体跨膜电位（Δ Ψm）及SOD2和Nrf2 mRNA转录水平,与模型组相比无明显改善（p>0.05）。上述结果均表明IMP通过FXR通路激活依赖性地发挥肝保护作用。6.欧前胡素长循环脂质体表征和药代动力学实验结果欧前胡素脂质体平均粒径为:125.30±0.95 nm,Zeta电位为:-24.64±0.67 mv;聚合物分散性指数（PDI）为:0.25±0.04;包封率（EE,%）为:6.27±0.77;装载效率（LE,%）为:41.06±5.41。表明欧前胡素脂质体粒径较小且分布均匀（PDI<0.30）,包封率及装载率符合脂质体载药要求。大鼠药代动力学结果显示,相较欧前胡素游离药物,欧前胡素长循环脂质体药时曲线下面积（AUC）、一阶矩曲线下面积（AUMC）、体内循环时间及血浆药物峰值浓度(Cmax均显着提升（P<0.01）,血浆总清除率(CLz显着降低（P<0.01）。同时药物体内平均滞留时间（MRT）及末端消除半衰期t1/2z也有所增加,显示出欧前胡素长循环脂质体较好的生物利用度和药效作用时间。体外释放实验证实欧前胡素长循环脂质体较好的药物缓释作用,红细胞体外溶血实验结果表明脂质体未发生溶血现象。结果提示:欧前胡素脂质体有较好的体内代谢稳定性及缓释作用且具有初步的制剂安全性。结论:1.IMP对APAP诱导急性肝损伤具有预防性保护作用。2.IMP损伤保护机制与抗氧化应激反应、抗细胞凋亡及抑制炎症相关因子表达有关。3.IMP通过FXR核受体激活依赖性地发挥对APAP诱导肝损伤的保护作用。4.欧前胡素长循环脂质体（IMP-PEG-LPs）可以有效提高欧前胡素在大鼠体内生物利用度和延长药物体内作用时间。
徐安恬[10]（2020）在《纯钛种植体掺锶微纳米表面调节巨噬细胞极化影响骨整合的研究》文中研究说明口腔种植修复是目前牙列缺失和牙列缺损的重要修复方式。然而种植体植入骨内后需要等待3-6个月的骨愈合期才能进入到植体上部分的修复阶段。临床治疗周期过长给患者带来了众多不便;另外仍存在种植体与骨之间结合不良导致种植失败的病例。因此,促进种植体骨界面骨整合是口腔种植材料研究的重要目标。以往的研究主要关注与骨形成有直接关系的成骨细胞谱系,以优化植体特性促进骨细胞成骨或诱导间充质干细胞的成骨分化为主要策略。随着对植体植入后反应的深入研究,免疫反应在骨整合中的作用日益受到重视。在所有免疫细胞中,巨噬细胞由于其高度的可塑性发挥着关键作用,其可根据微环境呈现不同的极化状态,以经典激活M1型巨噬细胞和替代性激活M2型巨噬细胞作为极化状态的两端。巨噬细胞的极化状态直接参与和影响了种植体骨整合过程。因此,有必要进一步了解种植体表面改性对于巨噬细胞极化的影响。锶由于其促进成骨同时抑制破骨的性能而广泛应用于成骨生物材料的修饰中。本研究通过喷砂、双重酸蚀结合水热合成法制备了纯钛掺锶微纳米表面,以巨噬细胞为研究对象,深入研究纯钛掺锶微纳米表面对巨噬细胞极化及功能的影响,为从免疫细胞的角度来优化植体材料表面设计提供一定的理论和实验依据。第一部分纯钛掺锶微纳米表面的制备与表征目的:制备纯钛掺锶微纳米形貌表面并进行表征,为后续的体外和体内的生物学评价提供研究模型。方法:1.将纯钛表面进行打磨、抛光、大颗粒喷砂以及双重酸蚀,形成粗糙微米级钛表面（SLA）;在SLA基础上,使用氢氧化锶溶液水热反应制备纯钛掺锶微纳米表面（Sr-SLA）。2.通过扫描电镜（scanning electron microscope,SEM）、能谱分析仪（energy dispersive spectrometer,EDS）、X射线衍射仪（X-ray diffractometer,XRD）以及X射线光电子能谱（X-ray photoelectron spectroscopy,XPS）表征样品表面形貌以及化学元素组成。3.通过粗糙度测试和接触角检测评估样品表面粗糙度以及亲水性能。4.通过电感耦合等离子体质谱法（Inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS）检测锶离子的释放。结果:1.SLA表面呈现微米级蜂窝状多孔结构,Sr-SLA表面在此基础上增添了均匀致密的纳米颗粒,呈现微纳米形貌表面。2.Sr-SLA表面锶元素以钛酸锶的形成掺入钛表面。3.SLA表面和Sr-SLA表面具有相似的粗糙度,且皆为超亲水表面。4.Sr-SLA表面可持续向溶液中释放锶离子。结论:1.喷砂酸蚀钛表面通过水热反应掺入锶元素后可形成超亲水纯钛掺锶微纳米表面。第二部分纯钛掺锶微纳米表面对巨噬细胞生物学行为和极化的影响目的:评估SLA表面以及Sr-SLA表面对于RAW264.7生物学行为以及极化状态的影响。方法:1.通过免疫荧光和SEM观察RAW264.7在不同钛片表面的粘附以及细胞形态,通过CCK8增殖实验评价细胞增殖活性。2.评估不同表面作用下RAW264.7的极化状态:采用流式细胞术检测RAW264.7细胞膜表面M1型（CD11c）极化和M2型（CD163）极化表面标记分子的表达;通过实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,q PCR）检测RAW264.7炎症相关基因（IL-6、IL-1β、TNF-α、i NOS、IL-10、CCL2、CCL5）以及成骨相关基因（TGF-β、BMP-2、VEGFa、PDGF）的表达水平;通过小鼠细胞因子阵列检测RAW264.7的炎性因子分泌水平;通过ELISA方法检测成骨相关因子（VEGFa、PDGF）的分泌水平以及免疫印迹试验（western blot）检测BMP-2的表达水平。3.通过western blot检测不同表面作用下RAW264.7细胞内MAPK通路蛋白的表达水平。结果:1.SLA表面和Sr-SLA表面对于RAW264.7的增殖无明显差异;同SLA表面相比,Sr-SLA表面RAW264.7的细胞伪足更丰富。2.同SLA表面相比,Sr-SLA表面可抑制巨噬细胞向M1型极化并促进向M2型极化。具体表现为流式结果显示Sr-SLA表面上调了M2型（CD163）极化表面标记物的表达并下调了M1型（CD11c）极化表面标记物的表达;在基因水平上,Sr-SLA表面显着降低了RAW264.7促炎相关基因（IL-6、IL-1β、i NOS、TNF-α、CCL2、CCL5）的表达,并上调抗炎基因IL-10的表达;上调了促成骨相关基因BMP-2的表达;在蛋白水平上,Sr-SLA表面显着降低了RAW264.7炎性因子（TNF-α、CCL2、CCL5）的分泌水平,并上调了BMP-2蛋白的表达。3.western blot结果显示Sr-SLA表面促进RAW264.7细胞内ERK1/2蛋白的表达。结论:1.与SLA表面相比,Sr-SLA表面在体外具有抑制巨噬细胞向M1型极化,并促进巨噬细胞向M2极化的作用。2.ERK信号通路与Sr-SLA表面调节巨噬细胞极化的作用相关。第三部分纯钛掺锶微纳米表面通过调节巨噬细胞极化促进骨整合的体内/外研究目的:检测不同表面作用下的巨噬细胞分泌产物对于骨髓间充质干细胞（bone marrow derived mesenchymal strom cells,BMSCs）的作用,并评估SLA和Sr-SLA表面种植体植入骨内后对巨噬细胞极化状态以及骨整合的影响。方法:1.体外研究建立条件培养基共培养模型,根据条件培养基的不同分为DMEM组、Pure SLA组、Pure Sr-SLA组、SLA+RAW264.7组和Sr-SLA+RAW264.7组。检测各组别下BMSCs的碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）的活性以及成骨相关基因（ALP、TGF-β、BMP-2、RUNX2、Col-1）的表达。2.体内研究,于大鼠左右胫骨近干骺端植入SLA和Sr-SLA表面种植体,于术后1、3、7和14天取样。通过免疫组化染色分别标记CCR7阳性细胞（M1型巨噬细胞表面标记物）和CD163阳性细胞（M2型巨噬细胞表面标记物）,观察种植体周围巨噬细胞的分型以及分布情况并且进行半定量分析。3.通过Masson染色以及形态学分析,评估种植体与周围骨组织结合情况。结果:1.体外条件培养基共培养下,各组ALP活性:SLA+RAW264.7组<Pure SLA组（p<0.05）,Sr-SLA+RAW264.7组<Pure Sr-SLA组（p<0.05）,Pure SLA组<Pure Sr-SLA组（p<0.05）,SLA+RAW264.7组<Sr-SLA+RAW264.7组（p<0.05）。2.体外条件培养基共培养下,SLA+RAW264.7组在成骨相关基因（ALP、TGF-β、RUNX2、Col-1）的表达上最低。3.体内,SLA表面和Sr-SLA表面种植体周围均可观察到M1型和M2型巨噬细胞分布,随着组织愈合,M1型巨噬细胞的数量逐渐减少,而M2型巨噬细胞数量在后期有所回升。与SLA表面种植体相比,在体内植入早期（术后1天）,Sr-SLA植体周围M1型巨噬细胞的浸润水平明显较低。随着组织愈合（术后3天和7天）,Sr-SLA植体周围M2型巨噬细胞的浸润水平显着较高于SLA表面种植体。4.Masson染色分析显示植入后14天,Sr-SLA种植体周围的骨面积明显高于SLA种植体组。结论:1.相对于SLA表面,Sr-SLA表面有利于通过调节巨噬细胞的功能从而促进BMSCs的成骨分化。2.相比较于SLA表面植体,Sr-SLA表面植体植入骨内后减少愈合过程中早期局部组织内M1型巨噬细胞的浸润并提高了后期M2型巨噬细胞。3.相比较于SLA表面植体,Sr-SLA表面植体促进了植体周围骨界面骨整合。
二、Integration of TNF-α signaling: crosstalk between caspasesl,IKK and JNK（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、Integration of TNF-α signaling: crosstalk between caspasesl,IKK and JNK（论文提纲范文）
（1）Molecular pathways in viral hepatitis-associated liver carcinogenesis: An update（论文提纲范文）
| INTRODUCTION |
| GENERAL FEATURES OF THE VIRUSES |
| HBV |
| HCV |
| HBV-RELATED CARCINOGENESIS |
| HBV DNA integration in host chromosomes |
| HBV induced epigenetic dysregulation |
| Genetic variations in HBV |
| The role of HBx protein in HCC |
| HBV and cellular signaling pathways in hepatocarcinogenesis |
| ROLE OF HCV IN HEPATOCARCINOGENESIS |
| HCV-induced epigenetic dysregulation |
| HCV and cellular signaling pathways in hepatocarcinogenesis |
| ROLE OF HBV AND HCV IN INFLAMMATION AND CARCINOGENESIS |
| Inflammasome |
| NF-κB and STAT3 signaling in inflammation-related oncogenesis |
| Immune escape |
| AUTOPHAGY IN HBV AND HCV RELATED HCC |
| MICROBIOTA IN HBV AND HCV RELATED HCC |
| CONCLUSION |
（2）檀香籽油对肥胖大鼠胰岛素抵抗的调节作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 第一章 檀香籽油对高脂高糖诱导胰岛素抵抗大鼠糖脂代谢的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 第二章 檀香籽油对大鼠 PI3K/AKT 胰岛素信号通路和 JNK/NF-κB炎症信号通路的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 第三章 檀香籽油对大鼠肠道微生物多样性的影响 |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 檀香籽油的研究进展以及胰岛素抵抗相关机制研究 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录 缩略词对照表 |
| 致谢 |
（3）青蒿琥酯通过ERS-UPR信号通路调控溃疡性结肠炎的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 第一章 溃疡性结肠炎概述 |
| 1 溃疡性结肠炎的病因和发病机制 |
| 1.1 遗传易感性 |
| 1.2 肠道微生物因素 |
| 1.3 环境因素 |
| 1.4 肠道屏障因素 |
| 1.5 肠道免疫因素 |
| 2 炎症信号通路与UC |
| 2.1 MAPK信号通路 |
| 2.2 JAK/STAT信号通路 |
| 2.3 NF-κB信号通路 |
| 3 UC的治疗方案 |
| 3.1 轻度至中度UC的治疗 |
| 3.2 重度UC的治疗 |
| 第二章 内质网应激信号通路与其在UC中的研究进展 |
| 1 ERS信号通路简述 |
| 1.1 IRE1α-XBP1信号通路 |
| 1.2 PERK-eIF2α-ATF4信号通路 |
| 1.3 ATF6信号通路 |
| 2 ERS信号通路在UC中的研究进展 |
| 2.1 ERS对UC黏膜屏障的调控 |
| 2.2 ERS对UC肠道炎症通路的调控 |
| 2.3 RES对UC肠道免疫细胞的调控 |
| 第三章 青蒿素类药物的研究进展 |
| 1 青蒿素类药物的抗菌作用 |
| 2 青蒿素类药物抗病毒作用 |
| 3 青蒿素类药物的抗肿瘤作用 |
| 4 青蒿素类药物对免疫和炎症调节作用 |
| 5 青蒿素类药物对UC的治疗作用 |
| 本研究的目的与意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 试验部分 |
| 第一章 青蒿琥酯对DSS诱导小鼠UC的预防保护作用 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要溶剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物分组与处理 |
| 2.2 小鼠疾病活动指数(DAI) |
| 2.3 结肠组织病理学观察 |
| 2.4 结肠组织超微结构观察 |
| 2.5 免疫荧光检测结肠组织相关蛋白 |
| 2.6 RT-qPCR检测结肠细胞因子的基因表达 |
| 2.7 Western blot检测相关蛋白的表达 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ARS减轻了UC小鼠的症状 |
| 3.2 ARS改善了UC小鼠结肠的病理损伤 |
| 3.3 ARS保护了UC小鼠结肠黏膜层的完整性 |
| 3.4 ARS保护了UC小鼠的结肠粘蛋白 |
| 3.5 ARS保护了UC小鼠结肠的紧密连接 |
| 3.6 ARS抑制了结肠细胞凋亡 |
| 3.7 ARS调控炎性因子基因表达并抑制NF-κB通路的激活 |
| 4. 讨论 |
| 5 参考文献 |
| 第二章 青蒿琥酯对结肠组织ERS信号通路的抑制作用研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要溶剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物分组与处理 |
| 2.2 小鼠疾病活动指数(DAI) |
| 2.3 结肠组织病理学观察 |
| 2.4 RT-qPCR检测结肠细胞因子的基因表达 |
| 2.5 ELISA法检测细胞因子蛋白表达 |
| 2.6 Western blot检测相关蛋白的表达 |
| 2.7 免疫组化与免疫荧光检测结肠组织相关蛋白 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ARS对DSS诱导结肠组织中ERS的影响 |
| 3.2 ARS选择性地抑制了结肠组织中UPR感应信号通路的激活 |
| 3.3 4-PBA和2-DG对ERS的调控作用 |
| 3.4 4-PBA和2-DG对ERS途径细胞凋亡的调控作用 |
| 3.5 ARS对ERS的抑制作用缓解了结肠炎小鼠的临床和组织学症状 |
| 3.6 ERS参与了ARS对细胞因子和NF-κB的调控 |
| 3.7 ERS参与了ARS对小鼠肠道屏障完整性的保护作用 |
| 4 讨论 |
| 5 参考文献 |
| 第三章 青蒿琥酯对肠上皮细胞ERS的抑制作用研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 细胞 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要溶剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 细胞培养与处理 |
| 2.2 CCK-8检测细胞活力 |
| 2.3 SiRNA转染 |
| 2.4 Western blot检测相关蛋白的表达 |
| 2.5 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 药物对细胞活力的影响 |
| 3.2 Tm诱导IEC-6细胞发生ERS |
| 3.3 Tm对NF-κB信号通路和Claudin-1蛋白的影响 |
| 3.4 ARS缓解了Tm诱导的ERS |
| 3.5 ARS对Tm刺激效应的调控作用 |
| 3.6 SiRNA knockdown对UPR感应信号通路的影响 |
| 3.7 UPR感应信号通路对NF-κB和Claudin-1的调控作用 |
| 4 讨论 |
| 5 参考文献 |
| 第四章 青蒿琥酯在结肠炎治疗中的免疫调控作用 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要溶剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物分组与处理 |
| 2.2 小鼠疾病活动指数(DAI) |
| 2.3 结肠组织病理学观察 |
| 2.4 流式细胞术检测免疫细胞 |
| 2.5 RT-qPCR检测结肠细胞因子的基因表达 |
| 2.6 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ARS治疗对UC小鼠症状的缓解作用 |
| 3.2 ARS对Th17细胞的调控作用 |
| 3.3 ARS对Treg细胞的调控作用 |
| 3.4 ARS对结肠组织中巨噬细胞极化的调控作用 |
| 4 讨论 |
| 5 参考文献 |
| 第五章 青蒿琥酯通过抑制ERS调控肠道免疫 |
| 1 材料 |
| 1.1 试验动物 |
| 1.2 主要仪器 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 主要溶剂的配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物分组与处理 |
| 2.2 小鼠疾病活动数(DAI) |
| 2.3 结肠组织病理学观察 |
| 2.4 流式细胞术检测免疫细胞 |
| 2.5 RT-qPCR检测结肠细胞因子的基因表达 |
| 2.6 Western blot检测相关蛋白的表达 |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 ARS抑制ERS可缓解DSS诱导的UC症状和病变 |
| 3.2 ERS参与ARS对Th17细胞的调控 |
| 3.3 ERS参与ARS对Treg细胞的调控 |
| 3.4 ERS参与ARS对巨噬细胞极化的调控 |
| 4 讨论 |
| 5 参考文献 |
| 全文总结 |
| 攻读博土学位期间发表论文 |
| 致谢 |
（4）内质网应激在中耳炎发病机制中的作用研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文词汇对照表 |
| 前言 |
| 一. 中耳炎研究背景 |
| 二. 中耳炎的发病机制及治疗现状 |
| 三. 中耳炎动物模型研究基础及现状 |
| 四. 内质网应激研究背景 |
| 五. 内质网应激与炎症 |
| 六. 内质网应激与中耳炎 |
| 实验材料与仪器设备 |
| 1、实验材料 |
| 2、主要试剂材料及仪器 |
| 3、主要试剂溶液配制 |
| 实验方法 |
| 1、动物分组及实验前期处理 |
| 2、中耳取材 |
| 3、小鼠中耳粘膜上皮细胞的剥离 |
| 4、组织学方法:HE染色 |
| 5、免疫组化染色 |
| 6、听性脑干反应ABR测试 |
| 7、畸变产物耳声发射DPOAE测定 |
| 8、耳镜观察 |
| 9、鼓室计测量 |
| 10、细胞凋亡原位检测 |
| 11、氧自由基检测CellROX Green Reagent kit (Invitrogen,10444) |
| 12、RNA提取 |
| 13 、反转录 |
| 14、实时定量PCR |
| 15、琼脂糖凝胶电泳 |
| 16、Western blot |
| 17、统计分析 |
| 实验结果 |
| 第一章 PGPS诱导的C57BL/6J小鼠中耳炎模型的炎症反应 |
| 1. 前言 |
| 2. 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 第二章 探讨内质网应激与中耳炎的关系 |
| 1、前言 |
| 2、实验结果 |
| 3、讨论 |
| 第三章 内质网应激抑制剂TUDCA对中耳炎的炎症保护作用 |
| 1.前言 |
| 2.果 |
| 3、讨论 |
| 第四章 探讨内质网应激在OM炎症中的主导作用—自噬、氧化应激与中耳炎的作用关系 |
| 1、前言 |
| 2、实验结果 |
| 3、讨论 |
| 总结与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 内质网应激在炎症机制中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文附文 |
（5）E3泛素连接酶在Wnt与NF-κB通路中的调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 综述 |
| 1.1 泛素化 |
| 1.2 E3泛素连接酶CHIP与Wnt通路 |
| 1.2.1 CHIP蛋白 |
| 1.2.2 SCAR16疾病 |
| 1.2.3 Wnt信号通路 |
| 1.3 E3泛素连接酶TRIM25与NF-κB通路 |
| 1.3.1 TRIM家族 |
| 1.3.2 NF-κB通路 |
| 1.3.3 TRIM家族蛋白对NF-κB信号通路的调控 |
| 第二章 E3泛素连接酶CHIP在Wnt通路中的调控作用研究 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 质粒和构建重组质粒的相关试剂和材料 |
| 2.2.2 蛋白表达和纯化的相关试剂和材料 |
| 2.2.3 蛋白质芯片的相关试剂和材料 |
| 2.2.4 细胞和培养细胞的相关试剂和材料 |
| 2.2.5 免疫印迹与免疫共沉淀的相关试剂和材料 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR的相关试剂和材料 |
| 2.2.7 常用仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 分子克隆 |
| 2.3.2 蛋白的表达和纯化 |
| 2.3.3 蛋白质芯片实验 |
| 2.3.4 细胞培养和细胞转染实验 |
| 2.3.5 Wnt3a条件培养基的制备 |
| 2.3.6 CHIP蛋白敲除细胞株的建立 |
| 2.3.7 荧光检测实验 |
| 2.3.8 MTT和细胞迁移实验 |
| 2.3.9 免疫印迹 |
| 2.3.10 核质分离实验 |
| 2.3.11 免疫共沉淀 |
| 2.3.12 实时荧光定量PCR |
| 2.3.13 数据统计 |
| 2.4 实验结果与分析 |
| 2.4.1 CHIP蛋白的保守性分析 |
| 2.4.2 蛋白质芯片筛选CHIP影响的信号通路 |
| 2.4.3 CHIP促进Wnt通路的激活 |
| 2.4.4 CHIP促进β-catenin的核累积 |
| 2.4.5 CHIP与LEF1具有相互作用 |
| 2.4.6 CHIP促进LEF1的K63泛素化 |
| 2.4.7 CHIP促进LEF1与β-catenin的相互作用 |
| 2.4.8 敲除CHIP抑制细胞的增殖与迁移 |
| 2.5 讨论 |
| 第三章 E3泛素连接酶TRIM25在TNFα诱导的NF-κB通路中的调控作用研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 质粒和构建重组质粒的相关试剂和材料 |
| 3.2.2 细胞和培养细胞的相关试剂和材料 |
| 3.2.3 双荧光素酶报告实验的相关试剂和材料 |
| 3.2.4 免疫印迹与免疫共沉淀的相关试剂和材料 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR的相关试剂和材料 |
| 3.2.6 常用仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 转录组数据集分析 |
| 3.3.2 分子克隆 |
| 3.3.3 细胞培养和细胞转染实验 |
| 3.3.4 双荧光素酶报告基因实验 |
| 3.3.5 免疫印迹 |
| 3.3.6 免疫共沉淀 |
| 3.3.7 实时荧光定量PCR |
| 3.3.8 数据统计 |
| 3.4 实验结果与分析 |
| 3.4.1 转录组数据分析发现TRIM25参与NF-κB通路的调控 |
| 3.4.2 TRIM25是TNFα诱导的NF-κB通路的激活分子 |
| 3.4.3 干扰TRIM25抑制TNFα诱导的NF-κB通路的激活 |
| 3.4.4 TRIM25在TRAF2-TRAF5复合体水平增强NF-κB通路的激活 |
| 3.4.5 TRIM25与TRAF2具有相互作用 |
| 3.4.6 TRIM25增强TRAF2的K63泛素化 |
| 3.4.7 TRIM25促进TRAF2-TAK1和TRAF2-IKKβ复合体的相互作用 |
| 3.5 讨论 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（6）TAM家族受体MerTK和GAS6通过SOCS/TRAF6/Mal途径抑制乳腺炎中的TLRs通路（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| CHAPTER1 Review of Literature |
| 1.1 Mastitis in Dairy Cow |
| 1.1.1 General Mammary Gland Structure |
| 1.1.1.1 Anatomy of Mammary Gland |
| 1.1.1.2 Histology of Mammary Gland |
| 1.1.2 Inflammation |
| 1.1.3 Mastitis Description in Dairy Cows |
| 1.1.3.1 Hazard of Mastitis |
| 1.1.3.2 Etiology of Mastitis |
| 1.1.3.3 Histopathological Characteristics of Mastitis |
| 1.1.3.4 Prevention and Treatment of Mastitis in Dairy Cows |
| 1.2 Pathogenesis of Mastitis |
| 1.1.2 Progression of Infection |
| 1.3 Staphlococcus aureus |
| 1.3.1 Epidemiology of Staphlococcus aureus |
| 1.3.2 Microscopic Morphology of Staphlococcus aureus |
| 1.3.3 Staphlococcus aureus Pathogenesis in Mammaery Gland |
| 1.3.4 Staphlococcus aureus Elicit Host Immne Response in Mammary Gland |
| 1.4 Characteristic of TAM Family |
| 1.4.1MerTK |
| 1.4.2Axl |
| 1.4.3Tyro3 |
| 1.4.4Gas6 |
| 1.4.5 Protein S |
| 1.4.6 TAM Receptor Kinases Functions |
| 1.5 Role of Toll–like Receptors |
| 1.5.1 Toll–like Receptors Related Inflammatory Cytokines |
| 1.5.2 Toll–like Receptors Related Signaling Pathways |
| 1.6 Scientific Idea and Research Object |
| 1.7 Research Significance |
| CHAPTER2 The Histological Diagnosis and Detection of Relative Inflammatory Cytokines and TAM Receptor Kinases Genes Up-regulation during Cow Mastitis |
| 2.1 Introduction |
| 2.2 Materials and Methods |
| 2.2.1 Reagents |
| 2.2.2 Collection of Samples |
| 2.2.3 Hematoxylin and Eosin |
| 2.2.4 Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction |
| 2.2.5 Statistical Analysis |
| 2.3 Results |
| 2.3.1 Histopathology of Mammary Gland Tissues |
| 2.3.2 Pro-Inflammatory Changes in Mammary Tissues |
| 2.3.3 Tissue m RNA Levels of Mer TK,Axl,Tyro3,Gas6,Pro S and SOCS |
| 2.4 Discussion |
| 2.5 Conclusion |
| CHAPTER3 The Molecular Mechanism of Mer-tyrosine Kinase Attenuating Macrophage Inflammation Induced by Staphylococcus aureus |
| 3.1 Introduction |
| 3.2 Materials and Methods |
| 3.2.1 Reagents |
| 3.2.2 Cell Culture |
| 3.2.3 Mer TK-si RNA Transfection in RAW264. |
| 3.2.4 MTT Assay |
| 3.2.5 Enzyme-linked Immunosobant Assay(ELISA) |
| 3.2.6 Western Blot Analysis |
| 3.2.7 Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction |
| 3.2.8 Statistical Analysis |
| 3.3 Results |
| 3.3.1 Effect OF Mer TK-si RNA on RAW264.7 Viability |
| 3.3.2 Effects of S.aureus on Pro-inflammatory Cytokines Production in Cells |
| 3.3.3 S.aureus Induced MAP KINASES and NF-ΚB Pathways in RAW264.7.. |
| 3.3.4 Mer TK Up-regulates SOCS1 and SOCS3 Expression in RAW264.7 |
| 3.4 Discussion |
| 3.5 Conclusion |
| CHAPTER4 Mer TK Negatively Regulates Staphylococcus aureus-induced Inflammatory Response via Toll-like Receptor Signalling in the Mammary Gland |
| 4.1 Introduction |
| 4.2 Materials and Methods |
| 4.2.1 Reagents |
| 4.2.2 Animals |
| 4.2.3 Histological Analysis |
| 4.2.4 Myeloperoxidase(MPO) |
| 4.2.5 Cell Culture |
| 4.2.6 Enzyme-linked Immunosobant Assay(ELISA) |
| 4.2.7 Quantitative Real-time Polymerase Chain Reaction(q RT-PCR) |
| 4.2.8 Western Blot Analysis |
| 4.2.9 Statistical Analysis |
| 4.3 Results |
| 4.3.1 S.aureus-induced Inflammation in Mammary Tissues |
| 4.3.2 S.aureus Induces TLR2& TLR6 Activated MAPKS and NF-ΚB Signalling Pathways in Mammary Tissues |
| 4.3.3 Mer TK Activation Elevates SOCS Expression in S.aureus Induced Mammary Tissues |
| 4.3.4 Mammary Epithelial Cells Culture And Identification |
| 4.3.5 S.aureus Activates Multiple Signaling Pathways in Mammary Epithelial Cells |
| 4.3.6 Mer TK Expression Suppress TLR2 and TLR6 Activation Through SOCS1& SOCS3 in Mammary Epithelial Cells |
| 4.3.7 S.aureus Effect on Pro-Inflammatory Cytokines Production in Mammary Epithelial Cells |
| 4.3.8 S.aureus-induced Inflammatory Changes in Mer TK-/-Mice Mammary Tissues |
| 4.3.9 S.aureus in Mammary Tissues Induced Multiple Signalling Pathways |
| 4.3.10 Mer TK and SOCS Inhibitory Effect on the TLR through TRAF6 in Mammary Tissues |
| 4.4 Discussion |
| 4.5 Conclusion |
| CHAPTER5 Gas6 Negatively Regulate Staphylococcus aureus-induced Inflammatory Response via TLR Signaling in Mouse Mammary Gland |
| 5.1 Introduction |
| 5.2 Materials and Methods |
| 5.2.1 Reagents |
| 5.2.2 Animals |
| 5.2.3 Hematoxylin and Eosin(H&E) |
| 5.2.4 Cell Culture |
| 5.2.5 MTT Assay |
| 5.2.6 Western Blot Analysis |
| 5.2.7 Quantitative-real Time Polymerase Chain Reaction(QRT-PCR) |
| 5.2.8 Immunoflouresence Assay |
| 5.2.9 Statistical Analysis |
| 5.3 Results |
| 5.3.1 S.aureus Activates TLR2 and TLR6,Leading to MAPK and NF-ΚB Pathway Activation in Mammary Tissues |
| 5.3.2 S.aureus Induced Gas6 Expression in Mammary Tissues |
| 5.3.3 Gas6 is Integral for S.aureus-induced TAM Receptor Activation in Mammary Tissues |
| 5.3.4 Gas6 is Required to Attenuate S.aureus-induced Inflammation in Mammary Epithelial Cells |
| 5.3.5 Gas6 is Required To Attenuate S.aureus Induced Inflammatory Effect in Mammary Epithelial Cells |
| 5.3.6 Gas6 is Required to Resolve S.aureus Induces Inflammation in Mammary Tissue and Epithelial Cells |
| 5.4 Discussion |
| 5.5 Conclusion |
| CHAPTER6 Conclusion and Future Prospectus |
| 6.1 Conclusion |
| 6.2 Novelty |
| 6.3 Future Prospectus |
| REFERENCES |
| Publications |
| ACKNOWLEDGEMENTS |
（7）医用可降解Mg-Nd-Zn-Zr合金与巨噬细胞的相互作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 符号说明 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 植入型生物材料的发展现状 |
| 1.2 可降解镁合金材料的研究现状 |
| 1.3 异物反应 |
| 1.3.1 异物反应过程和分子机制 |
| 1.3.2 巨噬细胞在异物反应中的作用 |
| 1.4 可降解镁合金材料和巨噬细胞相互作用的研究现状 |
| 1.4.1 可降解镁合金对巨噬细胞生物学效应 |
| 1.4.2 巨噬细胞对可降解镁合金的作用 |
| 1.5 选题意义和主要研究内容 |
| 第二章 JDBM镁合金对单核细胞和巨噬细胞的生物适应性研究 |
| 2.1 背景介绍 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.2.1 JDBM镁合金制备 |
| 2.2.2 JDBM浸提液(Extract)制备 |
| 2.2.3 浸提液离子浓度测定 |
| 2.2.4 浸提液p H值测定 |
| 2.2.5 浸提液渗透压测定 |
| 2.2.6 细胞培养、细胞分化和细胞处理 |
| 2.2.7 细胞形态观察 |
| 2.2.8 细胞毒性观察 |
| 2.2.9 细胞周期检测 |
| 2.2.10 细胞凋亡及坏死测定 |
| 2.2.11 细胞划痕实验 |
| 2.2.12 细胞吞噬检测 |
| 2.2.13 细胞分化检测 |
| 2.2.14 酶联免疫吸附法(ELISA) |
| 2.2.15 实时荧光定量PCR(q PCR)分析 |
| 2.2.16 统计学分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 JDBM浸提液对THP-1 细胞和其来源巨噬细胞的细胞毒性及细胞形态作用 |
| 2.3.2 JDBM浸提液对THP-1 细胞和巨噬细胞的凋亡和坏死影响 |
| 2.3.3 JDBM浸提液对THP-1 细胞的细胞周期影响 |
| 2.3.4 JDBM浸提液对THP-1 细胞分化成巨噬细胞的影响 |
| 2.3.5 JDBM浸提液对THP-1 来源巨噬细胞吞噬功能和迁移功能影响 |
| 2.3.6 JDBM浸提液调控THP-1 来源的巨噬细胞炎症反应 |
| 2.3.7 高浓度MgCl_2或高碱性环境对THP-1 细胞和其来源巨噬细胞的毒性作用 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 JDBM镁合金通过调节TRPM-7-PI3K-AKT1 信号轴抑制LPS诱导的巨噬细胞炎症反应 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 JDBM浸提液和MgCl_2溶液制备 |
| 3.2.2 细胞培养和处理 |
| 3.2.3 生物扫描电镜(SEM)分析 |
| 3.2.4 RT-q PCR分析 |
| 3.2.5 ELISA分析 |
| 3.2.6 蛋白质免疫印迹(WB)分析 |
| 3.2.7 细胞免疫荧光测试 |
| 3.2.8 小干扰RNA(si RNA)转染实验 |
| 3.2.9 活性氧(ROS)检测试验 |
| 3.2.10 统计学 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 JDBM及其浸提液和氯化镁可抑制LPS诱导的THP-1 来源巨噬细胞炎症反应 |
| 3.3.2 JDBM及其浸提液和氯化镁溶液对THP-1 来源巨噬细胞的生物相容性评估 |
| 3.3.3 JDBM镁合金中镁离子对LPS活化的THP-1 来源巨噬细胞的抗炎作用 |
| 3.3.4 JDBM浸提液和氯化镁溶液通过TLR-4 通路调节LPS诱导的炎症反应 |
| 3.3.5 JDBM浸提液和氯化镁对LPS激活NF-κB及 MAPK信号通路的影响 |
| 3.3.6 浸提液和氯化镁可以抑制LPS诱导的 THP-1 来源巨噬细胞的 ROS表达 |
| 3.3.7 TRPM7在JDBM浸提液和氯化镁的抗炎效应的作用 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 第四章 JDBM镁合金通过免疫调节巨噬细胞间接影响血管平滑肌细胞功能 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.2.1 JDBM浸提液(extract)和MgCl_2溶液制备 |
| 4.2.2 细胞培养和处理 |
| 4.2.3 巨噬细胞和血管平滑肌细胞毒性、增殖及凋亡检测 |
| 4.2.4 VSMCs细胞周期检测 |
| 4.2.5 血管平滑肌划痕实验和迁移实验检测 |
| 4.2.6 血管平滑肌细胞形态观察 |
| 4.2.7 q PCR检测 |
| 4.2.8 统计学 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 JDBM镁合金浸提液和氯化镁溶液对Raw264.7 细胞的生物相容性研究 |
| 4.3.2 JDBM镁合金浸提液和氯化镁溶液对RAW264.7 巨噬细胞极化及细胞因子分泌的调节作用 |
| 4.3.3 CM对 VSMCs的生物相容性评估 |
| 4.3.4 CM对 VSMCs的细胞增殖和周期的影响 |
| 4.3.5 CM对 VSMCs细胞迁移的影响 |
| 4.3.6 CM对 VSMCs极化的作用 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 本章小结 |
| 第五章 镁合金降解产物颗粒通过异物吞噬途径被巨噬细胞吞噬后的生物学效应 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 JDBM降解产物颗粒(DPs)快速制备 |
| 5.2.2 DPs粒径分析 |
| 5.2.3 细胞培养和处理 |
| 5.2.4 细胞毒性、凋亡和滑丝检测 |
| 5.2.5 细胞溶酶体功能检测 |
| 5.2.6 ROS分析 |
| 5.2.7 巨噬细胞极化分析 |
| 5.2.8 巨噬细胞线粒体膜电位实验 |
| 5.2.9 细胞形态检测 |
| 5.2.10 TEM检测 |
| 5.2.11 WB检测 |
| 5.2.12 RNA-seq分析 |
| 5.2.13 q PCR分析 |
| 5.2.14 统计学 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 DPs的理化特性分析及其生物相容性评估 |
| 5.3.2 DPs被 THP-1 来源巨噬细胞吞噬的途径和其在细胞内的代谢研究 |
| 5.3.3 DPs对 THP-1 来源巨噬细胞的生物学效应 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 本章小结 |
| 第六章 主要结论、创新点和课题展望 |
| 6.1 主要结论 |
| 6.2 创新点 |
| 6.3 课题展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及所获奖励 |
（8）CUL4B在调控TLR介导的炎症反应中的作用及其机制（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一部分CUL4B缺失促进TLR介导的炎症反应 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分CUL4B通过抑制GSK3β活性调控TLR2/3/4介导的免疫应答 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分CUL4B通过抑制Pten转录负调控TLR2/3/4介导的免疫应答 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| Western Blot原始数据 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 综述: TLRs介导的免疫信通路 |
| 参考文献 |
| 英文论文Ⅰ |
| 英文论文Ⅱ |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（9）欧前胡素对APAP诱导急性肝损伤的保护作用机制及其脂质体制备的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 1.1 药物性肝损伤的研究背景 |
| 1.2 对乙酰氨基酚(APAP)诱导的肝损伤的研究背景 |
| 1.3 APAP体内代谢、灭活及肝毒性机制 |
| 1.4 ROS和TNF-α交互作用介导的氧化应激—炎症反应正反馈回路 |
| 1.5 ROS-JNK激活介导APAP诱发急性肝损伤所致肝细胞线粒体功能紊乱和细胞凋亡及坏死 |
| 1.6 FXR结构与功能 |
| 1.6.1 FXR与炎症反应 |
| 1.6.2 SIRT1/FXR/AMPK介导的肝保护作用 |
| 1.7 中药白芷及其提取物欧前胡素的研究现状 |
| 1.7.1 中药白芷概述 |
| 1.7.2 欧前胡素等香豆素类中药成分的研究进展 |
| 第二章 IMP对于APAP诱导急性肝损伤的保护作用及机制研究 |
| 2.1 实验目的 |
| 2.2 材料与仪器 |
| 2.2.1 药物、试剂和材料 |
| 2.2.2 主要实验仪器 |
| 2.3 实验动物 |
| 2.3.1 动物分组、造模与给药 |
| 2.3.2 动物样本采集 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 血清和肝组织液生化指标检测 |
| 2.4.2 小鼠肝脏H&E病理切片 |
| 2.4.3 TUNEL法分析肝组织细胞凋亡 |
| 2.4.4 小鼠原代肝细胞分离 |
| 2.4.5 CCK-8测定细胞存活率 |
| 2.4.6 小鼠原代肝细胞活性氧测定 |
| 2.4.7 JC-1法检测线粒体膜电位ΔΨm(mitochondrial membrane potential) |
| 2.4.8 双荧光素酶报告基因检测 |
| 2.4.9 分子对接实验 |
| 2.4.10 Western Blot蛋白免疫印迹实验 |
| 2.4.11 qRT-PCR实时荧光定量实验 |
| 2.4.12 三重四极杆质谱法(LC-MS/MS)检测小鼠肝脏花生四烯酸代谢物变化 |
| 2.4.13 统计方法 |
| 2.5 实验结果 |
| 2.5.1 IMP对小鼠急性肝损伤的保护作用 |
| 2.5.2 IMP对APAP诱导肝损伤相关抗氧化关键因子表达的影响 |
| 2.5.3 IMP对APAP诱导损伤小鼠肝细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位的影响 |
| 2.5.4 IMP对APAP所致肝损伤诱导活性氧/c-Jun氨基末端激酶激活及肝细胞凋亡的影响 |
| 2.5.5 IMP对APAP诱导肝损伤相关促炎性细胞因子和炎症介质表达的影响 |
| 2.5.6 转录组测序筛选IMP预先给药对于保护APAP诱导肝损伤主要差异表达基因及分析 |
| 2.5.7 欧前胡素激活FXR核受体作用的实验验证 |
| 2.5.8 IMP对于APAP诱导损伤小鼠肝组织中相关药物代谢酶的调控作用 |
| 2.6 讨论 |
| 第三章 IMP通过FXR激活对APAP诱导肝损伤保护作用的分子机制的研究 |
| 3.1 实验目的 |
| 3.2 材料与仪器 |
| 3.2.1 药物、试剂和材料 |
| 3.2.2 主要实验仪器 |
| 3.3 实验动物 |
| 3.3.1 动物分组、造模与给药 |
| 3.3.2 动物样本采集 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 小鼠血清肝损伤生化指标检测 |
| 3.4.2 小鼠肝脏H&E病理切片 |
| 3.4.3 TUNEL法分析肝组织细胞凋亡 |
| 3.4.4 小动物活体荧光成像系统测定小鼠肝脏活性氧水平 |
| 3.4.5 肝脏特异性敲除SIRT1小鼠构建和鉴定 |
| 3.4.6 小鼠原代肝细胞分离与培养 |
| 3.4.7 细胞免疫荧光实验 |
| 3.4.8 CCK-8测定细胞存活率 |
| 3.4.9 小鼠原代肝细胞活性氧测定 |
| 3.4.10 JC-1法检测线粒体膜电位ΔΨm(mitochondrial membrane potential) |
| 3.4.11 Western Blot蛋白免疫印迹实验 |
| 3.4.12 qRT-PCR实时荧光定量实验 |
| 3.4.13 三重四极杆质谱法(LC-MS/MS)检测小鼠肝脏花生四烯酸代谢物变化 |
| 3.4.14 统计方法 |
| 3.5 实验结果 |
| 3.5.1 FXR基因敲除小鼠有效性验证 |
| 3.5.2 IMP对APAP诱导FXR~(-/-)小鼠急性肝损伤失去明显保护作用 |
| 3.5.3 IMP对APAP诱导肝损伤FXR~(-/-)小鼠肝组织及体外原代肝细胞抗氧化因子表达失去调控作用 |
| 3.5.4 IMP对APAP诱导肝损伤FXR~(-/-)小鼠肝细胞内ROS产生及线粒体膜电位损失失去明显保护作用 |
| 3.5.5 IMP对APAP诱导肝损伤FXR~(-/-)小鼠肝细胞凋亡及相关凋亡调控因子表达无明显调节作用 |
| 3.5.6 IMP对APAP诱导FXR~(-/-)小鼠炎症介质表达无明显调控作用 |
| 3.5.7 SIRT1/FXR对于保护APAP诱导肝损伤的介导作用 |
| 3.6 讨论 |
| 第四章 欧前胡素长循环脂质体制备以及大鼠体内药代动力学研究 |
| 4.1 实验目的 |
| 4.2 材料与仪器 |
| 4.2.1 药物、试剂和材料 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.3 实验动物 |
| 4.4 实验方法 |
| 4.4.1 脂质体制备方法 |
| 4.4.2 大鼠血浆样品前处理方法 |
| 4.4.3 液相色谱条件 |
| 4.5 实验结果 |
| 4.5.1 质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)检测欧前胡素采集方法的优化建立 |
| 4.5.2 欧前胡素定性定量方法学验证 |
| 4.5.3 欧前胡素长循环脂质体表征研究实验结果 |
| 4.5.4 欧前胡素脂质体体外释放实验结果 |
| 4.5.5 欧前胡素脂质体外体红细胞溶血实验结果 |
| 4.5.6 欧前胡素脂质体药代动力学实验结果 |
| 4.6 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附件 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 详细摘要 |
（10）纯钛种植体掺锶微纳米表面调节巨噬细胞极化影响骨整合的研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 文献回顾 |
| 1 骨整合过程 |
| 2 巨噬细胞的来源和分类 |
| 3 巨噬细胞在骨整合过程中的作用 |
| 4 纯钛种植体表面改性对于巨噬细胞的作用 |
| 第一部分 纯钛掺锶微纳米表面的制备与表征 |
| 1 前言 |
| 2 材料方法 |
| 3 实验方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第二部分 纯钛掺锶微纳米表面对巨噬细胞生物学行为和极化的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料方法 |
| 3 实验方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第三部分 纯钛掺锶微纳米表面通过调节巨噬细胞极化影响骨整合的体内/外研究 |
| 1 前言 |
| 2 材料方法 |
| 3.实验方法 |
| 4 结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 免疫细胞在骨愈合过程中的作用 |
| 参考文献 |
| 作者简历以及在学期间所取得的科研成果 |
四、Integration of TNF-α signaling: crosstalk between caspasesl,IKK and JNK（论文参考文献）
- [1]Molecular pathways in viral hepatitis-associated liver carcinogenesis: An update[J]. Gulsum Ozlem Elpek. World Journal of Clinical Cases, 2021(19)
- [2]檀香籽油对肥胖大鼠胰岛素抵抗的调节作用及机制研究[D]. 张慧君. 青岛大学, 2021(02)
- [3]青蒿琥酯通过ERS-UPR信号通路调控溃疡性结肠炎的作用机制研究[D]. 殷韶杰. 扬州大学, 2021(02)
- [4]内质网应激在中耳炎发病机制中的作用研究[D]. 赵洪春. 山东大学, 2020(04)
- [5]E3泛素连接酶在Wnt与NF-κB通路中的调控机制研究[D]. 刘玉春. 郑州大学, 2020(08)
- [6]TAM家族受体MerTK和GAS6通过SOCS/TRAF6/Mal途径抑制乳腺炎中的TLRs通路[D]. ARSHAD ZAHOOR. 华中农业大学, 2020
- [7]医用可降解Mg-Nd-Zn-Zr合金与巨噬细胞的相互作用研究[D]. 金亮. 上海交通大学, 2020
- [8]CUL4B在调控TLR介导的炎症反应中的作用及其机制[D]. 宋煜. 山东大学, 2020(01)
- [9]欧前胡素对APAP诱导急性肝损伤的保护作用机制及其脂质体制备的研究[D]. 高照. 广州中医药大学, 2020(06)
- [10]纯钛种植体掺锶微纳米表面调节巨噬细胞极化影响骨整合的研究[D]. 徐安恬. 浙江大学, 2020(01)