一、巨噬细胞移动抑制因子在大鼠坐骨神经损伤后表达的变化（论文文献综述）
胡涛涛,常树森,魏在荣[1]（2022）在《损伤周围神经的微环境中巨噬细胞极化成M2表型可有效促进其再生》文中指出背景:周围神经是人体最脆弱的结构,很容易因创伤而受损,巨噬细胞作为周围神经中最主要的免疫细胞,在周围神经损伤修复再生中发挥了极为重要的作用。随着对巨噬细胞各亚型功能及诱导机制研究越来越清楚,可以通过分子生物学方法诱导巨噬细胞成相应修复表型,并期许其成为周围神经损伤新的治疗靶点。目的:总结周围神经系统中巨噬细胞的起源、分类、巨噬细胞极化、极化调控以及在周围神经损伤修复再生中的应用。方法:通过检索CNKI、万方数据库、PubMed及WebofScience数据库相关文章。以"巨噬细胞极化,神经"为中文检索词,以"macrophage polarization,nerve"为英文检索词。然后根据纳入与排除标准对文章进行初筛,保留相关性和参考价值较高的73篇文章进行综述。结果与结论:巨噬细胞极化在周围神经损伤后的修复中发挥重要作用,有望成为治疗周围神经损伤的治疗靶点,但是控制这一过程的机制仍需要进一步深入研究,促进巨噬细胞M2极化的最佳方法也存在不确定性。因此,需要进一步研究巨噬细胞向M2极化的调控机制以及M2巨噬细胞如何调节神经功能恢复,为周围神经损伤的治疗奠定基础。
崔梦丽[2]（2021）在《NLRP3炎性小体在小鼠周围神经损伤中的作用研究》文中提出目的周围神经损伤是由于各种原因引起的并在该神经所支配的范围内出现了诸多方面的障碍。NLRP3可检测到各种微生物基序和内源性危险信号,从而导致炎性小体的形成。本课题研究使用NLRP3基因敲除小鼠来构建外周神经损伤模型,旨在更深一步的探索NLRP3炎性小体是否参与外周神经损伤疾病,及其在外周神经损伤后的修复中的作用,为更好的探索外周神经损伤及修复机制奠定实验基础。方法本研究选用C57BL/6野生型小鼠（WT）,NLRP3基因敲除小鼠(Nlrp3-/-)和TLR4基因敲除小鼠(Tlr4-/-)。按照以下步骤进行:1、构建外周神经钳夹伤的动物模型。采用抽签的方式将WT小鼠随机的分为对照组（42只）,钳夹伤组（60只）;Nlrp3-/-小鼠随机分为对照组（12只）,钳夹伤组（48只）及Tlr4-/-小鼠钳夹伤组（3只）。小鼠麻醉后,对照组仅暴露出坐骨神经60秒（s）;钳夹伤组暴露出坐骨神经并用止血钳夹伤60s。2、检测NLRP3炎性小体。利用HE和LFB染色检测坐骨神经的炎症与髓鞘变化情况。利用RT-qPCR方法检测NLRP3,Caspase-1,ASC,IL-18和IL-1β因子在基因水平的变化。利用Western blot方法检测NLRP3,Caspase-1,ASC,IL-18和IL-1β在蛋白水平的变化。利用免疫荧光法检测ASC寡聚成核的情况以及巨噬细胞浸润情况。3、检测WT小鼠与Nlrp3-/-小鼠坐骨神经损伤后的恢复情况。利用Western blot方法于1周（w）检测p75NTR和GAP-43的蛋白表达。利用免疫组化法于2 w和3 w检测p75NTR和GAP-43的蛋白表达情况。利用坐骨神经功能指数（SFI,Sciatic nerve function index）来评价小鼠运动功能方面的恢复情况。4、利用Western blot方法检测TLR4参与调控NLRP3产生情况。结果构建小鼠的外周坐骨神经钳夹伤损伤模型成功。（1）WT小鼠检测结果:相比对照组,LFB染色结果表明钳夹伤组髓鞘结构不完整且发生脱髓鞘。HE染色结果表明钳夹伤组炎症细胞增多。RT-qPCR结果表明,NLRP3和IL-1β的m RNA水平在钳夹伤组显着升高（P<0.0001）;Western blot结果表明,Caspase-1和ASC的蛋白水平在钳夹伤组显着升高（P<0.01）,而NLRP3和IL-1β的蛋白水平在神经损伤后24 h显着升高（P<0.01）;免疫荧光分析,钳夹伤组ASC斑点的数量显着升高（P<0.01）。（2）Nlrp3-/-小鼠检测结果:相比对照组,LFB和HE染色结果与WT钳夹伤组相同;与此同时,免疫荧光检测发现,与Nlrp3-/-小鼠钳夹伤组相比,WT小鼠钳夹伤组CD68+巨噬细胞数量更多;RT-qPCR结果表明,相比WT小鼠钳夹伤组,在坐骨神经损伤后所测定时间点,NLRP3和IL-1β的m RNA水平在Nlrp3-/-小鼠钳夹伤组显着降低（P<0.0001）,神经损伤后24 h和48 h,ASC和Caspase-1的m RNA水平在Nlrp3-/-小鼠钳夹伤组显着降低（P<0.001）;Western blot结果表明,相比WT小鼠钳夹伤组,坐骨神经损伤后12h和24h,NLRP3、IL-18和IL-1β的蛋白水平,在Nlrp3-/-小鼠钳夹伤组中显着降低（P<0.01）,神经损伤后24 h,ASC和Caspase-1的蛋白水平,在Nlrp3-/-小鼠钳夹伤组中显着降低（P<0.01）。（3）神经损伤后的修复结果:Western blot方法和免疫组化方法结果都表明,相比WT小鼠钳夹伤组,p75NTR和GAP-43的蛋白水平在Nlrp3-/-小鼠钳夹伤组中增高。SFI的结果显示,相比WT小鼠钳夹伤组,SFI的评分在Nlrp3-/-小鼠钳夹伤组中增高。（4）TLR4调控NLRP3的表达结果:Western blot检测结果,与WT小鼠钳夹伤组相比,NLRP3、NF-κB和TLR4的蛋白水平在Tlr4-/-小鼠钳夹伤组中表达减少。结论成功构建三种实验小鼠的坐骨神经钳夹伤模型。坐骨神经损伤后可引起NLRP3炎性小体的形成并进一步被激活;并且TLR4在一定程度上正向调控了NLRP3的形成。此外,敲除NLRP3基因可减弱神经损伤后的炎症反应,加快坐骨神经的运动功能的恢复。本研究,为外周神经损伤的炎症发生机制提供了理论依据,为临床治疗外周神经损伤及功能恢复提供了新的线索。
蒋玲丽[3]（2021）在《小RNA转录组分析大鼠脊髓完全横断对坐骨神经损伤修复早期的影响》文中研究指明目的:为了探究脊髓损伤对周围神经损伤修复早期的影响,建立了SD大鼠坐骨神经横断模型组（PNI组）和脊髓完全横断联合坐骨神经横断模型组（SCI组）,通过检测两组模型坐骨神经损伤修复早期的神经残端华勒变性情况,以及使用小RNA转录组测序分析两组之间差异表达的miRNA,筛选出脊髓调控周围神经损伤修复早期可能的miRNA。方法:（1）建立SD大鼠PNI组和SCI组模型,分别在第0天、3天和7天观察两组模型神经断端的情况;（2）分别取两组模型第0天、3天和7天坐骨神经远端神经残端进行组织病理染色及透射电镜检测,评估脊髓横断对周围神经损伤修复早期华勒变性的影响;（3）取两组模型第3天和7天的坐骨神经远端残根进行小RNA转录组测序,使用生物信息学分析高通量测序数据,筛选两模型组之间差异表达的miRNA,并对它们预测到的候选靶基因进行功能分析;（4）对筛选出的miRNA进行qPCR验证其相对表达量,对miRNA的作用靶点进行预测,并分析蛋白互作关系。结果:（1）成功建立了坐骨神经横断模型和脊髓完全横断联合坐骨神经横断模型,在第0天、3天和7天对神经大体进行观察,发现在同一时间点坐骨神经横断组的神经远端残根较脊髓完全横断联合坐骨神经横断组肿胀、柔软,脊髓完全横断联合坐骨神经横断组神经肿胀不明显,神经质地与第0天（对照组）时类似;（2）通过HE染色、髓鞘甲苯胺蓝染色、髓鞘碱性蛋白（MBP）免疫荧光染色等病理染色以及透射电镜,发现PNI组的华勒变性程度显着高于SCI组,且PNI组华勒变性发生时间更早;（3）血小板-内皮细胞粘附分子（CD31）免疫组化染色结果显示,随着神经损伤后修复时间增加,PNI组神经内血管数量逐渐增多,血管口径逐渐增大,而SCI组神经内的血管在数量和口径大小上变化均不明显;（4）小RNA转录组测序数据分析显示,在坐骨神经横断后第3天,PNI组与SCI组之间筛选出30个差异表达的miRNA,其中有13个为上调,17个发生了下调;筛选到第7天差异表达的miRNA有6个,其中4个上调,2个下调;（5）经qPCR验证,两模型组的miR-134-5p和miR-142-5p表达趋势与高通量测序结果一致,均为PNI组相对于SCI组高表达结论:（1）脊髓完全横断后周围神经损伤修复进程受到影响;（2）miR-134-5p和miR-142-5p在脊髓调控周围神经损伤后修复早期华勒变性启动及进展中可能发挥着重要作用。
刘振辉[4]（2021）在《仿生导电人工神经支架的研究》文中研究说明目的:（1）制备具有导电功能的多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架,并对其进行表征,验证其生物相容性,利用支架进行细胞三维立体培养,研究电刺激对RSC96细胞生长的影响。（2）制备具有取向性纳米纤维的PLLA纤维膜,并对其进行表征,验证其生物相容性,研究纤维取向性对RSC96细胞信号蛋白的影响。（3）制备仿生导电人工神经支架,将支架植入大鼠坐骨神经缺损,探讨仿生导电人工神经支架对大鼠坐骨神经修复效果和机制。方法:（1）利用梯度冷冻和冷冻干燥技术制备出具有多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架。通过微结构、溶胀和脱溶涨、导电率、形状记忆功能、载药及药物释放性能、力学性能和生物相容性对制备的多微通道多壁碳纳米管琼脂糖导电支架进行表征,对三维立体培养的RSC96细胞进行组织学评价,观察不同培养条件下细胞生长行为。（2）利用静电纺丝技术制备出具有取向纳米纤维的PLLA纤维膜。通过扫描电镜、力学性能、降解性和生物相容性对制备的PLLA纤维膜进行表征。利用免疫荧光技术研究纤维取向性对RSC96细胞ERK、P38MAPK、MEK和LRP4蛋白的影响。（3）利用定制的模具制备多微通道导电支架,将第二部分制备的高取向PLLA纤维膜和定制的多微通道导电支架组合成仿生导电人工神经支架,并将神经支架植入到大鼠坐骨神经缺损处。将实验动物分为支架组（S）、支架联合电刺激组（S&E）和自体神经移植组（AT）,通过坐骨神经功能指数、神经电生理检测、肌肉组织学检测、再生神经的组织学检测来分析仿生导电神经支架对周围神经再生的影响。结果:（1）加入的多壁碳纳米管没有影响琼脂糖支架的孔隙组成比和形状记忆功能,但0.025%wt多壁碳纳米管提高了支架在溶胀平衡状态下的溶胀率和保水能力。多壁碳纳米管改变了琼脂糖支架的电导率、载药及药物释放能力和力学性能。高浓度多壁碳纳米管对RSC96细胞和PC12细胞的增殖有一定影响。电镜下PC12细胞在多壁碳纳米管琼脂糖支架上生长状态良好。多壁碳纳米管的加入未改变RSCs细胞的S100β表达量。当电刺激存在时,RSC96细胞层沿支架纵轴排列较好,0.025%MWCNT-琼脂糖支架和0.05%MWCNT-琼脂糖支架表现出更好的细胞黏附性。（2）制备的PLLA纤维膜为多孔结构,纤维大部分为取向排列,高取向纤维膜的纤维取向性更高,其表面光滑,粗细均匀,纤维间形成立体的三维孔隙并分布于整个纤维膜。取向PLLA纤维膜的拉伸强度为（59.06±2.49）MPa,取向PLLA纤维膜的拉伸强度为（56.82±2.80）MPa,两种纤维膜拉伸强度没有统计学差异;取向PLLA纤维膜的杨氏模量为（1037.07±133.30）MPa,高取向PLLA纤维膜的杨氏模量为（971.45±112.39）MPa,两种纤维膜杨氏模量没有统计学差异;取向PLLA纤维膜的断裂伸长率为364.48±53.79,高取向PLLA纤维膜的断裂伸长率为356.89±40.21,两种纤维膜断裂伸长率没有统计学差异。增加PLLA纤维膜的取向,并未明显改变纤维膜的拉伸强度、杨氏模量和断裂延伸率。改变纤维膜的纤维取向程度,对PLLA纤维膜的降解速率没有影响。取向PLLA纤维膜和高取向PLLA纤维膜对RSC96细胞的增殖均没有影响。和取向性纤维膜相比,高取向的PLLA纤维膜上的RSC96细胞呈现出现明显的丝状伪足,沿着排列整齐的纳米纤维延伸。和取向性PLLA纤维膜相比,高取向PLLA纤维增加了RSC96细胞ERK、P38 MAPK、MEK和LRP4蛋白表达量（P<0.01）。（3）制备的仿生导电人工神经支架跟大鼠坐骨神经匹配良好,植入神经缺损出未见异物反应。S&E组坐骨神经功能指数、神经电生理结果、肌肉组织学结果、轴突和髓鞘再生效果接近AT组,好于S组。术后12周时免疫组化结果显示,NF-H蛋白和S00-β蛋白表达,S&E组和AT组的高于S组（P<0.01）,而S&E组接近AT组。LRP4蛋白和P38MAPK蛋白表达,AT组高于S组（P<0.01）,但AT和S&E组,S&E组和S组相比均无差异无统计学意义。ERK蛋白和MEK蛋白表达情况,AT组高于S组和S&E组（P<0.01）,S&E组和S组两者相比差异无统计学意义。结论:（1）多壁碳纳米管琼脂糖支架具有高的孔隙率、一定的形状记忆功能、载药及药物释放能力、导电能力,良好的生物相容性。在电刺激存在时,具有导电性能的多壁碳纳米管琼脂糖支架对RSC96细胞生长具有引导作用。（2）和取向性的PLLA纤维膜相比,高取向性的PLLA纤维膜未改变其力学性能、降解性和生物相容性,但增加了ERK、P38 MAPK、MEK和LRP4蛋白的表达量,能引导RSC96细胞生长和迁移,这有利于其在周围神经再生中的应用。（3）仿生导电人工神经支架联合电刺激能够增强周围神经再生。电刺激可能通过ES通过与MAPK信号通路的激活促进周围神经再生,ERK、P38MAPK、MEK和LRP4可能参与周围神经再生。
陶学恕[5]（2021）在《α7nAChR在脊髓电刺激治疗大鼠神经病理性疼痛中的作用及机制研究》文中研究说明目的:神经病理性疼痛（Neuropathicpain,NP）是一种顽固的慢性疼痛。NP的发病机制比较复杂,常规镇痛药物疗效不明显,且易导致药物过量中毒等不良反应。目前,神经炎症在NP发病机制中的作用逐渐受到重视。神经炎症指由感染、损伤、毒性代谢物及自身免疫反应等引发的神经组织炎症。免疫细胞和胶质细胞是参与神经炎症的主要细胞,其活化后可释放多种炎症介质,促进外周和中枢敏化。脊髓电刺激（Spinalcord stimulation,SCS）是目前治疗顽固性神经病理性疼痛的主要手段。脊髓电刺激的神经元机制已有较多的研究,但是其对神经炎症的作用尚不清楚。α7nAChR是胆碱能抗炎通路中的重要受体,α7nAChR通过神经-免疫相互作用,参与了全身炎症反应的调控。研究表明,在周围神经损伤动物模型中,患侧脊髓的α7nAChR表达下调,且鞘内给予α7nAChR激动剂可以缓解炎性痛和慢性疼痛,说明α7nAChR参与了中枢炎症反应的调-节。近期研究证实,SCS可通过激活α7nAChR在脊髓缺血再灌注损伤模型中起到保护神经元的作用。本研究通过建立大鼠神经病理性疼痛模型和脊髓电刺激模型,探究脊髓电刺激是否可以通过激活α7nAChR来调节神经炎症反应,进而缓解大鼠神经病理性疼痛。研究方法:第一部分:神经病理性疼痛大鼠脊髓背角α7nAChR表达变化及其对疼痛行为学的影响1、建立CCI大鼠神经病理性疼痛模型,设立3组,分别为（1）Control组,（2）ShamCCI组,（3）CCI组。检测各组机械痛阈变化;免疫荧光双标观察脊髓背角胶质小细胞激活以及p38磷酸化情况;RT-PCR和ELISA检测脊髓炎症因子表达情况;免疫荧光染色及Western Blot检测脊髓α7nAChR表达情况。2、向CCI大鼠鞘内注射α7nAChR激动剂PNU-282987,共设立6组,分别为（1）Control 组,（2）CCI+Vehicle 组,（3）CCI+PNU0.1mg/Kg 组,（4）CCI+PNU 0.25mg/Kg 组,（5）CCI+PNU 0.5mg/Kg 组,（6）CCI+PNU 0.5mg/Kg+α-BGT 0.5μg/Kg组。检测各组给药前后疼痛行为学变化。第二部分:脊髓电刺激通过抑制小胶质细胞中p38磷酸化治疗神经病理性疼痛建立大鼠脊髓电刺激模型,共设立3组,分别为（1）Control组,（2）CCI+Sham SCS组,（3）CCI+SCS组。检测各组机械痛阈变化;免疫荧光染色观察脊髓背角胶质小细胞激活以及p38磷酸化情况;RT-PCR和ELISA检测脊髓炎症因子表达情况,免疫荧光染色及Western Blot检测脊髓α7nAChR表达情况。第三部分:脊髓电刺激通过促进α7nAChR表达抑制小胶质细胞介导的神经炎症在脊髓电刺激之前鞘内给予α7nAChR抑制剂α-BGT,共设立4组,分别为（1）Control 组,（2）CCI+Sham SCS 组,（3）CCI+SCS+Vehicle 组,（4）CCI+SCS+α-BGT组。检测各组机械痛阈变化;免疫荧光染色观察脊髓背角小胶质细胞激活以及p38磷酸化情况;RT-PCR和ELISA检测脊髓炎症因子表达情况,免疫荧光染色及Western Blot检测脊髓α7nAChR表达情况。结果:第一部分:慢性坐骨神经压迫手术成功后可建立稳定的神经病理性疼痛模型,大鼠机械痛阈显着降低（P<0.001）;免疫荧光结果显示:CCI术后3周大鼠坐骨神经损伤侧脊髓背角的CD11b的荧光强度明显增强,同时P-p38的数量增加;RT-PCR和ELISA结果显示:与Naive和sham组相比,CCI组脊髓中IL-1β和TNF-α的mRNA和蛋白表达水平明显增高（P<0.01）;免疫荧光和WB结果显示:CCI造模3周后患侧脊髓中α7nAChR的表达降低;在CCI术后第14天,鞘内给予α7nAChR激动剂PNU-282987,可明显缓解机械痛敏（P<0.001）,且呈剂量依赖性。第二部分:通过测量各组大鼠的缩足阈值,来探究SCS对大鼠机械痛阈的影响。结果显示,三组大鼠的缩足阈值在CCI术前无明显差异。与对照组相比,CCI+Sham SCS组和CCI+SCS组的PWT在SCS之前显着降低（P<0.05）;与CCI+Sham SCS组相比,CCI+SCS大鼠在整个SCS治疗期间PWT均显着增加（P<0.05）,且SCS治疗结束5天内PWT仍明显升高,但是在第14天逐渐恢复至CCI+Sham SCS组水平;免疫荧光双标显示:在外周神经损伤后,与对照组相比,CCI+Sham SCS组患侧脊髓背角的CD11b荧光强度和P-p38数量显着增加（P<0.001）;与CCI+Sham SCS相比,CCI+SCS大鼠患侧脊髓背角的CD11b荧光强度和P-p38的数量明显减少（P<0.001）;RT-PCR和ELISA结果显示:与CCI+Sham SCS组相比,CCI+SCS组脊髓中炎症因子TNF-α,IL-1β的mRNA和蛋白质表达明显降低（P<0.05）;WB结果显示:CCI+Sham SCS组脊髓α7nAChR的蛋白水平显着降低（P<0.001）;但CCI+SCS组脊髓α7nAChR的蛋白表达量相较于CCI+Sham SCS组明显增多（P<0.01）。第三部分:免疫荧光双标显示α7nAChR在脊髓的神经元（NeuN）、小胶质细胞（CD11b）和星形胶质细胞（GFAP）中均有表达;与CCI+sham SCS组大鼠相比,CCI+SCS+Vehicle组大鼠的PWT在整个SCS治疗期间显着增加（P<0.001）;然而鞘内注射α-BGT则明显抑制SCS诱导的CCI大鼠PWT增加（P<0.01）;免疫荧光双标显示:在外周神经损伤后,与CCI+Sham SCS组相比,CCI+SCS+Vehicle组患侧脊髓背角的CD11b荧光强度和P-p38数量显着降低（P<0.001）;与 CCI+SCS+Vehicle 组相比,CCI+SCS+α-BGT 组大鼠患侧脊髓背角的CD11b荧光强度和P-p38的数量明显增加（P<0.01）;RT-PCR与ELISA结果显示:与CCI+Sham SCS大鼠相比,接受vehicle处理的CCI+SCS大鼠脊髓中促炎性细胞因子IL-1β和TNF-α的mRNA表达和蛋白质水平显着降低（P<0.001）,但在α-BGT处理的CCI+SCS大鼠中,炎症因子表达相较于CCI+SCS+Vehicle 组明显升高（P<0.05）。结论:第一部分:CCI诱导大鼠出现持续性机械性痛觉过敏;CCI可诱导患侧脊髓背角发生炎症反应,表现为小胶质细胞激活以及p38磷酸化增多,IL-1β和TNF-α的表达水平增高,提示神经炎症参与了神经病理性疼痛的调节;神经损伤后脊髓背角同侧α7nAChR表达明显降低,鞘内给予α7nAChR激动剂,可以缓解CCI诱导的机械痛敏,提示α7nAChR可以作为治疗神经病理性疼痛的潜在靶点。第二部分:SCS可缓解CCI大鼠神经病理性疼痛,且在刺激停止后具有持续镇痛效应;SCS可以抑制CCI诱导的脊髓小胶质细胞激活、P-p38增加和促炎细胞因子产生,提示SCS可以通过抑制神经炎症反应来调节神经病理性疼痛;SCS可以促进CCI大鼠同侧脊髓背角α7nAChR表达。第三部分:α7nAChR是胆碱能抗炎通路的主要受体,在大鼠脊髓背角的神经元、小胶质细胞和星形胶质细胞中均有表达;鞘内注射α7nAChR抑制剂可拮抗SCS对小胶质细胞激活,p38磷酸化和炎症因子释放的抑制作用,SCS对神经炎症的调节作用与促进α7nAChR的表达有关。
陈天琰[6]（2020）在《神经干细胞条件培养液抑制巨噬细胞炎症及促进坐骨神经损伤修复作用研究》文中提出研究目的探究大鼠坐骨神经挤压伤后神经干细胞条件培养液（NSC-CM）的修复作用,并观察其对损伤神经中炎症因子表达及巨噬细胞浸润的影响,在体外进一步阐明NSC-CM对巨噬细胞炎症状态的影响及其机制探究。研究方法（1）SD大鼠坐骨神经挤压伤模型的建立;（2）通过坐骨神经功能指数,足印分析脚趾伸展情况,腓肠肌湿重和HE染色观察NSC-CM对大鼠坐骨神经挤压伤后行为学和功能恢复的影响;（3）通过HE染色,透射电镜分析NSC-CM对轴突和髓鞘再生的影响;（4）通过免疫组化染色观察NSC-CM对挤压伤后损伤神经中炎症和巨噬细胞浸润的影响;（5）体外提取并培养大鼠腹腔巨噬细胞,用LPS诱导巨噬细胞建立炎症模型;（6）通过RT-qPCR、Western blot、ELISA分析NSC-CM对巨噬细胞促炎相关蛋白表达的影响并探究其机制。研究结果（1）NSC-CM处理相比于PBS组明显改善挤压伤后大鼠坐骨神经功能指数和损伤侧脚趾伸展情况,并改善腓肠肌萎缩状况（P<0.05）。（2）NSC-CM处理相比于PBS组促进坐骨神经挤压伤后轴突再生和髓鞘再生（P<0.05）。（3）NSC-CM处理相比于PBS组减轻了损伤后第14 d炎症因子（IL-6,IL-1β,TNF-α）的表达和炎性巨噬细胞（CD68）的浸润（P<0.05）,但在损伤早期即第3 d,与PBS相比,NSC-CM处理组炎症因子表达和巨噬细胞数量无统计学差异（P>0.05）。（4）与对照组相比,NSC-CM显着抑制LPS诱导的巨噬细胞促炎相关蛋白（IL-6,IL-1β,TNF-α,iNOS）的表达（P<0.05）。（5）与对照组相比,NSC-CM明显激活巨噬细胞Sirt-1蛋白表达（P<0.05）,并调节HIF-1α和NF-κB信号分子（P<0.05）。经Sirt-1特异性抑制剂EX 527处理后,能部分减弱NSC-CM对巨噬细胞的抑炎作用。研究结论（1）NSC-CM改善坐骨神经挤压伤后大鼠的功能恢复,促进轴突再生和髓鞘再生。（2）NSC-CM减轻损伤后期炎症因子表达和巨噬细胞浸润。（3）NSC-CM体外显着抑制LPS诱导的巨噬细胞促炎相关蛋白的表达。（4）NSC-CM通过激活Sirt-1信号通路抑制巨噬细胞炎症反应。
陈怡然,佟欣鑫,杨书蔚,李文新,马铁明[7]（2020）在《针刺干预周围神经损伤后巨嗜细胞游走抑制因子表达研究》文中指出目的:探讨大鼠周围神经损伤（PNI）后巨嗜细胞游走抑制因子（MIF）的表达规律和针刺干预的作用机制。方法:81只SD大鼠随机数字表法分为假手术组、模型组、针刺治疗组,按治疗时间分为3、7、14d 3个亚组,每组9只。制备改良的坐骨神经钳夹损伤模型。造模后0.5h,神经传导功能检测进行模型评价。检测坐骨神经功能指数（SFI）评价神经运动功能;取神经损伤段HE染色和透射电镜行组织形态学观察,免疫组化法检测MIF蛋白表达水平。结果:治疗前,与假手术组比较,其余两组SFI显着降低（P<0.05）;治疗时间推移,针刺治疗组逐渐高于模型组（P<0.05）。模型组神经纤维崩解,髓鞘结构破坏严重,炎性细胞浸润逐渐增多;针刺治疗组神经纤维逐渐修复,雪旺细胞包饶新生神经纤维形成髓鞘,炎性细胞减少。模型组MIF表达逐渐增多,7d最高,14d减少;针刺治疗组3、7d表达高于同期模型组（P<0.05）,14d低于模型组（P<0.05）。结论:针刺可加快MIF分泌周期,促进雪旺细胞增殖,促进髓鞘重建和轴突再生,这可能是针刺治疗PNI的机制之一。
辛旺[8]（2020）在《脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经在大鼠坐骨神经缺损修复中的作用》文中进行了进一步梳理周围神经损伤是临床外科常见的疾病之一,其治疗及功能恢复长期以来都是临床医生面临的一项重要挑战。目前临床上自体神经移植是周围神经缺损修复的“金标准”,但由于其存在来源受限、牺牲供区次要神经功能等因素其临床应用受到限制,因此人工神经为临床修复提供了一个新思路,成为目前周围神经损伤修复的研究热点。近年来随着组织工程技术的发展,众多的材料被应用于人工神经的制备。蚕丝具有高韧性以及良好的生物相容性,是一种常见的组织工程材料。本课题组前期研究表明利用蚕丝纤维构建的微通道人工神经导管在引导和促进再生神经纤维的生长方面有显着的效果,但是其在体内却难以降解;在随后的研究中发现,在炎症反应中的细胞吞噬作用是其在体内降解的主要因素之一,同时在神经损伤修复早期,适度的炎症反应也有助于促进损伤神经的修复。研究表明,当周围神经组织损伤后,炎症反应随即被触发,损伤处以及远端全长神经纤维发生瓦勒氏变性（Wallerian degeneration,WD）,在此过程中,巨噬细胞吞噬变性的组织碎片,为神经再生扫除障碍,雪旺氏细胞增殖活化形成Büngner带,并且分泌神经营养因子,促进轴突的再生。脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分,其作为一种典型的免疫应答激活剂,可通过激活相应的TLRs信号通路有效刺激巨噬细胞和神经胶质细胞活化,诱导体内的炎症反应。基于以上原因,本研究构建含LPS的蚕丝纤维微通道复合人工神经导管,一方面通过LPS在一定时间内的持续释放,诱导适度的炎症反应,加快大鼠坐骨神经损伤后炎性细胞的募集及瓦勒氏变性过程中轴突和髓鞘碎片的清除;另一方面促进巨噬细胞对蚕丝纤维的吞噬,从而进一步促进蚕丝纤维的体内降解;旨在从免疫学角度,缩短神经损伤后瓦勒氏变性的时间,加快神经再生速度以及改善神经导管的修复效果,为人工神经导管的深入研究以及周围神经的辅助治疗提供新思路。为了探讨LPS的含量对炎性细胞的影响,本研究首先使用不同剂量的LPS对大鼠进行尾静脉注射,利用全自动血细胞分析仪进行血常规检测;随后利用海藻酸钙凝胶为缓释载体,制备了载LPS的蚕丝纤维微通道复合人工神经导管,检测其在周围神经缺损修复中的作用,为此本研究共设计了3种人工神经导管,在大鼠坐骨神经10 mm缺损动物模型中分别进行了4种移植方案,即:自体神经移植组（对照）,熟丝组,凝胶组和LPS组。在移植后的相应时间点分别进行坐骨神经功能指数（SFI）检测、HE染色和免疫荧光染色观察,以此评价3种人工神经导管修复神经缺损的效果,以及在修复过程中炎性细胞的活动;最后,利用实时荧光定量PCR测定损伤修复过程中溶酶体相关基因和炎性细胞因子的表达情况,探讨炎症反应以及蚕丝降解活动在周围神经损伤修复中的变化。实验结果显示:1.大鼠血常规分析结果显示:低剂量（1μg/kg）LPS和中剂量（100μg/kg）LPS均可显着诱导大鼠血液中白细胞增生,而高剂量（10 mg/kg）LPS导致白细胞数减少,提示一定剂量的LPS可诱导大鼠产生适度的炎症反应。2.人工神经体外测试:（1）LPS在神经导管中的体外缓释结果显示:LPS在前7天释放速度较快,而后释放速度逐渐趋于平缓,在第21天时累积释放量为2444.2 EU,释放基本结束,以上结果表明载LPS的蚕丝纤维微通道复合人工神经导管能够在一定程度上对LPS缓慢释放,具有良好的缓释效果。（2）人工神经导管材料与雪旺氏细胞共培养,CCK8测定结果表明:3种人工神经对雪旺氏细胞无明显毒性,并表现出良好的生物相容性。3.人工神经修复效果评价:（1）HE染色观察显示:各组移植体神经纤维再生状况良好,术后第12周,3种人工神经导管内的蚕丝纤维均出现不同程度的降解,其中,LPS组单位面积残余的蚕丝纤维数量最少,表明LPS的添加促进了蚕丝纤维在体内的降解。（2）免疫荧光观察显示:术后第1周,4组移植体近、远端神经组织均被大量巨噬细胞浸润,其中,LPS组巨噬细胞数量显着高于其他移植组;在移植体近、远端均观察到脱髓鞘现象,与近端相比,远端脱髓鞘程度较高,各组中,LPS组残余的轴突和髓鞘碎片最少。术后第12周,各组移植体中均检测到大量的雪旺氏细胞和再生轴突,自体移植组中雪旺氏细胞和再生轴突最多,其余3组中,雪旺氏细胞和再生轴突数量由多至少依次为:LPS组、凝胶组、熟丝组。（3）术后第2、4、12周坐骨神经功能指数（SFI）结果表明,各组SFI随时间的推移逐渐恢复,其中LPS组显着优于其他人工神经组,修复效果最接近自体移植组。4.实时荧光定量PCR结果显示:促炎细胞因子IL-6 mRNA、TNF-αmRNA在神经损伤后第3天开始显着上调,抗炎细胞因子IL-10 mRNA则在神经损伤后第2周开始显着上调,稍晚于促炎细胞因子;在损伤前2周LPS组IL-6 mRNA的相对表达量均显着高于其他组。各移植组溶酶体相关基因的mRNA均在术后不同时期显着上调,其中Ctsd mRNA在第4周显着上调。Hip1r mRNA在第1周开始显着上调,而Plat mRNA在第3天开始显着上调。综上实验结果表明:本研究构建的脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经导管能够诱导适度的炎症反应,加快神经损伤早期瓦勒变性过程中轴突和髓鞘碎片的清除,从而促进坐骨神经的结构重建和功能恢复;另外,LPS的添加对蚕丝纤维在体内的降解也有一定的促进作用。
李波[9]（2020）在《miR-22-3p调控CBL/p-EGFR/p-STAT3/GAP43/p-GAP43通路修复脊髓感觉传导功能的实验研究》文中认为目的本研究旨在探索表皮生长因子（Epidermal Growth Factor,EGF）对初级感觉神经元轴突生长的影响,探讨增强成年初级感觉神经元内在生长能力对于脊髓后索损伤后感觉功能恢复的影响;同时在体外实验及体内试验通过调控初级感觉神经元中miR-22-3p水平,阐明miR-22-3p在初级感觉神经元轴突生长和脊髓感觉传导功能中的作用,进而找到促进脊髓损伤后轴索再生的关键靶点和治疗方法。方法1.体外培养初级感觉神经元,使用EGF、小干扰RNA（siRNA）、miR-22-3p mimics、AG490、Ruxolitinib等药物处理初级感觉神经元,以期观察神经元轴突生长差异和细胞内部信号通路蛋白的表达水平。2.使用NF-200免疫荧光染色方法对体外培养的初级感觉神经元轴突进行标记和计算其长度,比较EGF、siRNA、miR-22-3p mimics、AG490、Ruxolitinib等对初级感觉神经元轴突生长的影响。3.使用免疫印迹实验测定磷酸化表皮生长因子受体（phosphorylated Epidermal Growth Factor Receptor,p-EGFR）、Casitas B细胞淋巴瘤（Casitas B-lineage lymphoma,CBL）、信号转导与转录激活因子3（Signal Transducer and Activator of Transcription 3,STAT3）、磷酸化信号转导与转录激活因子3（phosphorylated Signal Transducer and Activator of Transcription 3,p-STAT3）、细胞外调节蛋白激酶1/2（Extracellular Regulated Protein Kinases1/2,Erk1/2）、磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（phosphorylated Extracellular Regulated Protein Kinases1/2,p-Erk1/2）、生长相关蛋白43（Growth Associated Protein 43,GAP43）和磷生长相关酸化蛋白43（phosphorylated Growth Associated Protein 43,p-GAP43）的表达水平,以期探索参与到EGF促进初级感觉神经元轴突生长过程的细胞内部信号通路。4.使用Targetscan、StarBase、miRDB和miRwalk database对潜在靶向CBL蛋白的miRNA进行生物信息学预测。使用双荧光素酶报告实验验证miR-22-3p与CBL mRNA3’端非编码区的相互作用。使用实时荧光定量聚合酶链反应（RTqPCR）对miR-22-3p、CBL mRNA进行检测,评价miR-22-3p对CBL表达的抑制作用。5.建立脊髓后索损伤模型,同时使用miR-22-3p模拟物（Agomir）进行DRG注射,在体内水平使用免疫印迹实验检测损伤后关键蛋白EGF、p-EGFR、CBL、p-STAT3和p-GAP43的表达水平,验证在体内调控miR-22-3p是否同样可以调控CBL/p-EGFR/p-STAT3/GAP43/p-GAP43通路。6.使用体感诱发电位（Somatosensory Evoked Potentials,SSEP）和胶带移除实验（Tape Removal Teat,TRT）对脊髓后索损伤后大鼠脊髓上行感觉传导通路完整性和大鼠后肢感觉功能进行检测,从而评价调控DRG中miR-22-3p水平对脊髓后索损伤后感觉功能损伤的修复效能。结果1.EGF促进初级感觉神经元轴突生长EGF处理初级感觉神经元30min和1h相较于处理0min,轴突长度显着增长,但是30min与1h组无明显差异。提示延长EGF处理时间不会进一步促进初级感觉神经元轴突生长。p-EGFR的表达在EGF处理30min时发生上调,但是在延长处理时间至1h时,其表达相较于30min时下调。与30min组相比,1h组p-EGFR水平的降低并没有改变神经元轴突的生长。2.CBL敲减后增加p-EGFR的表达使用CBL siRNA敲减CBL后,CBL的蛋白表达水平显着下调,证实CBL siRNA的敲减效能。敲减CBL后,p-EGFR的表达水平显着升高,提示CBL是抑制p-EGFR表达的关键靶点。3.miR-22-3p是CBL的靶miRNA通过四个数据库预测可以靶向CBL的miRNA,miR-22-3p是其中被四个数据库同时预测到的miRNA。双荧光素酶报告实验证实miR-22-3p可以靶向CBL m RNA 3’端非编码区。RT-qPCR证实miR-22-3p mimics增加miR-22-3p在神经元中的表达,并且可以减少靶向下调CBL mRNA表达。4.miR-22-3p促进p-EGFR表达和初级感觉神经元轴突生长miR-22-3p mimics能够明显降低CBL蛋白的表达。在下调CBL的同时,可以显着上调p-EGFR蛋白表达。提示miR-22-3p mimics解除了CBL对p-EGFR的抑制作用。NF-200细胞免疫荧光染色证实miR-22-3p mimics可以显着促进初级感觉神经元轴突生长。5.p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路是p-EGFR主要的下游通路为了验证p-EGFR下游的具体信号通路,Erk1/2,p-Erk1/2,STAT3,p-STAT3,GAP43和p-GAP43的表达水平进行检测。在所有时间点STAT3、Erk1/2和pErk1/2蛋白表达无差异。p-STAT3,GAP43和p-GAP43的表达水平在30 min和1 h组显着上调。提示p-STAT3/GAP43/p-GAP43通路是p-EGFR细胞内下游通路。6.p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路是miR-22-3p/CBL/p-EGFR调节初级感觉神经元轴突生长主要的下游通路miR-22-3p显着促进初级感觉神经元轴突生长,而AG490抑制剂（EGFR与JAK抑制剂）与鲁索替尼（STAT3抑制剂）显着抑制miR-22-3p mimics作用。同时,miR-22-3p mimics对p-STAT3和p-GAP43的促进作用被上述两种抑制剂抑制。证实p-STAT3/GAP43/p-GAP43是miR-22-3p/CBL/p-EGFR轴下游调控轴突生长的主要通路。7.miR-22-3p在体内调控CBL/p-EGFR/p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路在后索损伤造模后7、14和28 d,EGF、p-EGFR和miR-22-3p的表达量呈现先下调再逐渐上调的表达趋势。当在体内使用miR-22-3p Agomir后,CBL的表达受到显着抑制,p-EGFR、p-STAT3和p-GAP43的表达显着上调。证实miR-22-3p可以在体内调控CBL/p-EGFR/p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路。8.miR-22-3p促进脊髓后索损伤后传导功能恢复使用SSEP和TRT检测大鼠脊髓后索损伤后脊髓感觉传导功能,结果证实miR-22-3p Agomir可以在一定程度上恢复感觉诱发电位和胶带移除实验的表现。证实miR-22-3p可以促进脊髓后索感觉传导功能恢复。结论1.CBL是限制EGF促进成年初级感觉神经元轴突生长的主要原因。2.miR-22-3p可以通过靶向抑制CBL从而上调p-EGFR和下游STAT3/GAP43/pGAP43信号通路来促进初级感觉神经元轴突生长。3.调控miR-22-3p/CBL/p-EGFR/p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路轴可以促进脊髓后索损伤感觉传导功能恢复。
张臣鸣[10]（2020）在《周围神经损伤后大鼠神经断端组织中微小RNA-221和PTEN表达变化研究》文中进行了进一步梳理目的研究大鼠坐骨神经损伤后近、远侧断端组织中微小RNA-221与PTEN的表达情况,及其与周围神经损伤修复的相关性,以期为临床诊断治疗周围神经损伤提供新靶点。方法取SPF级雄性SD大鼠96只建立坐骨神经损伤模型,分别于术后0天（对照组,0d）及术后1、4、7天（实验组,1d、4d、7d）处死24只大鼠,无菌条件下取坐骨神经近、远侧断端组织。通过坐骨神经功能指数评分神经功能;实时荧光定量PCR检测miR-221表达,Western blot检测PTEN蛋白表达;通过HE染色及免疫荧光染色对坐骨神经断端组织进行病理学分析;染色采用双荧光素酶报告基因验证miR-221与PTEN二者的调控关系;同时结合透射电镜观察神经组织超微结构。结果实时荧光定量PCR和Western blot检测示,随术后时间延长,大鼠坐骨神经近、远侧断端组织中miR-221相对表达量均逐渐增加,PTEN蛋白相对表达量均逐渐减少。各实验组与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.05）;且各实验组之间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。各实验组神经组织近侧断端对比其同组远侧断端,其miR-221相对表达量均高于远侧断端,PTEN蛋白相对表达量均低于远侧断端,同组近、远断端之间比较差异均有统计学意义（P<0.05）。而坐骨神经功能指数评分示,各实验组与对照组比较差异均无统计学意义（P>0.05）。双荧光素酶报告基因示PTEN为miR-221作用靶点。HE染色及免疫荧光染色观察示各实验组与对照组比较存在明显病理学改变。透射电镜观察示对照组为正常形态结构;各实验组随时间增加,雪旺细胞增殖及轴突、髓鞘溃变逐渐增加。近、远侧断端相比较,1d组无明显差异,4d组和7d组近侧断端较远侧断端的雪旺细胞增殖较多,轴突、髓鞘溃变程度较少。结论大鼠坐骨神经损伤后,存在miR-221的表达上调靶向调控PTEN表达降低,进而产生近、远侧断端miR-221及PTEN表达含量的差异,这一现象可能对促进周围神经损伤后修复发挥着一定作用。
二、巨噬细胞移动抑制因子在大鼠坐骨神经损伤后表达的变化（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、巨噬细胞移动抑制因子在大鼠坐骨神经损伤后表达的变化（论文提纲范文）
（1）损伤周围神经的微环境中巨噬细胞极化成M2表型可有效促进其再生（论文提纲范文）
| 文章快速阅读： |
| 文题释义： |
| 0引言Introduction |
| 1 资料和方法Data and methods |
| 1.1 检索策略 |
| 1.2 入选标准 |
| 1.3 数据提取 |
| 2 结果Results |
| 2.1 周围神经中巨噬细胞来源 |
| 2.2 周围神经损伤后巨噬细胞的募集 |
| 2.3 巨噬细胞极化成不同表型及极化方式 |
| 2.4 周围神经损伤后巨噬细胞表型动态变化 |
| 2.5 周围神经损伤后的巨噬细胞功能 |
| 2.5.1 巨噬细胞参与神经损伤后瓦勒变性 |
| 2.5.2 巨噬细胞促进许旺细胞、成纤维细胞迁移和增殖 |
| 2.5.3 巨噬细胞促进损伤神经的血管再生 |
| 2.6 巨噬细胞极化治疗周围神经损伤 |
| 2.6.1 干细胞刺激巨噬细胞极化促进神经再生 |
| 2.6.2 信号分子刺激巨噬细胞极化促进神经再生 |
| 2.6.3 细胞外基质刺激巨噬细胞极化促进神经再生 |
| 2.6.4 电刺激使巨噬细胞极化促进神经再生 |
| 2.6.5 药物刺激巨噬细胞极化促进神经再生 |
| 2.6.6 生物材料刺激巨噬细胞极化促进神经再生 |
| 3 结论与展望Conclusions and prospects |
（2）NLRP3炎性小体在小鼠周围神经损伤中的作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 1 材料 |
| 1.1 主要仪器设备 |
| 1.2 主要试剂与材料 |
| 1.3 实验动物 |
| 2 方法 |
| 2.1 小鼠坐骨神经损伤模型的构建 |
| 2.2 RT-qPCR检测小鼠坐骨神经损伤后相关指标的m RNA水平 |
| 2.2.1 RNA的提取 |
| 2.2.2 RNA浓度的测定 |
| 2.2.3 RNA的逆转录 |
| 2.2.4 Real-time PCR反应 |
| 2.3 Western-blot检测坐骨神经损伤后相关蛋白水平 |
| 2.3.1 蛋白的提取 |
| 2.3.2 PAGE凝胶的制备(10%) |
| 2.3.3 PAGE凝胶制备(12.5%) |
| 2.3.4 电泳与转膜 |
| 2.3.5 封闭、孵抗体及显影 |
| 2.4 坐骨神经的HE、LFB染色以及免疫组化 |
| 2.4.1 标本的制备 |
| 2.4.2 坐骨神经的HE染色 |
| 2.4.3 坐骨神经的LFB染色 |
| 2.4.4 坐骨神经的免疫组化 |
| 2.5 免疫荧光检测巨噬细胞及ASC成核情况 |
| 2.6 小鼠运动功能的恢复 |
| 3 统计学分析 |
| 结果 |
| 1 坐骨神经损伤后NLRP3炎性小体被激活 |
| 1.1 小鼠坐骨神经损伤模型的成功构建 |
| 1.2 小鼠坐骨神经的HE染色情况 |
| 1.3 小鼠坐骨神经的髓鞘特异性LFB染色 |
| 1.4 坐骨神经损伤后NLRP3炎性小体相关基因的mRNA变化 |
| 1.5 坐骨神经损伤后NLRP3炎性小体相关基因的蛋白变化 |
| 1.6 坐骨神经损伤后ASC的寡聚化 |
| 2 坐骨神经损伤后NLRP3基因敲除加速神经恢复 |
| 2.1 Nlrp3~(-/-)小鼠坐骨神经LFB染色 |
| 2.2 Nlrp3~(-/-)小鼠坐骨神经HE染色 |
| 2.3 小鼠巨噬细胞标志物CD68的免疫荧光染色 |
| 2.4 Nlrp3~(-/-)小鼠炎性组分的mRNA表达情况 |
| 2.5 Nlrp3~(-/-)小鼠炎性组分的蛋白表达情况 |
| 2.6 GAP-43和p75NTR的蛋白表达情况 |
| 2.7 小鼠运动功能恢复情况 |
| 3 TLR4/NF-κB信号通路调控NLRP3的表达 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 Toll样受体与炎性小体在神经损伤中的作用研究 |
| 综述参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（3）小RNA转录组分析大鼠脊髓完全横断对坐骨神经损伤修复早期的影响（论文提纲范文）
| 中英文缩略词表 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 脊髓完全横断损伤抑制周围神经损伤修复过程 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 小RNA转录组测序分析PNI和SCI两组间差异表达的miRNA及其验证 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 周围神经损伤修复过程以及miRNA在周围神经修复中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）仿生导电人工神经支架的研究（论文提纲范文）
| 中英文缩略词对照表 |
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 多微通道导电神经支架的设计和制备及物理性能和生物相容性能检测评价 |
| 1 研究内容与方法 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二部分 聚左旋乳酸取向性纤维膜及其生物相容性的研究 |
| 1 研究方法与内容 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象及主要试剂 |
| 1.3 实验分组及方法 |
| 1.4 统计方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 仿生导电人工神经支架修复大鼠坐骨神经缺损的研究 |
| 1 研究方法与内容 |
| 1.1 主要仪器 |
| 1.2 实验对象和主要试剂 |
| 1.3 实验分组和方法 |
| 2 结果 |
| 3.讨论 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 周围神经损伤修复的细胞和分子机制研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 个人简历 |
| 导师评阅表 |
（5）α7nAChR在脊髓电刺激治疗大鼠神经病理性疼痛中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:神经病理性疼痛大鼠脊髓背角α7nAChR表达变化及其对疼痛行为学的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物分组 |
| 2.2.2 动物CCI模型建立 |
| 2.2.3 机械缩足阈值测定 |
| 2.2.4 鞘内注射 |
| 2.2.5 Western blot检测 |
| 2.2.6 ELISA |
| 2.2.7 免疫荧光染色 |
| 2.2.8 Real-time PCR检测IL-1β、TNF-α的 m RNA表达 |
| 2.2.9 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 CCI大鼠出现机械痛敏 |
| 3.2 CCI大鼠患侧脊髓背角的小胶质细胞激活增加 |
| 3.3 CCI大鼠患侧脊髓中炎症因子表达增多 |
| 3.4 CCI大鼠患侧脊髓α7nAChR的表达明显降低 |
| 3.5 鞘内注射α7nAChR激动剂可明显缓解CCI诱导的机械痛敏 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:脊髓电刺激通过抑制小胶质细胞中p38 磷酸化治疗神经病理性疼痛 |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要仪器设备 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物分组 |
| 2.2.2 动物模型制作 |
| 2.2.3 疼痛行为学检测 |
| 2.2.4 Western blot检测 |
| 2.2.5 ELISA |
| 2.2.6 免疫荧光染色 |
| 2.2.7 Real-time PCR检测IL-1β、TNF-α的表达 |
| 2.2.8 统计学处理 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 SCS示意图及X光下电极定位 |
| 3.2 脊髓电刺激可缓解CCI诱导的机械痛敏 |
| 3.3 脊髓电刺激抑制神经损伤诱导的脊髓背角小胶质细胞激活 |
| 3.4 脊髓电刺激抑制CCI大鼠脊髓中炎症因子表达 |
| 3.5 脊髓电刺激促进CCI大鼠脊髓中α7nAChR表达 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分:脊髓电刺激通过促进α7nAChR表达抑制小胶质细胞介导的神经炎症 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物分组 |
| 2.2.2 动物模型制作 |
| 2.2.3 疼痛行为学检测 |
| 2.2.4 Western blot检测 |
| 2.2.5 ELISA |
| 2.2.6 免疫荧光染色 |
| 2.2.7 Real-time PCR检测IL-1β、TNF-α的表达 |
| 2.2.8 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠脊髓背角的α7nAChR与胶质细胞和神经元共标 |
| 3.2 鞘内给予α7nAChR拮抗剂α-BGT可抑制脊髓电刺激的镇痛作用 |
| 3.3 α-BGT可拮抗SCS对小胶质细胞活化的抑制作用 |
| 3.4 α-BGT可拮抗SCS对脊髓炎症因子表达的抑制作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 神经炎症在神经病理性疼痛中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（6）神经干细胞条件培养液抑制巨噬细胞炎症及促进坐骨神经损伤修复作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 周围神经损伤 |
| 1.1.1 周围神经损伤概述 |
| 1.1.2 周围神经损伤与巨噬细胞 |
| 1.1.3 周围神经损伤的治疗进展 |
| 1.2 神经干细胞 |
| 1.2.1 干细胞概述 |
| 1.2.2 神经干细胞与神经系统疾病 |
| 1.3 Sirt-1 信号通路 |
| 1.3.1 Sirt-1 概述 |
| 1.3.2 Sirt-1 与神经炎症 |
| 1.4 结语 |
| 第二章 研究目的、内容、方法及技术路线 |
| 2.1 研究目的 |
| 2.2 研究内容 |
| 2.2.1 NSC-CM体内对SD大鼠坐骨神经损伤的影响 |
| 2.2.2 NSC-CM体外对巨噬细胞炎症状态的影响及其机制探究 |
| 2.3 研究方法 |
| 2.4 实验技术路线 |
| 2.4.1 大鼠坐骨神经挤压伤后修复作用研究 |
| 2.4.2 巨噬细胞炎症状态及其机制研究 |
| 第三章 NSC-CM对大鼠坐骨神经损伤修复和抑制巨噬细胞炎症作用及机制 |
| 3.1 材料和试剂 |
| 3.1.1 细胞来源 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.1.3 主要实验仪器设备 |
| 3.1.4 主要实验试剂 |
| 3.1.5 主要试剂配制 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 细胞培养 |
| 3.2.2 NSC-CM的收集和浓缩 |
| 3.2.3 大鼠坐骨神经挤压伤模型的建立及实验分组 |
| 3.2.4 足印分析和坐骨神经功能指数 |
| 3.2.5 HE染色 |
| 3.2.6 免疫组织化学染色 |
| 3.2.7 透射电子显微镜(TEM)分析 |
| 3.2.8 NSC-CM作用于巨噬细胞及实验分组 |
| 3.2.9 细胞总RNA提取 |
| 3.2.10 逆转录PCR |
| 3.2.11 实时荧光定量PCR |
| 3.2.12 细胞总蛋白的提取 |
| 3.2.13 Western Blot |
| 3.2.14 ELISA |
| 3.2.15 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 条件培养液最适浓度的选择 |
| 3.3.2 10×NSC-CM促进坐骨神经功能恢复 |
| 3.3.3 10×NSC-CM延缓坐骨神经损伤后靶器官萎缩 |
| 3.3.4 10×NSC-CM促进轴突和髓鞘再生 |
| 3.3.5 10×NSC-CM减少损伤后期巨噬细胞浸润及炎症因子表达 |
| 3.3.6 NSC-CM抑制巨噬细胞促炎相关蛋白的表达 |
| 3.3.7 NSC-CM通过Sirt-1 信号参与抑制巨噬细胞炎症 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 结论与展望 |
| 4.1 结论 |
| 4.2 展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文及参加会议 |
（7）针刺干预周围神经损伤后巨嗜细胞游走抑制因子表达研究（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 1.动物与分组 |
| 2.试剂 |
| 3.仪器 |
| 4.造模方法 |
| 5.模型评价 |
| 6.处理方法 |
| 7.取材 |
| 8.指标检测 |
| 8.1坐骨神经功能情况 |
| 8.2坐骨神经组织形态学观察 |
| 8.3坐骨神经MIF蛋白检测 |
| 9.统计学方法 |
| 结果 |
| 1.各组大鼠一般情况 |
| 2.造模后各组大鼠坐骨神经传导速度比较 |
| 3.针刺对实验大鼠SFI的影响 |
| 4.针刺对实验大鼠坐骨神经组织形态学的影响 |
| 4.1 HE染色观察 |
| 4.2透射电子显微镜观察 |
| 5.针刺对实验大鼠坐骨神经中MIF蛋白表达的影响 |
| 讨论 |
（8）脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经在大鼠坐骨神经缺损修复中的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 文献综述 |
| 1.1 周围神经损伤 |
| 1.1.1 周围神经系统概述 |
| 1.1.2 周围神经损伤的原因和分类 |
| 1.2 周围神经损伤修复的原理 |
| 1.2.1 周围神经损伤后轴突及雪旺氏细胞的活动 |
| 1.2.2 周围神经损伤后炎性细胞及因子的活动 |
| 1.3 周围神经损伤修复的方法 |
| 1.3.1 端端吻合修复 |
| 1.3.2 自体神经移植和异体神经移植修复 |
| 1.3.3 人工神经修复 |
| 1.4 蚕丝在组织工程领域的应用 |
| 1.5 脂多糖的作用机制以及在神经损伤修复中的应用 |
| 1.6 研究目的与意义 |
| 1.6.1 研究背景 |
| 1.6.2 研究内容 |
| 1.6.3 拟解决的关键科学问题 |
| 1.6.4 本研究的创新点 |
| 第2章 脂多糖对炎性细胞的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物分组与LPS处理 |
| 2.2.2 统计学分析 |
| 2.3 结果与讨论 |
| 2.4 小结 |
| 第3章 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的制备与手术移植 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的制备 |
| 3.2.2 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经形态结构观察 |
| 3.2.3 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经细胞毒性测试 |
| 3.2.4 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的缓释性质考察 |
| 3.2.5 动物分组及人工神经手术移植 |
| 3.2.6 统计学分析 |
| 3.3 结果与讨论 |
| 3.3.1 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的形态 |
| 3.3.2 雪旺氏细胞的培养与鉴定 |
| 3.3.3 CCK-8细胞毒性测试结果 |
| 3.3.4 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经的缓释效果 |
| 3.3.5 人工神经的手术移植 |
| 3.4 小结 |
| 第4章 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经修复大鼠坐骨神经缺损神经再生与功能重建的评价 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 大体及术部形态学观察 |
| 4.2.2 冰冻切片免疫荧光染色观察 |
| 4.2.3 石蜡切片HE染色观察 |
| 4.2.4 坐骨神经功能评估 |
| 4.2.5 统计学分析 |
| 4.3 结果与讨论 |
| 4.3.1 大体及术部形态学观察 |
| 4.3.2 免疫荧光染色观察 |
| 4.3.3 HE染色观察 |
| 4.3.4 坐骨神经功能指数 |
| 4.4 小结 |
| 第5章 脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经移植对大鼠坐骨神经炎性因子及溶酶体相关基因表达的探究 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器及实验用品 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 总RNA提取 |
| 5.2.2 RNA反转录合成c DNA |
| 5.2.3 实时荧光定量PCR |
| 5.2.4 统计学分析 |
| 5.3 结果与讨论 |
| 5.3.1 炎性细胞因子在周围神经缺损修复中的表达 |
| 5.3.2 溶酶体相关基因mRNA在周围神经缺损修复中的表达 |
| 5.4 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在校期间科研实践情况 |
（9）miR-22-3p调控CBL/p-EGFR/p-STAT3/GAP43/p-GAP43通路修复脊髓感觉传导功能的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、EGF促进成年大鼠初级感觉神经元轴突生长的能力有限 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验设备和器械 |
| 1.1.3 实验试剂 |
| 1.1.4 实验试剂配制 |
| 1.1.5 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 EGF促进初级感觉神经元轴突生长 |
| 1.2.2 敲减CBL促进初级感觉神经元中p-EGFR表达 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 二、miR-22-3p通过调控CBL/p-EGFR p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路调节成年大鼠初级感觉神经元轴突生长 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验设备和器械 |
| 1.1.3 实验试剂 |
| 1.1.4 双荧光素酶报告实验报告质粒准备 |
| 1.1.5 靶向CBL蛋白miRNA预测数据库 |
| 1.1.6 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 miR-22-3p可以靶向抑制CBL |
| 1.2.2 miR-22-3p抑制CBL mRNA的表达 |
| 1.2.3 p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路是p-EGFR主要的下游通路 |
| 1.2.4 p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路是miR-22-3p/CBL/p-EGFR调节初级感觉神经元轴突生长主要的下游通路 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 三、miR-22-3p通过调节CBL/p-EGFR/p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路修复成年大鼠脊髓后索损伤后感觉传导功能恢复 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验设备 |
| 1.1.3 实验器械 |
| 1.1.4 实验试剂 |
| 1.1.5 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 miR-22-3p在体内调节CBL/p-EGFR/p-STAT3/GAP43/p-GAP43信号通路 |
| 1.2.2 miR-22-3p促进脊髓后索损伤后传导功能恢复 |
| 1.3 讨论 |
| 1.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 EGFR在脊髓损伤中的作用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（10）周围神经损伤后大鼠神经断端组织中微小RNA-221和PTEN表达变化研究（论文提纲范文）
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 英文缩略语表 |
| 前言 |
| 实验材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 MiR-221在周围神经损伤后修复的调控作用 |
| 参考文献 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
四、巨噬细胞移动抑制因子在大鼠坐骨神经损伤后表达的变化（论文参考文献）
- [1]损伤周围神经的微环境中巨噬细胞极化成M2表型可有效促进其再生[J]. 胡涛涛,常树森,魏在荣. 中国组织工程研究, 2022(14)
- [2]NLRP3炎性小体在小鼠周围神经损伤中的作用研究[D]. 崔梦丽. 青岛大学, 2021(02)
- [3]小RNA转录组分析大鼠脊髓完全横断对坐骨神经损伤修复早期的影响[D]. 蒋玲丽. 遵义医科大学, 2021
- [4]仿生导电人工神经支架的研究[D]. 刘振辉. 新疆医科大学, 2021(08)
- [5]α7nAChR在脊髓电刺激治疗大鼠神经病理性疼痛中的作用及机制研究[D]. 陶学恕. 中国医科大学, 2021(02)
- [6]神经干细胞条件培养液抑制巨噬细胞炎症及促进坐骨神经损伤修复作用研究[D]. 陈天琰. 江苏大学, 2020(02)
- [7]针刺干预周围神经损伤后巨嗜细胞游走抑制因子表达研究[J]. 陈怡然,佟欣鑫,杨书蔚,李文新,马铁明. 中华中医药杂志, 2020(05)
- [8]脂多糖/蚕丝纤维/PLA复合人工神经在大鼠坐骨神经缺损修复中的作用[D]. 辛旺. 西南大学, 2020(01)
- [9]miR-22-3p调控CBL/p-EGFR/p-STAT3/GAP43/p-GAP43通路修复脊髓感觉传导功能的实验研究[D]. 李波. 天津医科大学, 2020(06)
- [10]周围神经损伤后大鼠神经断端组织中微小RNA-221和PTEN表达变化研究[D]. 张臣鸣. 锦州医科大学, 2020(05)