一、龟板对局灶性脑缺血后神经干细胞的作用（论文文献综述）
高云云[1]（2021）在《电针调控miR-210-3p经AKT/mTOR信号通路对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响》文中研究指明目的:探讨电针对MCAO大鼠血管新生的调控作用,以miR-210-3p及AKT/mTOR信号通路为切入点,探讨3个时相（3 d、7 d、14 d）下电针对于miR-210-3p、AKT/mTOR通路因子相互作用的调控作用,以期进一步阐述电针调控脑缺血后血管新生的可能机制,为揭示miRNAs作为潜在作用途径的脑缺血防治提供新思路。方法:将160只清洁级雄性（Sprague Dawley,SD）大鼠随机取假手术组36只,余124只大鼠建立MCAO模型,将符合评分标准的108只大鼠随机分为3组:模型组、电针组、电针+抑制剂组（简称抑制剂组）分别36只,上述4组大鼠,再分为3 d、7 d、14 d三个时相组,每组12只。电针组选“百会”、“大椎”两穴,用0.30*25 mm毫针针刺,电针参数:疏密波,频率为5～100 Hz,电流1～2 m A,强度以引起穴位周围组织轻微颤抖为度,治疗时长为20 min。首次治疗于术后4 h开始,每日1次,分别连续治疗3 d、7 d、14 d。抑制剂组予以特异性抑制剂雷帕霉素腹腔注射,浓度为0.1 mg/ml,每次0.3 mg/kg,每日1次,再进行电针治疗（方法同电针组）。随后进行神经功能缺损评分（modified neurological severity scores,m NSS）评估四组大鼠的神经功能损伤;运用激光多普勒血流仪测定插线后5 min、3 d、7 d、14 d局部脑血流量;HE染色观察脑组织病理改变;Western Blot检测AKT/p-AKT/mTOR/p-mTOR蛋白表达;RT-q PCR检测miR-210-3p、Ephrin A3、AKT、mTOR m RNA表达;运用免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHC）测定CD31+表达,Weidner法计数缺血侧皮质区微血管密度（Microvessel Density,MVD）。结果:1.改良大鼠神经功能缺损评分（mNSS）假手术组在术后四个时间段（4 h、3 d、7 d、14 d）神经功能缺损评分均为0分;模型组与电针组比较,电针组神经功能评分均低于模型组,干预7 d、14 d时较为显着（P<0.01）;模型组与抑制剂组相比,干预3 d、7 d、14 d神经功能缺损程度均无统计学意义;干预14 d后,电针组与抑制剂组相比,神经功能缺损评分显着降低（P<0.01）。2.局部脑血流量（rCBF）假手术组大鼠的局部脑血流量在四个时间段下（5 min、3 d、7 d、14 d）约稳定在130 Pu左右,与假手术组相比,模型组大鼠术后四个时间段血流量均明显低于假手术组（P<0.01）;与模型组相比较,电针组和抑制剂组在干预5 min、3 d时,无统计学意义（P>0.05）,干预7 d、14 d时,电针组与抑制剂组局部脑血流量均明显高于模型组,具有显着性差异（P<0.05）,其中7 d时具有具有极显着差异（P<0.01）;电针组与抑制剂组比较,干预7 d、14 d时脑血流量均增高,7 d时具有极显着性差异（P<0.01）,14 d时局部脑血流量持续增高,具有显着性差异（P<0.05）。3.脑组织病理学观察（HE染色）假手术组大鼠在3个时间段缺血侧皮质区脑组织结构完整,神经元排布有序,存在极少量空泡,细胞核清晰完整。模型组大鼠缺血侧皮质区脑组织可见大量空泡,间质水肿明显,神经元细胞排列不紧密,结构疏松呈网状,数量明显减少,大量神经元细胞凝聚。术后14 d,脑组织损伤程度较3 d、7 d进一步减轻。不同时间段下电针及抑制剂组大鼠缺血侧皮质区脑组织均有不同程度的改善。4.Western Blot检测AKT/p-AKT/mTOR/p-mTOR蛋白表达假手术组各个时间段,大鼠缺血侧皮质区有少量的AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR表达。与假手术组比较,模型组中p-AKT的表达在各个时间段持续增加（P<0.05）,在14 d达到高峰;AKT、mTOR的表达在3 d达到高峰（P<0.01）;p-mTOR的表达在7 d达到高峰（P<0.01）。与模型组比较,电针组3 d、7 d、14 d中AKT/p-AKT/mTOR/p-mTOR表达显着增高（P<0.01）,AKT和p-AKT的表达在14d达到高峰,mTOR和p-mTOR的表达在各个时间明显增加（P<0.01）,在7 d达到高峰;抑制剂组中各个时间Akt/p-AKT/mTOR/p-mTOR的表达降低（P<0.05）。5.RT-q PCR检测miR-210-3p/Ephrin A3及AKT/mTORm RNA表达假手术组大鼠缺血侧皮质区miR-210-3p/Ephrin A3/AKT/mTOR mRNA呈少量表达。模型组miR-210-3p/Ephrin A3/AKT/mTOR mRNA相对表达量在3 d、7 d、14d较假手术组均显着增高,且具有极显着性差异（P<0.01）。治疗3 d、7 d、14 d后,电针组miR-210-3p mRNA相对表达量较模型组均显着升高,具有极显着性差异（P<0.01）,Ephrin A3 mRNA相对表达量均降低,具有显着性差异（P<0.05或P<0.01）。抑制剂组与电针组不同时间比较,miR-210-3p mRNA相对表达量均降低（P<0.01）,Ephrin A3 mRNA相对表达量均升高（P<0.05）。与模型组比较,电针组、抑制剂组大鼠干预7 d、14 d后AKT/mTOR m RNA的相对表达量均显着高于模型组（P<0.05或P<0.01）,电针组与抑制剂组比较,AKT/mTOR mRNA的相对表达量均显着增高（P<0.01）。6.微血管密度（MVD）测定假手术组三个时间段下仅见少量CD31+阳性表达。与假手术组比较,模型组大鼠缺血侧皮质区脑组织中的CD31+阳性细胞数量表达均显着增高（P<0.05或P<0.01）;电针组与模型组比较,CD31+阳性细胞数量表达显着增多（P<0.01）,在14 d时CD31+阳性细胞数量表达达到高峰;抑制剂组与假手术组比较,3 d时无统计学意义（P>0.05）,干预7 d、14 d电针组与抑制剂组CD31+阳性细胞数量表达具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.电针促进MCAO大鼠神经功能的重建、改善大脑局部脑血流量,改善MCAO大鼠缺血侧皮质区脑组织病理变化。2.电针可调节MCAO大鼠缺血侧皮质区脑组织miR-210-3p及其靶向信使Ephrin A3的表达;上调AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、CD31+相对表达,提示miR-210-3p可能特异性调节AKT/mTOR信号通路,在脑缺血恢复中促进血管新生,这可能是电针促进脑缺血后血管新生的相关机制之一。
邵亚丽[2]（2020）在《梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究》文中研究表明背景梓醇是中药地黄的主要有效成分之一,既往研究表明,梓醇在脑缺血急性期给药具有神经保护作用,能够改善脑缺血大鼠神经行为学功能,促进缺血区周围血管新生和成体神经干细胞增殖存活,但梓醇延迟给药对于脑缺血大鼠的效应以及对神经干细胞的分化作用暂未研究。基于治疗脑缺血疾病药物匮乏的现状,且目前唯一公认有效的静脉溶栓药物组织型纤溶酶原激活剂（tissue plasminogen activator,t PA）的治疗时间窗狭窄（3-4.5 h）,该时段内极大多数患者不能及时就医。梓醇作为缺血性脑损伤的潜在保护剂,如果在t PA治疗时间窗外能够保护缺血脑区及周围组织,研究其药效学作用及对新生神经干细胞的分化作用,具有重要的科学价值和临床意义。本课题受国家自然科学基金项目（81873034）资助。目的观察梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的神经行为学影响以及神经新生效应和神经干细胞分化作用研究。方法1.SD大鼠随机分为6组,分为假手术组,模型组,造模后6 h首次给药组（5 mg/kg和10 mg/kg）,造模后4 d首次给药组（5 mg/kg和10 mg/kg）,电凝法制备局灶性永久性脑缺血（permanent middle cerebral artery occlusion,p MCAO）模型,给药组腹腔注射梓醇,对照组注射同等剂量生理盐水,每日一次,连续7天。各组大鼠分别于给药后1,4,7,14,21,28天进行体重测量及Bederson评分,神经功能缺损评分（modified neurologic severity score,m NSS）,肌力测试评分（muscle strength）,对神经功能恢复进行评价。2.结合Brd U体内标记细胞增殖,梓醇给药7,14,21,28天后各组大鼠取材,免疫荧光双标Brd U/Nestin检测室管膜下区（subventricular zone,SVZ）神经干细胞增殖存活情况,Brd U/GFAP,Brd U/DCX和Brd U/Neu N荧光双标检测神经干细胞分化为星形胶质细胞及神经元情况;免疫印迹法（Western Blot,WB）检测各组损伤侧SVZ区Nestin/DCX以及损伤侧皮层GFAP和Neu N的蛋白表达。3.由于新生鼠SVZ数量少且难以分离,本研究选择原代培养24 h内新生鼠海马区神经干细胞,进行纯化鉴定,Brd U标记细胞增殖,cck-8检测不同浓度的梓醇对神经干细胞活力的影响,加入分化培养基诱导干细胞分化,免疫荧光MAP-2,GFAP,MBP检测细胞分化,WB检测分化表型相关蛋白的表达。结果1.成功制备局灶性脑缺血模型,梗死体积为9.62±2.43%。行为学实验结果表明,梓醇给药组不同程度促进脑缺血大鼠体重增长,降低脑缺血大鼠Bederson和神经功能缺损评分,提高肌力测试评分,6h,5mg/kg组肌力测评分在14天时有显着差异（P<0.05,vs model）,21天时各组神经功能基本恢复至假手术水平,各给药组间无显着差异（P>0.05,vs sham）。2.梓醇给药后不同时点促进局灶永久性脑缺血大鼠损伤侧SVZ区神经干细胞增殖存活,Brd U/Nestin荧光结果提示脑区成体神经干细胞存在的事实。脑缺血后7天及14天,星形胶质细胞数量显着增加（P<0.05,vs model）,新生神经干细胞与神经元数量与模型组相比显着增加（P<0.05,vs model）,14天时DCX表达增强,6 h,5 mg/kg剂量组与模型组相比有显着差异（P<0.05,vs model）,其余给药组与假手术相比有显着差异（P<0.05,vs sham）,21天时各给药组GFAP表达降低,Nestin,Neu N表达增强,与模型组相比有显着差异（P<0.05,vs model）,与行为学结果基本一致。3.海马神经干细胞培养7 d后可增殖为直径为200μm左右的神经球,神经球呈现Brd U/Nestin免疫双标阳性;cck-8筛选出促进神经干细胞生长的梓醇浓度为0.1,1,10,100μM;用不同浓度的梓醇诱导P3代神经干细胞分化7天,可见MAP-2阳性的神经元,GFAP阳性的星形胶质细胞及MBP阳性表达的少突胶质细胞;10μM梓醇促进NSCs向神经元方向分化,0.1μM促进向星型胶质细胞方向分化。结论1.梓醇延迟给药促进局灶性永久性脑缺血大鼠体重增长,改善神经行为学评分。2.梓醇延迟给药促进局灶性永久性脑缺血大鼠损伤侧SVZ区神经干细胞增殖,促进缺血区域附近神经元存活,减少星形胶质细胞增殖。3.原代培养的海马神经干细胞具有旺盛的自我增殖和多向分化潜能,梓醇对神经干细胞向神经元和胶质细胞分化的作用有剂量效应。
李玉[3]（2020）在《益气活血通络法对局灶性脑缺血/再灌注大鼠rCBF及GRB7、VEGFR2蛋白表达的影响》文中研究表明目的以“气血—脑髓”相关的中医理论为基础,在课题组前期SCF/c-kit信号通路的基因芯片检测结果之上,对具有差异的结果深入探究;选用益气活血通络法及其代表方脑络欣通对模型大鼠进行干预,治疗给药后第3d、7d、14d三个时间点动态检测,模型大鼠缺血侧局部脑血流量及GRB7、VEGFR2指标的变化,探讨脑络欣通对局灶性脑缺血后血管再生影响及其作用机制。方法实验分为两部分进行即实验一与实验二。共选用96只健康雄性SD大鼠,体重300±20g,按照随机数值表法分为假手术组（J组）、模型组（M组）、通心络组（T组）和脑络欣通组（N组）,每组共24只,再分设3d、7d、14d三个亚组,每组8只。采用改良线栓法建立了大鼠大脑右侧中动脉缺血再灌注（MCAO/R）模型,并从局部脑血流量、神经功能体征等指标对模型进行了评价。造模成功结束2h后拔鱼线行脑缺血再灌注,根据Zea Longa评价标准,选用2分或3分者。以脑络欣通5.04g/kg及通心络0.50g/kg剂量每天灌胃2次,第3d、7d、14d后?进行4%多聚甲醛心脏内灌注固定后,开颅取脑。实验一:免疫组化Envision二步法测定各组大鼠缺血侧额顶叶皮质区GRB7、VEGFR2阳性表达面积。实验二:激光多普勒法检测MCAO/R大鼠造模成功后10min及治疗后缺血侧皮质梗死部位r CBF变化。实验结果,显微镜400倍视野下皮质区选4个相近区域摄片,采用南京捷达DP801形态学显微图像分析系统分析处理,使用IBM SPSS Statistics24.0软件对数据进行重复测量多因素方差分析,计量资料Mean±S表示,每个时间点各组之间比较用多变量方差分析,P<0.05示具有统计学差异,P<0.01示差异具有显着性。结果实验一1.检测结果显示:在缺血部位额顶叶皮质区,GRB7蛋白呈棕黄色,主要表达在缺血部额顶叶皮质区神经细胞和内皮细胞胞核及胞浆中。J组有少量表达,与J组相比较,M组GRB7阳性表达量增加,且表达的阳性面积有差异（P<0.05）;与M组相比较,N组GRB7表达增多,阳性表达面积具有显着差异（P<0.01）;与T组比较,N组GRB7表达阳性表达面积差异无统计学差异（P>0.05）。2.检测结果显示:在缺血部额顶叶皮质区,VEGFR2蛋白阳性表达呈棕黄色,主要表达在血管内皮细胞胞膜及神经元细胞胞浆和突起中。J组脑缺血侧额顶叶皮质区VEGFR2蛋白在三个不同时间点均有少量阳性表达,与J组相比,M组VEGFR2阳性表达面积增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;与M组相比,N组VEGFR2蛋白相应时间点表达均显着增高（P<0.01）。与T组比,N组VEGFR2表达阳性表达面积差异无统计学差异（P>0.05）。实验二激光多普勒检测MCAO/R大鼠造模成功后10min,与J组比较,M组、T组、N组相应的第3d、7d、14d三个时间点脑血流量显着降低,差异具有显着性（均P<0.01）;而其他3组相比较,差异无统计学意义（均P>0.05）。MCAO/R大鼠治疗干预后,J组3d、7d、14d三个时间点脑血流量均较前轻微升高,而M组、T组、N组较治疗前三个时间点均明显升高;治疗后M组仍显着低于J组,而J组与T组、N组比较差异无统计学意义（P>0.05）;与M组比较,N组相应三个时间点均显着升高（P<0.01）;与T组相比,N组r CBF差异无统计学意义（P>0.05）。结论益气活血通络法及其代表方脑络欣通可以通过上调脑缺血侧额顶叶皮质区GRB7、VEGFR2蛋白的表达,调节SCF/c-kit信号通路,促进脑缺血后血管再生,提高脑缺血侧皮质梗死部位脑血流量,抗脑缺血损伤。
雷梦南[4]（2020）在《益气活血通络法对局灶性脑缺血再灌注大鼠CD133、Vav1蛋白表达的影响》文中研究指明目的基于课题组前期的理论与实验研究,以SCF/c-kit信号通路为切入点,通过观察益气活血通络法对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠额顶叶皮质缺血半暗带区CD133、Vav1蛋白表达及缺血半暗带区局部脑组织血流量的变化,探讨益气活血通络法对脑缺血再灌注血管再生的影响,为临床该治法合理应用提供实验依据。方法健康4月龄雄性Sprague Dawley（SD）大鼠84只,体质量（300±20）g,适应性饲养一周后,随机分为假手术组（Sham Operation Group,SOG）、模型组（Model Group,MG）、通心络组（Tongxinluo Group,TXLG）和脑络欣通组（Naoluoxintong Group,NLXTG）,每组21只,根据其治疗时间的不同,各组再分为3d、7d、14d三个亚型组,每个亚型组7只。SOG仅进行动脉分离术,剩余三组采用线拴法复制局灶性脑缺血再灌注大鼠模型-右侧大脑中动脉闭塞,以Longa评分判断模型复制是否成功,神经缺损体征评分以2～3分者选为本次实验的动物。按照人与大鼠体表面积折算系数进行计算药物的等效剂量,得出脑络欣通和通心络的给药剂量分别为5.04g/kg、0.50g/kg,于每日上午9:00时、下午4:00时各灌胃一次。进行不同时间的治疗后,4%多聚甲醛心脏灌流内固定,开颅取脑,以备检测。采用激光多普勒血流仪分别测定各组大鼠右侧脑部缺血区插线后5min和治疗后的局部脑血流量（r CBF）;采用免疫组化En Vision二步法分别对不同组别不同治疗时间大鼠额顶叶皮质缺血半暗带区CD133、Vav1蛋白表达的阳性面积进行检测。所得的计量资料用均数±标准差（?x±s）表示,用软件Graph Pad Prism 7.00进行统计数据的分析及图形的制作,统计表采用软件Word2016进行制作。结果1)CD133的变化免疫组化的结果显示:在400倍显微视野下,CD133主要表达在大脑缺血梗死灶周围中、小血管内皮细胞胞浆中。与SOG比较,MG的额顶叶皮质缺血半暗带区CD133蛋白表达的阳性面积在3d、7d、14d均显着增高（P<0.01）;与MG比较,TXLG及NLXTG的额顶叶皮质缺血半暗带区CD133蛋白表达的阳性面积3d、7d和14d均显着增加（P<0.01）;与TXLG比较,NLXTG额顶叶皮质缺血半暗带区CD133蛋白表达的阳性面积在3d无统计学意义（P>0.05）,7d和14d有所增加（P<0.01）。2)Vav1的变化免疫组化的结果显示:在400倍显微视野下,Vav1主要表达在神经元细胞核膜上。与SOG比较,MG的额顶叶皮质缺血半暗带区Vav1蛋白表达的阳性面积在3d、7d和14d均显着增加（P<0.01）;与MG比较,TXLG及NLXTG的额顶叶皮质缺血半暗带区Vav1蛋白表达的阳性面积在3d、7d、14d均显着上升（P<0.01）;与TXLG比较,NLXTG的Vav1蛋白表达阳性面积在3d、7d和14d的差异无统计学意义（P>0.05）。3)局部脑血流量各组实验大鼠按操作复制模型,在插线后5min经激光多普勒血流仪检测模型大鼠右侧缺血区局部脑血流量。与SOG比较,MG、TXLG、NLXTG的3d、7d、14d各组全部大鼠插线后5min的r CBF明显降低,差异有统计学意义（P<0.01）;其余各组比较无统计学意义（P>0.05）。各组实验大鼠经过不同时间点采用不同药物灌胃治疗后,经激光多普勒血流仪检测模型大鼠右侧缺血区局部脑血流量。与SOG比较,MG治疗后3d、7d、14d的r CBF显着下降（P<0.01）;与MG比较,TXLG和NLXTG治疗后3d、7d、14d的r CBF显着上升（P<0.01）;与TXLG比较,NLXTG治疗后3d、7d、14d的r CBF无统计学意义（P>0.05）。结论1)益气活血通络法（脑络欣通）能上调额顶叶皮质缺血半暗带区CD133蛋白的表达,使脑缺血后血管再生数量在一定程度上有所增加;2)益气活血通络法（脑络欣通）通过上调Vav1蛋白的表达,激活造血细胞表达,使血管再生功能有所提高;3)益气活血通络法（脑络欣通）能改善缺血再灌注后缺血半暗带区脑部血流量的变化,促进半暗带区域血流的增加。因此,益气活血通络法（脑络欣通）能调节SCF/c-kit信号通路,促进缺血半暗带区血管再生,增加血流供应,抗脑缺血损伤,促进神经结构与功能恢复。
童明月[5]（2020）在《电针联合康复训练通过干预Ang/Tie-2信号通路相关因子表达对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响》文中研究说明目的:观察在不同时间节段下电针联合丰富康复训练干预Ang/Tie-2信号转导通路相关因子血管生成素-1（angiopoietin-1,Ang-1）、内皮细胞特异性酪氨酸激酶受体（endothelium-specific receptor tyrosine kinase 2,Tie-2）表达的影响,研究在不同时间节段、不同干预方法下,局灶性脑缺血大鼠缺血侧神经功能恢复与血管新生的情况差异,并探讨可能存在的作用机制。以便将传统的针灸方法与现代康复技术相结合,并提供实验依据,以期可在临床上进行有效合理的使用。方法:1.从实验动物中心购入170只清洁级雄性Sprague Dawley（SD）大鼠,通过随机数字表法,将其中的27只大鼠划分为假手术组,剩余的143只大鼠通过Zea Longa改良线栓法建立MCAO模型。然后筛选出符合双重评分标准的108只大鼠,随机分为4组,模型组（27只）、电针组（27只）、康复组（27只）和针刺联合康复训练组（简称针康组）（27只）,根据疗程的不同,将五组再细化分为3天、7天、14天,三个时间段。2.治疗组大鼠于术后麻醉清醒时（约在术后2-3小时）即可进行干预治疗。电针组与电针联合康复组（针康组）选取“百会”“风府”,辅以“内关”“心俞”作为刺激穴位;康复组与针康组同样于术后2-3小时进行康复疗法干预,提供丰富康复环境和康复运动训练;假手术组与模型组常规喂养,不进行任何治疗。五组大鼠连续治疗或喂养3天、7天、14天后,取材观察。3.采纳两种类型神经功能缺损体征评分（Zea Longa的5分制评分标准和改良m NSS16分制评分）在术后四个时间节段（4小时、3天、7天、14天）评估五组大鼠神经功能损伤和恢复情况;利用激光多普勒血流仪观察五组实验大鼠在四个时间节段（插线后5分钟,干预3天、7天、14天）局部脑血流量;利用TTC染色法观察脑组织的受损区域;通过HE染色法观察五组大鼠在三种不同时间节段（干预3天、7天、14天）缺血区大脑皮层病理学改变;采用Western Blot、RT-q PCR观察五组大鼠在三种不同时间节段（3天、7天、14天）、不同干预方式下（电针、康复训练、电针联合康复训练）Ang-1和Tie-2蛋白与基因表达情况;通过免疫组化法和Weidner法观察微血管密度。结果:1.神经功能缺损评分1.1 Zea Longa的5分制评分假手术组术后四个时间节段（4小时、3天、7天、14天）的大鼠按照评分标准分值均为0分,与假手术组相比,模型组大鼠术后四个时间节段评分均高于假手术组（P<0.01）,并且随时间节段的增加呈逐渐降低趋势;与模型组相比较,电针组和康复组在干预4小时、3天时无显着性差异（P>0.05）,干预7天、14天时评分均低于模型组有极显着性差异（P<0.01）;针康组与模型组比较,3天、7天、14天三个时间段评分均低于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与电针组、康复组比较,术后4小时时无明显差异（P>0.05）,在干预3天时,针康组评分低于电针组（P<0.05）,与康复组差异无统计学意义（P>0.05）,7天、14天时针康组评分均低于电针组与康复组,有明显差异（P<0.05或P<0.01）;电针组与康复组比较,4小时、3天、7天、14天四个时间节段均无明显差异（P>0.05）。且从总体趋势观察,随着电针联合丰富康复训练治疗手段干预期的延长,大鼠神经功能恢复状态愈佳。1.2改良m NSS16分制评分标准术后,假手术组四个时间节段下（4小时、3天、7天、14天）大鼠的评分均为0分,与假手术组比较,模型组大鼠术后四个时间节段评分均高于假手术组（P<0.01）并且随时间节段的延长呈逐渐降低趋势;电针组、康复组与模型组比较,术后4小时差异无统计学意义（P>0.05）,干预3天、7天、14天时评分均低于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与模型组比较,3天、7天、14天三个时间段评分低于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与电针组、康复组比较,干预4小时、3天时无明显差异（P>0.05）,干预7天、14天评分低于电针组与康复组,有明显差异（P<0.05或P<0.01）;电针组与康复组比较,4小时、3天、7天、14天四个时间段均无明显差异（P>0.05）。2.局部脑血流量（r CBF）术后,假手术组四个时间节段下（5分钟、3天、7天、14天）的大鼠脑血流量约稳定在200Pu左右,与假手术组相比,模型组大鼠术后四个时程血流量均低于假手术组（P<0.01）;与模型组相比较,电针组和康复组在干预5分钟、3天时无显着性差异（P>0.05）,干预7天、14天时血流量高于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与模型组比较,3天、7天、14天三个时间段脑血流量均高于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与电针组、康复组比较,术后5分钟时无明显差异（P>0.05）,干预3天、7天、14天时针康组大鼠脑血流量高于电针组与康复组,有极显着性差异（P<0.01）;电针组与康复组比较,5分钟、3天、7天、14天四个时间段均无明显差异（P>0.05）。3.病理组织学观察假手术组:大鼠缺血灶区域脑组织的细胞结构未见明显缺失,血管内皮细胞、胶质细胞排列有序,结构紧密、层次分明,脑组织内神经细胞胞浆丰富、核仁清晰无明显深染情况,神经元;术后3天组:改变最为明显,四组（模型组、电针组、康复组、针康组）都呈现间质水肿,神经细胞肿胀且疏密不均,神经细胞深染,四组镜下暂时未见明显差异;术后7天组:电针组与康复组脑组织间隙减少,倾向轻微排序状态,与模型组相比脑组织损伤后间质水肿等情况明显减轻,修复程度较好,针康组较其他组有明显减轻;术后14天组,三组治疗组的缺血脑组织内细胞的水肿情况可见显着改善,细胞结构、数量日趋正常化可见清晰胞核在其中,层次分明,排列有序,形态和数量分布趋于正常,胞浆均匀,损伤程度较其他时间点治疗组显着减轻。其中针康组在相同的治疗时间下改善情况最为明显。4.Western Blot检测Ang-1、Tie-2蛋白表达量术后,假手术组三个时间节段下（3天、7天、14天）大鼠缺血侧血管生成素-1（Ang-1）与内皮细胞特异性酪氨酸激酶受体（Tie-2）未见明显改变;与假手术组比较,模型组大鼠术后三个时间段Ang-1、Tie-2表达量均高于假手术组,并具有统计学意义（P<0.01）;治疗组中电针组、康复组与模型组比较,干预3天、7天、14天时电针组与康复组Ang-1、Tie-2表达量均高于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与模型组比较,干预3天、7天、14天三个时间段Ang-1、Tie-2表达量均高于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与电针组、康复组比较,干预3天、7天、14天时Ang-1、Tie-2表达量高于电针组与康复组,有明显差异（P<0.05或P<0.01）;电针组与康复组比较,3天、7天、14天三个时间段均无明显差异（P>0.05）。5.RT-q PCR检测Ang-1m RNA、Tie-2 m RNA表达量术后,假手术组三个时间节段下（3天、7天、14天）大鼠缺血侧Ang-1m RNA、Tie-2 m RNA未见明显改变;与假手术组比较,模型组大鼠术后三个时间段Ang-1m RNA、Tie-2 m RNA表达量均高于假手术组（P<0.01或P<0.05）;治疗组中电针组、康复组与模型组比较,干预3天、7天、14天时Ang-1m RNA、Tie-2 m RNA表达量高于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与模型组比较,干预3天、7天、14天时Ang-1m RNA、Tie-2 m RNA表达量高于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与电针组、康复组比较,干预3天、7天、14天Ang-1m RNA、Tie-2 m RNA表达量均高于电针组与康复组,有明显差异（P<0.05或P<0.01）;电针组与康复组的Ang-1m RNA表达量相比,干预7天时两组无明显差异（P>0.05）,干预3天、14d天时电针组低于康复组（P<0.05）;电针组与康复组的Tie-2 m RNA比较,3天、7天、14天三个时间段均无明显差异（P>0.05）。6.免疫组织化学（IHC）检测Ang-1、Tie-2阳性细胞的表达术后,假手术组三个时间节段下（3天、7天、14天）大鼠缺血侧Ang-1、Tie-2阳性细胞未见明显改变,都仅有微量表达;与假手术组比较,模型组大鼠术后三个时间节段Ang-1、Tie-2阳性细胞数高于假手术组（P<0.01或P<0.05）;电针组、康复组与模型组比较,干预3天、7天、14天时Ang-1、Tie-2阳性细胞数高于模型组,有极显着性差异（P<0.01或P<0.05）;针康组与模型组比较,干预3天、7天、14天时Ang-1、Tie-2阳性细胞数高于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与电针组、康复组比较,干预3天、7天、14天Ang-1、Tie-2阳性细胞数均高于电针组与康复组,有明显差异（P<0.01）;电针组与康复组比较,3天、7天、14天三个时间段均无明显差异（P>0.05）。7.微血管密度（MVD）术后,假手术组三个时间节段下（3天、7天、14天）大鼠缺血侧微血管密度（MVD）未见明显改变,都仅有微量表达;与假手术组比较,模型组大鼠术后三个时间段微血管密度（MVD）高于假手术组（P<0.01或P<0.05）;电针组、康复组与模型组比较,干预3天、7天、14天时微血管密度高于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与模型组比较,干预3天、7天、14天时微血管密度高于模型组,有极显着性差异（P<0.01）;针康组与电针组、康复组比较,干预3天、7天、14天微血管密度较高,有明显差异（P<0.05或P<0.01）;电针组与康复组比较,3天时无明显差异（P>0.05）,干预7天、14天时康复组高于电针组有差异（P<0.05或P<0.01）。结论:1.三种治疗方式（电针、康复训练、电针联合康复训练）可促进MCAO大鼠神经功能损伤修复,增加损伤侧血流供应,恢复脑组织功能、并对损伤侧脑组织有显着的病理学改善。联合疗法疗效优于单一疗法,电针与康复相结合可起到互相辅助互为补充的最佳效果2.电针联合康复训练能够上调Ang/Tie-2信号通路上Ang-1、Tie-2的表达量,增加缺血区微血管密度,促进损伤侧脑区的血管新生,联合疗法优于单纯电针疗法与康复疗法。
及晓梦[6]（2019）在《柔肝通络汤对缺血性脑损伤大鼠内源性干细胞表达的影响》文中提出目的:观察柔肝通络汤对缺血再灌注脑损伤大鼠内源性神经干细胞增殖分化的表达影响。方法:采用改良Longa法制作大鼠大脑中动脉堵塞（MCAO型）所致缺血再灌注脑损伤模型;将120只SD雄性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组（蒸馏水灌胃）和柔肝通络汤（柔肝通络汤灌胃）组,其中按照缺血2h再灌注6h、1d、3d、7d、14d各分为5个亚组,每组6只。动态观察各时间点大鼠神经功能学评分;腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-bromo-2-deoxy uridine,BrdU）标记脑组织内增殖细胞,分别采用BrdU/NeuN神经元核抗原（neuronal nuclei antigen,Neu N）、BrdU/GFAP胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidicprotein,GFAP）标记大脑皮质缺血区域新生神经元和星形胶质细胞,并计算阳性细胞数目。结果:与模型组比较,柔肝通络汤组术后3d、7d、14d神经功能缺损评分明显降低（P<0.05）;柔肝通络汤组BrdU、BrdU/NeuN的阳性细胞数目均明显升高（P<0.05）,BrdU阳性细胞数在第7天达到高峰,随后呈下降趋势,BrdU/NeuN在第3-7天增加迅速,第7天后增加缓慢;给药后BrdU/GFAP的阳性细胞数较模型组减少（P<0.05）。结论:柔肝通络汤可以促进缺血再灌注脑损伤大鼠内源性神经干细胞增殖,并分化为成熟神经元,同时抑制星形胶质细胞的过度增殖,促进神经再生和修复,改善神经功能。
范婧婧[7]（2018）在《两种中医治法对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管再生及其SCF/c-kit信号调节通路的影响》文中指出目的本实验在课题组前期研究工作的基础上,基于缺血性中风气血相关及肾精脑髓相关理论,建立局灶性脑缺血再灌注大鼠模型,应用新安王氏内科医家两种经验治法（益气活血通络法、补肾生髓法）及其代表性中药验方（益气活血通络方、补肾生髓方）,对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠进行干预,以脑缺血后血管再生及其SCF/C-kit信号调节通路为研究切入点,采用免疫组化二步法、Western blot检测方法,观察缺血侧皮质区血管再生情况和SCF、C-kit、CD34、VEGF和Ang-1指标变化,以探讨SCF/C-kit信号通路在脑缺血血管再生中的作用及两种中医治法对血管再生及其SCF/C-kit信号调节通路的影响及其作用机制,为两种中医治法及方药在临床上的合理应用提供实验依据。方法健康雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠72只,月龄4个月,体重280320g。随机法将SD大鼠分为:假手术组、模型组、益气活血通络法组和补肾生髓法组,4组大鼠,每组各18只。采用改良线栓法建立MCAO/R大鼠右侧脑缺血模型,经神经缺损体征的评定,2分或3分者入选。心脏内灌流固定的脑组织,进行冠状切片,采用免疫组化Envision二步法检测各组大鼠缺血侧额顶叶皮质区CD34、VEGF、Ang-1蛋白表达的阳性面积和平均吸收光密度的变化。采用Western Blot法,检测大鼠局灶性脑缺血侧额顶叶皮质区SCF、C-kit蛋白表达变化。采用DP801形态学显微图像分析系统进行免疫组化图像分析,采用AIC.Alpha View系统进行Western Blot结果分析,统计并记录所有数据。采用SPSS18.0进行整理并分析,计量资料使用Mean±S进行表示,多组间多时间点均值比较采用重复测量方差分析进行比较,同个时间不同组间比较采用单因素方差分析;如总体间差别有统计学意义,采用LSD进行两两比较,同组不同时间点比较采用单变量重复测量方差分析进行比较,如果组间总体差别具有统计学意义,则采用Bonferroni（B）进行事后两两比较;假设检验水平设定为0.05。使用EXCEL2007软件进行统计图、表的制作。结果（1）两种中医治法对模型大鼠额顶叶皮质区CD34、Ang-1和VEGF蛋白表达的影响不同组别再灌注3d时3个蛋白表达的比较:经过方差分析4个组总体间比较差别有统计学意义（P<0.01）,经两两比较,模型组阳性面积显着低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓组阳性面积显着高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组阳性面积显着高于模型组,益气活血通络法组显着高于补肾生髓法组,差别均具有统计学意义（P<0.01）;不同组别再灌注7d时3个蛋白表达的比较:4个组比较差别总体有统计学意义（P<0.01）,经两两比较,模型组阳性面积显着低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组阳性面积显着高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组阳性面积显着高于模型组,差别均有统计学意义（P<0.01）,益气活血通络法组和补肾生髓法组无明显差异（P>0.05）;不同组别再灌注14d时3个蛋白表达的比较:4个组比较,总体间差别有统计学意义（P<0.01）,经两两比较,模型组阳性面积显着低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组阳性面积显着高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组阳性面积显着高于模型组,补肾生髓法组显着高于益气活血通络法组,差别均有统计学意义（P<0.01）;对组内不同时间点3个蛋白在额顶叶皮质区阳性面积比较采用单变量重复测量方差分析,假手术组、模型组、益气活血通络法组、补肾生髓法组不同时间比较差别均无统计学意义（P>0.05）,平均吸收光密度均无统计学意义（P>0.05）。（2）两种中医治法对模型大鼠额顶叶皮质区SCF和C-kit蛋白表达的影响在额顶叶皮质区,不同组别再灌注3d时SCF和C-kit表达的比较:经过方差分析4个组总体间比较差别有统计学意义（P<0.01）,经两两比较,模型组显着低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组显着高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组显着高于模型组,益气活血通络法组显着高于补肾生髓法组,差别均具有统计学意义（P<0.01）;不同组别再灌注7d时SCF和C-kit表达的比较:组间比较差别总体有统计学意义（P<0.01）,经两两比较,模型组显着低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组显着高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组显着高于模型组,补肾生髓法组显着高于益气活血通络法组,差别均具有统计学意义（P<0.01）;不同组别再灌注14d时SCF和C-kit表达的比较:组间比较,总体间差别有统计学意义（P<0.01）,经两两比较,模型组显着低于假手术组,益气活血通络法组、补肾生髓法组显着高于假手术组,益气活血通络法组和补肾生髓法组显着高于模型组,补肾生髓法组显着高于益气活血通络法组,差别均具有统计学意义（P<0.01）;对组内不同时间点SCF和C-kitt比较采用单变量重复测量方差分析,假手术组、模型组、益气活血通络法组、补肾生髓法组不同时间比较差别均无统计学意义（P>0.05）。结论两种治法可通过促进CD34、VEGF以及Ang-1蛋白的表达,从而调节SCF/C-kit信号通路,促进脑缺血后血管再生,有利于局灶性脑缺血再灌注后受损脑组织的损伤的修复。
韩义皇[8]（2017）在《益气活血法对MCAO-R大鼠海马神经干细胞增殖分化JAK-STAT信号通路的影响》文中研究指明目的通过益气活血法效验方脑络欣通治疗脑缺血再灌注（MCAO-R）模型大鼠的实验研究,探究益气活血法对MCAO-R大鼠模型JAK-STAT信号转导通路和神经干细胞（NSCs）增殖分化的影响,重点从细胞分子层面阐述益气活血法复方脑络欣通的作用机制,通过多层面、多途径的研究进一步完善益气活血法复方脑络欣通的生物学调控网络。方法1.采用线栓法建立大脑中动脉阻塞再灌注（MCAO-R）大鼠模型。分别从整体、系统、器官、组织、细胞等层面观察和评估MCAO-R模型。具体方法包括:观察记录各组动物术前和术后7天的基本生理体征及体重变化。通过对缺血开始后5h、1d、3d、7d几个关键时间点的MCAO-R模型大鼠进行神经功能缺损评分,观察评估大鼠神经系统功能缺失情况。取正常大鼠和模型1d大鼠端脑,通过TTC染色观察脑组织大脑中动脉供血区缺血情况,计算缺血面积百分比,验证模型成模情况。通过鼠脑海马层面冰冻切片Nissl染色,观察MCAO-R模型大鼠海马锥体细胞层病理形态变化。2.通过整体、系统、器官、组织、细胞等层面观察和评估益气活血效验方脑络欣通的药效。具体方法包括:观察记录各组动物造模前及术后7天基本生理体征及体重变化。通过对造模后5h、1d、3d、7dMCAO-R模型大鼠进行神经功能缺损评分,观察评估大鼠神经系统功能恢复情况。通过TTC染色观察缺血后正常大鼠及1d、3d、7d大鼠脑组织大脑中动脉供血区缺血情况,计算缺血面积百分比、进行统计分析,验证大鼠脑缺血改善情况。通过鼠脑海马层面石蜡切片HE染色,观察MCAO-R模型大鼠海马锥体细胞层病理形态变化。3.通过免疫荧光染色检测nestin、NF-H、GFAP、Gc蛋白表达,观察给药7d大鼠海马各区神经干细胞增殖分化情况。采用信号通路PCR基因芯片按Fold-Change值>2或<-2标准筛选 JAK-STAT 通路差异表达基因（differentially expressed genes, DEGs）。WB蛋白电泳对筛选出的差异基因FCGR1α、PRLR、IFGNR1、SOCS1进行蛋白水平的验证。结果1.MCAO-R大鼠模型具有气虚血瘀症状,造模手术后前3天体重持续减轻,第4天开始逐渐增长,正常组和假手术组大鼠组间体重指数比较,术后第1、2、4、5、6、7天,组间差异有统计学意义（P≤0.05）;术后第3天组间差异有统计学意义（P≤0. 01）。模型组大鼠神经功能缺损明显,与假手术组比较差异有显着性意义。选择评分1-3分的大鼠纳入实验。TTC染色MCAO-R模型大鼠脑缺血面积在术后5h最大,随时间推移逐渐减小,与假手术组比较,各个时间点组间差异均极显着（P<0. 001）。NISSL染色观察到MCAO-R模型大鼠海马病理变化明显。2.给药组MCAO-R大鼠模型气虚血瘀症状较模型组改善快。给药组大鼠体重,在造模手术后持续增长,第3天涨幅增大,与模型组和假手术组大鼠组间体重指数比较,术后第1、3天,组间差异有统计学意义（P≤0.05）。神经功能缺损在第7天取材前与模型组相比,差异无统计学意义。造模术后第7天TTC染色显示,脑缺血面积,给药组和模型组比较,P=0.002<0. 01,差异有统计学意义。HE染色显示,模型组细胞排列散乱,锥体细胞数量减少,胶质细胞增生明显;给药组锥体细胞排列比较规则,在多个区域数量明显增多,甚至有迁移趋势,偶见胶质细胞。说明脑络欣通可能有促进锥体细胞增殖、迁移,调控胶质细胞分化的作用。2.通过JAK-STAT信号通路PCR基因芯片检测,按Fold-Change值>2或<-2标准得到以下差异表达基因:FCGR1α、PRLR、IFGNR1、SOCS1、IL10rα。WB蛋白电泳对筛选出的差异基因FCGR1α、PRLR、IFGNR1、SOCS1进行蛋白水平的验证,得到给药组PRLR蛋白与模型组有显着性差异的结果。通过免疫荧光染色检测nestin、NF-H、GFAP、Gc蛋白表达,观察到给药7天nestin、NF-H、GFAP、Gc阳性表达明显增加,各个海马区表达量有所不同。结论1.通过线栓法成功建立制作了 MCAO-R大鼠模型,为后续试验提供可靠的研究基础。2.益气活血法效验方脑络欣通中等剂量灌胃给药7天时,能够促进MCAO-R大鼠整体机能恢复、促进其神经运动功能恢复、促进其脑缺血面积减小,改善MCAO-R大鼠海马区病理改变对MCAO-R大鼠脑损伤有治疗作用。3.益气活血法效验方脑络欣通可能通过抑制MCAO-R模型大鼠JAK-STAT信号转导通路中PRLR蛋白的表达调控MCAO-R模型大鼠海马区神经干细胞的增殖分化迁移,促进脑缺血后神经功能的恢复。
周笑莉,刘忆思,陈东风,李彩霞[9]（2017）在《龟板提取物调控Otx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化的研究》文中研究表明目的探讨龟板提取物是否能够通过调控同源盒基因Otx2（orthodenticle homeobox 2）来促进神经干细胞（neural stem cells,NSCs）向多巴胺神经元的分化。方法分离培养孕14 d左右的SD胎鼠NSCs 7 d,随机设空白对照组和30μg·m L-1的龟板有效成分PTE（2B）组、龟板提取物十八酸乙酯（S6）组、4-甾酮（S9）组,诱导分化57 d,用免疫荧光法检测多巴胺酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase,TH）阳性神经元和Otx2的表达,用实时荧光定量PCR法检测Otx2的m RNA表达,蛋白质印迹法（Western Blot）检测Otx2的蛋白表达。结果与空白对照组比较,2B组、S6组和S9组Otx2和TH的荧光表达均升高（P<0.05）,S6组Otx2的m RNA表达升高（P<0.05）,S6组和S9组Otx2的蛋白表达升高（P<0.05）。结论龟板提取物可能通过调控Otx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化。
张高迎,唐巍[10]（2015）在《中医药对脑缺血后神经再生的调控作用》文中认为缺血性脑卒中（cerebral ischemic stroke,CIS）,是指各种原因引起的脑部血液供应障碍,使局部脑组织发生不可逆性损害,导致脑组织缺血缺氧性坏死,出现相应的神经损伤症状。缺血性脑卒中高发病率、高死亡率、高致残率的特点严重影响着人类的健康和生活的质量。据统计,我国每年新发脑血管病患者中缺血性卒中占
二、龟板对局灶性脑缺血后神经干细胞的作用（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、龟板对局灶性脑缺血后神经干细胞的作用（论文提纲范文）
（1）电针调控miR-210-3p经AKT/mTOR信号通路对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 主要仪器设备 |
| 1.1.3 主要试剂 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 局灶性MCAO模型制备 |
| 1.2.2 模型成功标准 |
| 1.2.3 模型剔除标准 |
| 1.2.4 动物分组 |
| 1.2.5 干预方法 |
| 1.2.6 实验观察指标与方法 |
| 1.3 统计学分析方法 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 各组大鼠神经功能缺损体征评分 |
| 2.2 各组大鼠局部脑血流量(rCBF)变化 |
| 2.3 脑组织病理学观察(HE染色) |
| 2.4 Western Blot检测AKT/p-AKT/mTOR/p-mTOR蛋白表达 |
| 2.5 RT-qPCR检测miR-210-3p/Ephrin A3及AKT/mTORmRNA表达 |
| 2.5.1 miR-210-3p的表达 |
| 2.5.2 Ephrin A3 的表达 |
| 2.5.3 AKT mRNA的表达 |
| 2.5.4 mTORmRNA的表达 |
| 2.6 微血管密度(MVD)测定 |
| 2.7 miR-210-3p与 MVD的相关性 |
| 3 讨论 |
| 3.1 实验模型建立方法及动物选择 |
| 3.2 中医学对中风的认识 |
| 3.2.1 中风的病因病机 |
| 3.2.2 针刺治则治法与选穴 |
| 3.3 血管新生与缺血性脑卒中 |
| 3.3.1 神经血管单元与缺血性脑卒中 |
| 3.3.2 AKT/mTOR信号通路与缺血性脑卒中后血管新生 |
| 3.3.3 microRNA与血管新生 |
| 3.3.4 血管新生的标志物 |
| 3.4 电针刺激对血管新生干预作用的分析 |
| 3.4.1 对实验结果的进一步分析 |
| 3.4.2 血管新生在缺血性脑卒中恢复中的意义 |
| 3.5 问题与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 电针对 MCAO 大鼠脑保护作用机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第1章 梓醇延迟给药对局灶性脑缺血大鼠神经行为学影响 |
| 引言 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.1.1 实验主要试剂 |
| 1.1.2 实验主要仪器 |
| 1.1.3 主要试剂配制 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 电凝法制备局灶性永久性脑缺血模型 |
| 1.2.3 药物干预 |
| 1.2.4 模型纳入标准 |
| 1.2.5 神经行为学评分 |
| 1.2.6 数据分析 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.3.1 电凝法制备局灶性脑缺血模型 |
| 1.3.2 脑缺血损伤模型大鼠神经功能缺失 |
| 1.3.3 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠体重的影响 |
| 1.3.4 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠Bederson评分的影响 |
| 1.3.5 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠肌力的影响 |
| 1.3.6 梓醇延迟给药对脑缺血大鼠mNSS评分的影响 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 结论 |
| 第2章 梓醇延迟给药对局灶性脑缺血大鼠缺血侧脑区神经干细胞分化作用研究 |
| 引言 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验主要试剂与材料 |
| 2.1.2 实验主要仪器 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物 |
| 2.2.2 动物分组及药物干预 |
| 2.2.3 BrdU体内标记 |
| 2.2.4 脑组织取材 |
| 2.2.5 脑组织冰冻切片 |
| 2.2.6 免疫荧光染色 |
| 2.2.7 Western Blot检测相关蛋白表达 |
| 2.2.8 免疫荧光染色图像采集与量化分析 |
| 2.2.9 数据处理 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 梓醇对脑缺血大鼠SVZ区神经干细胞的影响 |
| 2.3.2 梓醇对脑缺血大鼠SVZ区未成熟神经元的影响 |
| 2.3.3 梓醇对脑缺血大鼠缺血周围区成熟神经元的影响 |
| 2.3.4 梓醇对脑缺血大鼠缺血周围区星形胶质细胞的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第3章 梓醇对离体神经干细胞分化作用研究 |
| 引言 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 主要实验试剂及材料 |
| 3.1.2 实验主要仪器 |
| 3.1.3 主要试剂配制 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 神经干细胞的分离培养 |
| 3.2.2 神经干细胞的传代培养 |
| 3.2.3 免疫荧光鉴定NSCs |
| 3.2.4 免疫荧光鉴定NSCs增殖 |
| 3.2.5 cck-8 检测NSCs细胞活力 |
| 3.2.6 免疫荧光检测细胞分化 |
| 3.2.7 WB检测细胞分化相关蛋白表达 |
| 3.2.8 数据分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 细胞形态观察 |
| 3.3.2 神经干细胞鉴定 |
| 3.3.3 神经干细胞增殖能力测定 |
| 3.3.4 神经干细胞分化能力测定 |
| 3.3.5 梓醇对神经干细胞细胞活力影响 |
| 3.3.6 梓醇对神经干细胞分化作用影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 全文总结 |
| 创新点及意义 |
| 思考与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 神经干细胞移植治疗中枢神经系统疾病的研究现状 |
| 参考文献 |
| 硕士学位期间科研工作汇报 |
| 致谢 |
| 附:中英文缩略名词对照表 |
（3）益气活血通络法对局灶性脑缺血/再灌注大鼠rCBF及GRB7、VEGFR2蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 1 前言 |
| 2 实验一、益气活血通络法对局部脑缺血再灌注模型大鼠额顶叶皮质区GRB7、VEGFR2 蛋白表达的影响 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 动物和分组 |
| 2.1.2 实验药物与给药 |
| 2.1.3 实验器材与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 动物造模和评分 |
| 2.2.2 组织取材 |
| 2.2.3 组织处理 |
| 2.2.4 免疫组化检测 |
| 2.2.5 数据统计分析 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 益气活血通络法对脑缺血再灌注大鼠右侧额顶叶皮质区GRB7蛋白表达的影响 |
| 2.3.2 益气活血通络法对脑缺血再灌注大鼠右侧额顶叶皮质区VEGFR2蛋白表达的影响 |
| 3 实验二、益气活血通络法对局灶性脑缺血再灌注大鼠rCBF的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 动物与分组 |
| 3.1.2 实验药物与给药 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 动物造模和评分 |
| 3.2.2 rBCF检测 |
| 3.2.3 数据统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 激光多普勒检测局灶性脑缺血再灌注大鼠造模成功后10min r CBF结果 |
| 3.3.2 激光多普勒检测局灶性脑缺血再灌注大鼠模型治疗后rCBF结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 缺血性脑卒中发病病理生理机制 |
| 4.2 缺血性脑卒中的现代治疗 |
| 4.3 中医学对缺血性脑卒中的认识 |
| 4.4 缺血性脑卒中中医治法 |
| 4.5 缺血性脑卒中气虚血瘀病机 |
| 4.6 益气活血通络法 |
| 4.7 脑络欣通中药复方 |
| 4.8 SCF/C-kit信号通络与脑缺血血管再生 |
| 4.9 实验结果分析 |
| 5 总结 |
| 6 存在不足与展望 |
| 7 参考文献 |
| 8 综述 近五年中医药防治缺血性脑卒中研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
（4）益气活血通络法对局灶性脑缺血再灌注大鼠CD133、Vav1蛋白表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照表 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 药物 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验用品及耗材 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 模型复制和评分 |
| 2.3 给药 |
| 2.4 取材 |
| 2.5 缺血区局部脑血流量(rCBF)的测定与免疫组化En Vision二步法检测 |
| 2.5.1 rCBF的测定 |
| 2.5.2 免疫组化En Vision二步法检测 |
| 2.6 数据统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 益气活血通络法对大鼠脑缺血/再灌注损伤后局部脑血流量(rCBF)的影响 |
| 3.2 益气活血通络法对大鼠脑缺血/再灌注损伤后CD133蛋白表达阳性面积的影响 |
| 3.3 益气活血通络法对大鼠脑缺血/再灌注损伤后Vav1蛋白表达阳性面积的影响 |
| 讨论 |
| 1 中医学对缺血性脑卒中的认识 |
| 1.1 缺血性脑卒中与脑及五脏的关系 |
| 1.2 中医学对缺血性脑卒中病因病机的认识 |
| 1.3 中医学对缺血性脑卒中治则治法的认识 |
| 1.4 中医学对缺血性脑卒中防治的认识 |
| 1.5 益气活血通络法的选择及其代表方 |
| 2 现代医学对缺血性脑卒中的认识 |
| 2.1 缺血性脑卒中的发病机制 |
| 2.2 缺血性脑卒中的治疗 |
| 3 模型复制的评价 |
| 3.1 动物的选择 |
| 3.2 模型的复制 |
| 4 缺血性脑卒中与血管再生 |
| 5 SCF/c-kit信号通路与血管再生 |
| 6 实验结果分析 |
| 6.1 CD133与血管再生 |
| 6.2 Vav1与血管再生 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 综述 脑缺血再灌注损伤分子生物学机制及现代中医药治疗研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）电针联合康复训练通过干预Ang/Tie-2信号通路相关因子表达对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2.实验结果 |
| 2.1 五组大鼠在不同时间段下神经功能缺损体征评分比较 |
| 2.2 五组大鼠在不同时间段下局部脑血流量比较 |
| 2.3 TTC染色确定脑组织损伤区域 |
| 2.4 脑组织病理学观察 |
| 2.5 Western Blot检测Ang-1、Tie-2 蛋白的表达 |
| 2.6 RT-q PCR检测Ang-1m RNA、Tie-2m RNA的表达 |
| 2.7 免疫组化检测Ang-1、Tie-2 阳性细胞的表达 |
| 2.8 微血管密度测定 |
| 3 讨论 |
| 3.1 实验动物模型制备 |
| 3.2 传统医学领域对于脑卒中的认识 |
| 3.3 Ang/Tie-2 信号通路与血管新生 |
| 3.4 血管新生的标志物 |
| 3.5 对于实验结果的进一步分析 |
| 3.6 问题与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 针康法对脑缺血大鼠血管新生相关因子的影响 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（6）柔肝通络汤对缺血性脑损伤大鼠内源性干细胞表达的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一章 引言 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 主要试剂 |
| 2.2 主要仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 药物制备 |
| 2.3.2 实验动物 |
| 2.3.3 动物分组 |
| 2.3.4 动物给药 |
| 2.3.5 MCAO模型建立 |
| 2.3.6 模型成功判定 |
| 2.3.7 实验取材 |
| 2.4 观察内容及方法 |
| 2.4.1 神经功能缺损评分 |
| 2.4.2 BrdU、BrdU/NeuN、BrdU/GFAP免疫阳性细胞检测 |
| 2.5 统计方法 |
| 第三章 实验结果 |
| 3.1 大鼠造模情况 |
| 3.2 模型建立 |
| 3.3 大鼠神经功能缺损评分 |
| 3.4 柔肝通络汤对MCAO大鼠脑组织大脑皮质缺血区BrdU、BrdU/NeuN、BrdU/GFAP镜下表达的影响 |
| 3.4.1 大鼠BrdU单标免疫阳性细胞数比较 |
| 3.4.2 大鼠BrdU/NeuN双标免疫阳性细胞数比较 |
| 3.4.3 大鼠BrdU/GFAP双标免疫阳性细胞数比较 |
| 附图 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 线栓法制备MCAO模型 |
| 4.2 柔肝通络汤对神经功能缺损评分的影响 |
| 4.3 BrdU免疫荧光法 |
| 4.4 缺血再灌注脑损伤后柔肝通络汤对NSCs增殖分化的影响 |
| 4.5 导师对缺血性中风的理解 |
| 4.6 柔肝通络汤方解 |
| 4.7 不足与展望 |
| 第五章 实验结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（7）两种中医治法对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管再生及其SCF/c-kit信号调节通路的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 实验一 、两种中医治法对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质区CD34、Ang-1、VEGF蛋白表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 药物制备与给药 |
| 1.3 实验器械与器材 |
| 1.4 实验动物模型制作及评分 |
| 1.5 主要仪器及试剂 |
| 1.6 取材与组织处理 |
| 1.7 免疫组化检测 |
| 1.8 数据分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 两种中医治法对模型大鼠CD34蛋白表达的影响 |
| 2.2 两种中医治法对模型大鼠Ang-1蛋白表达的影响 |
| 2.3 两种中医治法对模型大鼠VEGF蛋白表达的影响 |
| 实验二 、两种中医治法对局灶性脑缺血再灌注大鼠额顶叶皮质区SCF、C-kit蛋白表达的影响 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物与分组 |
| 1.2 药物制备与给药 |
| 1.3 实验器械与器材 |
| 1.4 实验动物模型制作及评分 |
| 1.5 主要仪器及试剂 |
| 1.6 标本取材、存放 |
| 1.7 Western Blot检测方法 |
| 1.8 数据分析 |
| 2 实验结果 |
| 2.1 两种中医治法对模型大鼠SCF蛋白表达的影响 |
| 2.2 两种中医治法对模型大鼠C-kit蛋白表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 3.1 动物以及实验模型的选择 |
| 3.2 中医对缺血性中风的认识 |
| 3.3 现代医学与缺血性中风病 |
| 3.4 两种治法的选择依据 |
| 3.5 课题组前期研究基础 |
| 3.6 缺血性中风与血管再生 |
| 3.7 实验结果分析 |
| 3.8 结论 |
| 3.9 展望 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 攻读学位期间发表论文与参与课题情况 |
| 致谢 |
（8）益气活血法对MCAO-R大鼠海马神经干细胞增殖分化JAK-STAT信号通路的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 综述 |
| 综述一 益气活血方脑络欣通实验研究述评 |
| 1 模型的选择和建立 |
| 2 整体层面 |
| 3 组织器官系统层面 |
| 3.1 凝血纤溶系统及血液流变学 |
| 3.2 神经可塑性 |
| 3.3 其它 |
| 4 细胞层面 |
| 4.1 神经细胞凋亡 |
| 4.2 神经干细胞增殖分化 |
| 4.3 细胞形态学研究 |
| 4.4 其它 |
| 综述二 神经干细胞增殖分化的相关信号转导通路研究 |
| 1 NOTCH信号转导通路 |
| 2 WNT- B -CATENIN信号通路 |
| 3 PI3K-AKT信号转导通路 |
| 4 JAK-STAT信号通路 |
| 5 其它信号转导通路 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验 |
| 前言 |
| 实验一 MCAO-R大鼠模型的建立与评价 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 主要试剂、药物制备 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组和给药 |
| 2.2 MCAO-R(大脑中动脉阻塞再灌注)大鼠模型的建立 |
| 2.3 观察各组大鼠基本体征变化 |
| 2.4 神经功能评分观察大鼠神经功能变化 |
| 2.5 新鲜脑组织TTC染色观察大鼠脑缺血面积 |
| 2.6 冰冻切片NISSL染色观察MCAO-R模型大鼠大脑两侧海马病理变化 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠基本体征 |
| 3.2 各组大鼠关键时间点神经功能缺损评分 |
| 3.3 各组大鼠新鲜脑组织TTC染色 |
| 3.4 MCAO-R模型大鼠脑组织冰冻切片NISSL染色观察海马区病理形态学变化 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 实验二 益气活血方脑络欣通对MCAO-R大鼠的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 主要试剂、药物制备 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组和给药 |
| 2.2 MCAO-R(大脑中动脉阻塞再灌注)大鼠模型的建立 |
| 2.3 观察各组大鼠基本生理体征及体重变化 |
| 2.4 神经功能评分及纳入方法 |
| 2.5 新鲜脑组织TTC染色观察大鼠脑缺血面积 |
| 2.6 石蜡切片HE染色 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠基本生理体征及体重 |
| 3.2 各组大鼠关键时间点神经功能缺损评分 |
| 3.3 各组大鼠新鲜脑组织TTC染色 |
| 3.4 各组大鼠脑组织石蜡切片HE染色 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 实验三 益气活血方脑络欣通对MCAO-R模型大鼠海马神经干细胞及JAK-STAT信号转导通路的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物及分组 |
| 1.2 实验器材 |
| 1.3 主要试剂、药物制备 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组及给药 |
| 2.2 MCAO-R(大脑中动脉阻塞再灌注)大鼠模型的建立 |
| 2.3 冰冻切片免疫荧光NESTIN染色观察细胞增殖 |
| 2.4 石蜡切片免疫荧光染色观察神经干细胞增殖分化 |
| 2.5 信号通路PCR基因芯片筛选差异基因 |
| 2.5.1 抽提样品RNA |
| 2.5.2 RNA纯化 |
| 2.5.3 RNA质量检测 |
| 2.5.4 cDNA合成 |
| 2.5.5 实时定量PCR |
| 2.5.6 数据分析采用△△CT方法 |
| 2.6 WB实验从蛋白水平对差异基因进行验证 |
| 3 结果 |
| 3.1 大鼠脑组织冰冻切片免疫荧光染色 |
| 3.2 大鼠脑组织石蜡切片免疫荧光染色 |
| 3.3 JAK-STAT信号通路PCR基因芯片检测结果 |
| 3.4 WB验证结果 |
| 4 小结 |
| 5 讨论 |
| 结语 |
| 1 结论 |
| 1.1 MCAO-R模型研究结论 |
| 1.2 益气活血法效验方脑络欣通研究结论 |
| 1.3 药物作用机制研究结论 |
| 2 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（9）龟板提取物调控Otx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化的研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 动物 |
| 1.2 试剂 |
| 1.3 仪器 |
| 1.4神经干细胞的取材及增殖分化培养 |
| 1.5免疫荧光法检测NSCs标志物Nestin的表达 |
| 1.6免疫荧光法检测TH和Otx2的表达 |
| 1.7 实时荧光定量PCR法检测Otx2的m RNA表达 |
| 1.8 Western blot法检测Otx2的蛋白表达 |
| 1.9 统计学处理方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 神经干细胞的形态观察 |
| 2.2 Otx2和TH的免疫荧光表达 |
| 2.3 实时荧光定量PCR的表达 |
| 2.4 Western blot的表达 |
| 3 讨论 |
（10）中医药对脑缺血后神经再生的调控作用（论文提纲范文）
| 脑缺血后神经再生 |
| 中医药对神经再生的调控 |
| 1 中药疗法 |
| 2 针灸疗法 |
| 3 针药结合疗法 |
| 问题与展望 |
四、龟板对局灶性脑缺血后神经干细胞的作用（论文参考文献）
- [1]电针调控miR-210-3p经AKT/mTOR信号通路对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响[D]. 高云云. 安徽中医药大学, 2021(01)
- [2]梓醇延迟给药对局灶性永久性脑缺血大鼠的效应及促神经新生作用研究[D]. 邵亚丽. 西南大学, 2020(05)
- [3]益气活血通络法对局灶性脑缺血/再灌注大鼠rCBF及GRB7、VEGFR2蛋白表达的影响[D]. 李玉. 安徽中医药大学, 2020(03)
- [4]益气活血通络法对局灶性脑缺血再灌注大鼠CD133、Vav1蛋白表达的影响[D]. 雷梦南. 安徽中医药大学, 2020(03)
- [5]电针联合康复训练通过干预Ang/Tie-2信号通路相关因子表达对局灶性脑缺血大鼠血管新生的影响[D]. 童明月. 安徽中医药大学, 2020(03)
- [6]柔肝通络汤对缺血性脑损伤大鼠内源性干细胞表达的影响[D]. 及晓梦. 湖南中医药大学, 2019(02)
- [7]两种中医治法对局灶性脑缺血再灌注大鼠血管再生及其SCF/c-kit信号调节通路的影响[D]. 范婧婧. 安徽中医药大学, 2018(01)
- [8]益气活血法对MCAO-R大鼠海马神经干细胞增殖分化JAK-STAT信号通路的影响[D]. 韩义皇. 北京中医药大学, 2017(02)
- [9]龟板提取物调控Otx2基因促进神经干细胞向多巴胺神经元分化的研究[J]. 周笑莉,刘忆思,陈东风,李彩霞. 中药新药与临床药理, 2017(02)
- [10]中医药对脑缺血后神经再生的调控作用[J]. 张高迎,唐巍. 中医药临床杂志, 2015(10)